fonte

Características

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Características

Plasmídeo: uma molécula de DNA circular de fita dupla, nua, de estrutura simples, que é independente dos núcleos das células eucarióticas ou do DNA nucleóide das células procarióticas e tem a capacidade de se auto-replicar.

Após a filtração, resfriar/centrifugar e retirar o sobrenadante.

Após adicionar solução de álcool 95%, objetos brancos semelhantes a fios aparecem na solução → enrolar/centrifugar com uma vareta de vidro, pegar o precipitado e secar

Identificação usando reagente de difenilamina - precipitado/filamento aparece em azul

Genes usados ​​para alterar as características das células receptoras ou obter produtos de expressão esperados, etc.

Relevante para resistência ao estresse biológico, boa qualidade, produção de produtos farmacêuticos, degradação não tóxica e enzimas industriais

Gene da proteína Bt resistente a insetos - derivado da proteína cristalina companheira Bacillus thuringiensis produzida por Bacillus thuringiensis, que pode matar lagartas do algodão

Triagem de genes alvo adequados a partir de genes relacionados com estruturas conhecidas e funções claras

Tecnologia baseada no princípio da replicação semiconservativa do DNA, que fornece vários componentes e condições de reação envolvidos na replicação do DNA in vitro e replica a sequência de nucleotídeos do gene alvo em grandes quantidades.

Temperatura alta

Fita parental de DNA

dNTP

DNA polimerase

cartilha

ATP

helicase

Estenda-se da extremidade 5' da fita filha até a extremidade 3'

transexual

Restauração

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O local onde a RNA polimerase reconhece e se liga para conduzir a transcrição do gene em mRNA

Pare a transcrição no local desejado

Identificar se as células receptoras contêm o gene alvo, selecionando assim as células que contêm o gene alvo

O gene alvo gerado pela transcrição reversa não possui íntrons, promotores e terminadores, portanto a RNA polimerase em células procarióticas não consegue reconhecer a sequência promotora de genes eucarióticos.

método

etapa

Usando a energia gerada pelo gás comprimido, o vetor de expressão DNA enrolado na superfície das partículas metálicas é direcionado para o receptor, permitindo que o gene alvo seja integrado e expresso.

A microinjeção é realizada por meio de um microinjetor para injetar o gene alvo no óvulo fertilizado do animal e, em seguida, transplantado para a trompa de Falópio ou útero da fêmea, para que possa se desenvolver em um animal com novas características.

Trate as células com Ca²⁺ para torná-las células competentes e absorver moléculas de DNA no ambiente periférico para completar a transformação

A tecnologia PCR detecta se o gene alvo está inserido no cromossomo da célula receptora

A tecnologia PCR detecta se o gene alvo foi transcrito em mRNA

A tecnologia de hibridização antígeno-anticorpo detecta se o gene alvo se traduz em uma proteína específica

O vírus com defeito genético é isolado do corpo → transformado e amplificado in vitro → transferido para o corpo (linfócitos)

O vetor que transporta o gene normal é transferido diretamente para as células do tecido do paciente (tecido pulmonar)