이중 가닥 DNA 분자에서 4-8개 염기쌍의 특정 서열을 인식합니다.

대부분의 효소의 절단 부위는 인식 서열의 내부 또는 양쪽에 있습니다.

절단 순서를 고전적인 회전 대칭 회문 구조로 식별합니다.

DNA를 절단하여 5' 인산기와 3' 수산기를 포함하는 말단을 생성합니다.

오프셋 절단은 끈끈한 끝을 생성하고, 대칭 축을 따라 절단하면 평평한 끝을 생성합니다.

대부분의 II형 효소에는 유사한 반응 조건이 필요합니다.

다중 효소 결합 효소 가수분해

불순물: 단백질, 페놀, 클로로포름, 에탄올, EDTA, SDS, NaC 등

접근하다

특정 제한 엔도뉴클레아제는 선형 DNA를 소화하는 것보다 슈퍼코일 플라스미드 DNA 또는 바이러스 DNA를 절단하는 데 몇 배 더 많은 효소가 필요합니다.

일부 핵산 제한 엔도뉴클레아제는 제한 효소 부위를 다른 위치에서 절단하며 효율성도 크게 다릅니다.

5'->3' DNA 중합효소 활성

5'->3' 엑소뉴클레아제 활성

3'->5' 엑소뉴클레아제 활성

닉 번역: 5'->3' 엑소뉴클레아제와 중합효소 활동이 함께 작용하여 닉을 발전시킵니다.

32P 표지 DNA 프로브의 준비

출처: Escherichia coli DNA 중합효소 Ⅰ은 서브틸리신으로 처리되어 Klenow 효소인 큰 펩타이드 세그먼트의 N 말단 3분의 1을 얻습니다.

5'->3' DNA 중합효소 활성을 가지고 있습니다. 3'->5' 엑소뉴클레아제 활성을 가지고 있습니다. 5'->3' 엑소뉴클레아제 활성 상실

1||| 엔도뉴클레아제에 의해 생성된 5' 끈적끈적한 말단을 채우세요.

2||| DNA 단편의 동위원소 말단 표지

3||| cDNA 두 번째 가닥 합성

4||| 디데옥시 사슬 말단 종결 방법에 의한 DNA 서열 결정

① 5'->3' DNA 중합효소 활성 ② 3'->5' 엑소핵분해효소 활성 ③ 5'->3' 엑소뉴클레아제 활성 부족 ④ dNTP가 없으면 어느 3'-OH 말단에서도 exo-cleavage가 가능 ⑤ 한 종류의 dNTP만 있는 경우, 상보적인 뉴클레오티드가 노출되면 엑소분해가 중지됩니다. ⑥ 4개의 dNTP가 모두 존재할 때 중합 활성이 지배적입니다.

①엔도뉴클레아제에 의해 생성된 3' 끈끈한 말단을 잘라냅니다.

② DNA 단편의 동위원소 말단 표지

① 5'->3' DNA 중합효소 활성 ② 3'->5' 엑소뉴클레아제 활성 ③ 알려진 DNA 중합효소 중 가장 강한 진행성을 가짐 ④ 변형 후 디데옥시 사슬 종결법을 이용하여 긴 단편 DNA에 대한 시퀀싱 효소가 됩니다.

더 긴 DNA 단편에 대한 프라이머 확장 반응

채우기 또는 교환(변위) 반응을 통한 신속한 최종 라벨링

출처: 송아지 흉선

주형이 없는 DNA 중합효소는 3'-OH 말단에 dTNP를 무작위로 통합합니다.

벡터 또는 표적 DNA에 상보적인 동종중합체 꼬리 추가

DNA 단편의 3' 말단의 동위원소 표지

(1) RNA에 의한 cDNA 합성

(2) DNA-RNA 하이브리드 가닥에서 RNA 가닥의 양방향 절단(RNase H 활성)

(3) DNA 유도 DNA 중합 활성

AMV: 정제된 조류 골수모세포종 바이러스 유래 역전사효소(42°C에서 기능)

MMLV: E. coli의 Moloney murine leukemia virus (MMLV) 역전사효소 유전자 발현산물 (37°C에서 기능)

진핵생물 유전자의 RNA를 DNA로 전사하고 cDNA 라이브러리를 구축합니다.

5' 돌출부가 있는 DNA 단편의 3' 말단을 평가 및 라벨링하고 프로브를 준비합니다.

DNA 서열 분석을 위해 Klenow 단편을 대체합니다.

벡터 DNA의 5' 말단 인산기를 제거하여 벡터 자체의 고리화를 방지하고 재조합 속도를 향상시킵니다.

DNA와 RNA에서 5' 인산염 그룹을 제거한 다음 T4 폴리뉴클레오티드 키나아제로 최종 라벨을 붙입니다.

😋

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① 단일 가닥 DNA 또는 RNA의 엔도큐션 😋

② 내부에 틈이나 틈이 있는 이중 가닥 DNA 또는 RNA 😋

① DNA 단편의 단일 가닥 돌출부를 제거하고 끝이 뭉툭한 모양으로 만듭니다. ② cDNA 합성 시 형성된 헤어핀 구조 제거 ③ S1 nuclease protection 실험을 통한 mRNA 양 분석 ④ 성숙한 mRNA와 게놈 DNA의 혼성화는 이 효소에 의한 가수분해와 결합되어 인트론의 위치를 ​​찾을 수 있습니다 ⑤ 점진적 결실 돌연변이의 끝 부분을 다듬습니다.