1. Todos os processos de preparação de amostras devem seguir procedimentos operacionais estéreis. 2. O diluente deve ser totalmente pré-aquecido a 36°C±1°C por 15min~30min antes do teste. 3. As amostras congeladas podem ser descongeladas entre 2°C e 5°C durante não mais de 18 horas, ou a uma temperatura não superior a 45°C durante não mais de 15 minutos. 4. Amostras sólidas e semissólidas: Pese 25g da amostra usando procedimentos assépticos, coloque-a em um frasco estéril contendo 225 mL de diluente (5 a 10 esferas de vidro estéreis estão predefinidas no frasco) e agite com um oscilador 2 vezes. , 30 segundos de cada vez, para preparar uma solução homogênea de amostra 1:10. 5. Amostras líquidas: Para amostras líquidas, agite-as bem e, em seguida, use um canudo estéril para retirar 25 mL da amostra e coloque-a em um frasco estéril contendo 225 mL de diluente (5 a 10 esferas de vidro estéreis estão predefinidas no frasco) . Use um oscilador para agitar duas vezes, 30 segundos de cada vez, para preparar uma solução homogênea de amostra 1:10.

1. Use uma pipeta ou micropipeta estéril de 1mL para absorver 1mL da solução homogênea da amostra 1:10 e injete-a lentamente ao longo da parede do tubo em um tubo de ensaio estéril contendo 9 mL de diluente (observe que a ponta da pipeta ou ponta da micropipeta não é Tocar no diluente), use um oscilador para agitar o tubo de ensaio 3 vezes, 10 segundos de cada vez, para preparar uma solução homogênea de amostra 1:100. 2. Pegue outra pipeta estéril de 1mL ou ponta de micropipeta e faça incrementos de 10 vezes na homogeneização da amostra de acordo com a sequência de operação acima. Para cada diluição incremental, use uma pipeta ou ponta de pipeta estéril de 1mL.

Número total de bactérias lácticas

Contagem de bifidobactérias

Contagem de Streptococcus thermophilus

Contagem de lactobacilos

Inclui contagens apenas para Bifidobacterium spp.

Exemplos de espécies de Lactobacillus e meios de cultura utilizados para detecção de diferentes itens

1. Selecione uma placa com contagem de colônias entre 30 UFC e 300 UFC e sem colônias espalhadas para contar o número total de colônias. Para placas com menos de 30 UFC, registre o número específico de colônias, e para placas com mais de 300 UFC, registre o número de colônias como sendo demais para contar. O número de colônias para cada diluição deve ser a média de duas placas. 2. Quando uma das placas tem colónias escamosas maiores a crescer, não deve ser utilizada. Em vez disso, a placa sem colónias escamosas deve ser usada como o número de colónias nessa diluição se as colónias escamosas forem inferiores a metade da placa; e a metade restante é A distribuição das colônias é muito uniforme, então você pode contar metade da placa e multiplicar por 2 para representar o número de colônias em uma placa. 3. Quando o crescimento da cadeia sem limites óbvios entre as colônias aparecer na placa, conte cada cadeia como uma colônia.

1. Se o número de colônias em apenas uma placa de diluição estiver dentro da faixa de contagem apropriada, calcule o número médio de colônias nas duas placas e multiplique o valor médio pelo fator de diluição correspondente para obter o resultado do número total de colônias por grama ou por mililitro. 2. Se o número de colónias em duas placas de diluição em série estiver dentro do intervalo de contagem apropriado, calcule de acordo com a fórmula (1): N=∑C/(n1 n2)*d Na fórmula: N —— número de colônias na amostra; ∑C —— A soma do número de colônias em uma placa (uma placa contendo uma faixa adequada de números de colônias); n1 —— O número de placas da primeira diluição (baixa razão de diluição); n2 —— O número de placas da segunda diluição (alta taxa de diluição); d —— fator de diluição (primeira diluição). 3. Se o número de colónias nas placas de todas as diluições for superior a 300 UFC, conte a placa com a diluição mais elevada. Outras placas podem ser registadas como demasiado numerosas para serem contadas. O resultado é calculado multiplicando o número médio de colónias pelo. maior fator de diluição. 4. Se o número de colônias na placa em todas as diluições for inferior a 30 UFC, o cálculo deverá ser baseado no número médio de colônias na diluição mais baixa multiplicado pelo fator de diluição. 5. Se não houver crescimento de colónias nas placas de todas as diluições (incluindo soluções originais de amostras líquidas), o cálculo será inferior a 1 multiplicado pelo fator de diluição mais baixo. 6. Se o número de colônias da placa em todas as diluições não estiver entre 30 UFC e 300 UFC, e algumas delas forem menores que 30 UFC ou maiores que 300 UFC, o número médio de colônias mais próximo de 30 UFC ou 300 UFC será multiplicado pelo fator de diluição para cálculo .

1. Quando o número de colónias for inferior a 100 UFC, deve ser arredondado de acordo com o princípio do "arredondamento" e reportado como um número inteiro. 2. Quando o número de colônias for maior ou igual a 100UFC, o terceiro dígito é arredondado usando o princípio do “arredondamento”, e os dois primeiros dígitos são tomados, e os dígitos seguintes são substituídos por 0, também pode ser expresso em 0; a forma de um expoente de 10, de acordo com o princípio do "arredondamento". Após o arredondamento, use dois algarismos significativos. 3. A amostragem por pesagem é relatada em UFC/g, e a amostragem volumétrica é relatada em UFC/mL.

Um relatório é emitido com base nos resultados da contagem de colônias e a unidade de relatório é expressa em UFC/g (mL)

Meio de cultura MRS: peptona, extrato de carne em pó e extrato de levedura em pó fornecem fontes de nitrogênio, fontes de carbono, vitaminas, minerais e outros nutrientes necessários para o crescimento bacteriano, a glicose serve como fonte de carbono fermentável, íons de magnésio e assim por diante; 80, citrato de triamônio e acetato de sódio podem promover o crescimento de bactérias lácticas e neutralizar substâncias citotóxicas, o ágar fosfato serve como coagulante;

Meio de cultura MC: peptona de soja, extrato de carne em pó e extrato de levedura em pó fornecem fontes de nitrogênio, fontes de carbono, vitaminas, minerais e outros nutrientes necessários para o crescimento bacteriano, glicose e lactose servem como carboidratos para promover o crescimento de bactérias do ácido láctico e cálcio; carbonato Neutraliza o ácido produzido pelo metabolismo bacteriano para aliviar sua toxicidade ácida para as células. O vermelho neutro serve como um indicador ácido-base, o meio de cultura contém 10g/L de carbonato de cálcio, que é uma substância insolúvel e precisa; ser bem misturado. Uma vez homogêneo, despeje no prato. Ao mesmo tempo, é normal que a placa apresente precipitado branco.

Meio MRS modificado de sal de lítio de mupirocina e cloridrato de cisteína: peptona, extrato de carne em pó e extrato de levedura em pó fornecem fontes de nitrogênio, fontes de carbono, vitaminas, minerais e outros nutrientes necessários para o crescimento bacteriano; íons manganês, íons magnésio, Tween 80, citrato de triamônio e acetato de sódio podem promover o crescimento de bactérias do ácido láctico e neutralizar substâncias citotóxicas, o ágar fosfato serve como coagulante; O sal de lítio mupirocina inibe outras bactérias do ácido láctico, exceto Bifidobacterium;