크로마토그래피 피크 수에 따라 최소 성분 수가 결정됩니다.

시간

머무름 부피: 크로마토그래피에서 성분을 제거하는 데 필요한 이동상의 부피

상대적 보유 가치

정성적 분석

액체 크로마토그래피

가스 크로마토그래피

초임계 유체 크로마토그래피

흡착 크로마토그래피: 구성 요소는 고정상에서 서로 다른 흡착 능력을 가집니다.

분포 크로마토그래피: 고정 용액에서 성분의 용해도(분할 계수)가 다릅니다.

이온 교환 크로마토그래피: 성분은 이온 교환체에 대해 서로 다른 친화성을 가집니다.

크기 배제 크로마토그래피: 다공성 고정상에 다양한 크기의 분자를 선택적으로 침투

친화성 크로마토그래피: 고정상(고체화된 분자)에 대한 높은 특이 친화성을 갖는 다양한 성분의 분리(일반적으로 단백질 분리에 사용됨)

컬럼 크로마토그래피

평면 크로마토그래피

클래식 크로마토그래피: 컬럼 크로마토그래피, TLC

최신 크로마토그래피: GC, HPLC, SFC, CE

클래식 액체 크로마토그래피

현대 액체 크로마토그래피

흡착 : 고체물질의 표면에 용질이 집중되는 현상

흡착구조 : 표면에 흡착중심이 많은 다공성 물질

일반적으로 사용되는 흡착제

흡착 활성

흡착의 원인

흡착 평형

고려사항

용출(Elution) : 이동상 분자와 분리된 물질의 분자가 흡착제 표면의 활성 흡착 중심을 차지하기 위해 경쟁하는 과정이 본질입니다.

분리되는 구성 요소의 극성

분리된 혼합물의 상대적 극성

용리액의 극성

S 및 M 선택 원칙

용어

TLC

일반적인 용어

운영과정

이동상

고정상

적용범위

이동상 전처리: 불순물 제거, 탈기

고압 주입 펌프(코어)

경사 용출 장치

6방향 분사 밸브

주입방법

가드 컬럼: 시료의 불용성 입자가 분석 컬럼으로 들어가는 것을 방지하고 프리 컬럼에 강하게 잔류하는 성분을 차단합니다.

크로마토그래피 컬럼: 사용 중 이동상의 방향은 컬럼의 화살표 방향과 일치해야 합니다.

칼럼 오븐

컬럼 평가

만능인

선택성

배포 메커니즘: 극성 차이

중간 분자량의 지용성 성분, 이성질체에 적합

유출 순서: 극성이 낮은 구성 요소가 먼저 나옵니다.

분리 메커니즘: 구성 요소는 두 단계에서 서로 다른 용해도를 갖습니다.

고정상: 캐리어➕고정 솔루션 화학적 결합상: 고정액 손실 문제 해결

파티션 크로마토그래피 분류

고정상: 이온 교환기 이동상: 완충액 원리: 이온과 이온교환기 사이의 힘은 다르다 용도 : 아미노산, 핵산 등

고정상: 겔(특정 크기의 간격 분포 포함) 이동상: 시료를 용해하고 고정상을 적실 수 있으며 점도가 낮습니다. 분리 원리: 분자 크기 작은 분자는 가장 느리게 용리되는 반면, 큰 분자는 제외되어 가장 빠르게 용리됩니다. 별도의 거대분자

실리카겔

화학 결합 단계

요구사항: 고순도, 우수한 화학적 불활성 검출기와 일치시키려면 시료에 적합한 용해도 점도가 낮고 비등점이 적절하며 순도가 높습니다. 낮은 독성

극성

이동상 극성 및 선택성 조정: 순상 : 포화알칸을 기본용매로 하고 디에틸에테르, 디클로로메탄, 클로로포름 등을 첨가하여 극성을 조절한다. 역상: 물을 기본 용매로 하고 메탄올, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란을 첨가합니다.

수정자 추가

등용매 용리: 이동상 극성, 이온 강도, 일정한 pH 소수의 성분을 분석하고 성분 특성의 차이가 거의 없는 분석에 적합합니다. 극성 범위가 넓고 성분이 많은 복잡한 시료에는 적합하지 않습니다.

기울기 용리: 이동상 구성이 프로그램에 의해 변경됩니다. 성분이 많고 극성 차이가 큰 복잡한 시료 분석에 적합합니다. 단점: 기준선 드리프트, 재현성 감소

고정상

원칙

열

사용

높은 선택성

고감도: 추적 분석

높은 컬럼 효율성

빠른 분석

광범위한 응용 분야

순수한 시료가 없으면 미지의 물질에 대한 정성, 정량 분석이 불가능합니다.

끓는점이 높고 열 안정성이 낮고 부식성이 높으며 반응성이 높은 물질에는 적합하지 않습니다.

운반 가스: 고순도 수소, 질소, 헬륨, 공기

정화 장치

일정한 유속

샘플링 장치 및 기화실

주입방법

열

칼럼 오븐

크로마토그래피 컬럼의 선택성, 분리 효율성, 검출기 감도 및 안정성에 직접적인 영향을 미칩니다.

기화실: 액체 시료의 즉각적인 기화 보장

검출기 챔버: 분리된 구성 요소가 통과할 때 응축되지 않도록 보장

크로마토그래피 컬럼 챔버: 분리에 필요한 온도를 정확하게 제어합니다.

고체 고정상(고체 흡착제, 기체-고체 흡착 크로마토그래피)

액체정상(담체고정액, 기액분포크로마토그래피)

열전도도 검출기 TCD

전자 포획 검출기 ECD

수소화염 이온화 검출기 FID

화염 광도 검출기 FPD

질소 인 검출기 NPD

범용 유형:TCD

선택형: ECD, FID

노이즈N

경향

민감도(응답값, 응답값)

검출 검출 한계(감도) D

라인 유형 범위(정량 분석과 밀접하게 관련됨)

N과 d가 작을수록 안정성이 좋아집니다. 감도가 높을수록 검출 한계가 작아지고 성능이 향상됩니다. 이상적인 검출기: 높은 감도, 작은 검출 한계, 빠른 응답, 넓은 선형 범위 및 우수한 안정성

고정액 선택

비율(고정액 대 담체의 질량 비율)

컬럼 길이 선택

원칙: 만족스러운 분리능과 적절한 분석 시간을 전제로 컬럼 온도를 가능한 한 낮게 유지하십시오.

높은 컬럼 온도: 성분이 빠르게 휘발되고, 기체상 Dm이 증가하고, K가 감소하고, 머무름 시간이 짧고, 분리능이 감소하여 분리에 도움이 되지 않습니다.

낮은 컬럼 온도: K 증가, 고정상 선택성 향상, Dm 감소, 분리능 향상

컬럼 온도가 너무 낮으면 피크가 넓어지고 분석 시간이 지연됩니다.

고비점 300~400: 컬럼 온도가 끓는점보다 100~200 낮다. 끓는점 <300: 컬럼 온도가 평균 끓는점보다 낮고 50~낮은 평균 끓는점 범위 내에 있습니다. 가스, 가스상 탄화수소 및 기타 저비점 혼합물: 컬럼 온도가 비등점 이상입니다. 넓은 끓는점 범위, 다성분: 온도 프로그래밍

프로그래밍된 온도 상승: 사전 설정된 프로그램에 따라 컬럼 온도가 시간에 따라 선형 또는 비선형으로 증가합니다. 장점: 분리 효과 향상, 분석 주기 단축, 피크 모양 개선, 검출 감도 증가

기화 온도: 일반적으로 구성 요소의 가장 높은 끓는점보다 약간 높습니다.

검출실 온도: 컬럼 온도보다 20~50도 높거나 기화 온도와 동일

고려사항

주입량이 클수록 크로마토그래피 피크가 넓어지고 변형과 테일링이 분리에 영향을 미칩니다. 주입량이 너무 적고 검출기가 피크를 생성할 만큼 민감하지 않습니다.

최대 허용 주입량 : 기체 0.5~3ml, 액체 0.1~0.2 마이크로리터

주입 요구 사항: 빠른 속도, 기간

머무름 시간 질적

알려진 물질 피크 높이 증가 방법

표준곡선법

외부 마크 원포인트 방식

2점 출현 방법

단점: 주입량이 정확하고 일관되어야 하며 작동 조건이 안정적이어야 합니다.

보정 계수 방법

표준곡선법

내부표준법(보정계수를 알 수 없는 경우)

단점: 높은 시료 준비 요건, 까다로운 내부 표준물질 찾기

단점: 각 구성요소는 정점에 도달해야 하며 구성요소의 보정 계수를 알아야 합니다.