1. Todos los procesos de preparación de muestras deben seguir procedimientos operativos estériles. 2. El diluyente debe precalentarse completamente a 36 ℃ ± 1 ℃ durante 15 min ~ 30 min antes de realizar la prueba. 3. Las muestras congeladas se pueden descongelar entre 2°C y 5°C durante no más de 18 horas, o a una temperatura no superior a 45°C durante no más de 15 minutos. 4. Muestras sólidas y semisólidas: pesar 25 g de la muestra mediante procedimientos asépticos, colocarla en un frasco estéril que contenga 225 ml de diluyente (en el frasco hay preestablecidas de 5 a 10 perlas de vidrio estériles) y agitar con un oscilador 2 veces. , 30 segundos cada vez, para hacer una solución homogénea de muestra 1:10. 5. Muestras líquidas: para muestras líquidas, agítelas bien y luego use una pajita esterilizada para tomar 25 ml de la muestra y colóquela en una botella esterilizada que contenga 225 ml de diluyente (en la botella hay preestablecidas de 5 a 10 perlas de vidrio esterilizadas). Utilice un oscilador para agitar dos veces, 30 segundos cada vez, para preparar una solución homogénea de muestra 1:10.

1. Utilice una pipeta o micropipeta estéril de 1 ml para absorber 1 ml de la solución homogénea de muestra 1:10 e inyéctela lentamente a lo largo de la pared del tubo en un tubo de ensayo estéril que contenga 9 ml de diluyente (tenga en cuenta que la punta de la pipeta o micropipeta No toque el diluyente), use un oscilador para agitar el tubo de ensayo 3 veces, 10 segundos cada vez, para preparar una solución homogénea de muestra 1:100. 2. Tome otra pipeta o punta de micropipeta estéril de 1 ml y realice incrementos de 10 veces en la homogeneización de la muestra de acuerdo con la secuencia de operación anterior. Para cada dilución incremental, utilice una pipeta o punta de pipeta estéril de 1 ml.

Número total de bacterias del ácido láctico.

Recuento de bifidobacterias

Recuento de Streptococcus thermophilus

recuento de lactobacilos

Incluye recuentos únicamente de Bifidobacterium spp.

Ejemplos de especies de Lactobacillus y medios de cultivo utilizados para la detección de diferentes elementos.

1. Seleccione una placa con un recuento de colonias entre 30 UFC y 300 UFC y sin colonias en expansión para contar el número total de colonias. Para placas con menos de 30 UFC, registre el número específico de colonias y para placas con más de 300 UFC, registre el número de colonias como demasiadas para contarlas. El número de colonias para cada dilución debe ser el promedio de dos placas. 2. Cuando una de las placas tiene colonias escamosas más grandes en crecimiento, no se debe usar. En su lugar, se debe usar la placa sin colonias escamosas como el número de colonias en esa dilución si las colonias escamosas son menos de la mitad de la placa; y la mitad restante es La distribución de colonias es muy uniforme, por lo que puedes contar la mitad de la placa y multiplicar por 2 para representar el número de colonias en una placa. 3. Cuando aparezca en la placa un crecimiento de cadena sin límites obvios entre colonias, cuente cada cadena como una colonia.

1. Si el número de colonias en una sola placa de dilución está dentro del rango de recuento apropiado, calcule el número promedio de colonias en las dos placas y luego multiplique el valor promedio por el factor de dilución correspondiente para obtener el resultado del número total de colonias por gramo o por mililitro. 2. Si el número de colonias en dos placas de dilución en serie está dentro del rango de recuento apropiado, calcule según la fórmula (1): N=∑C/(n1 n2)*d En la fórmula: N——número de colonias en la muestra; ∑C——La suma del número de colonias en una placa (una placa que contiene un rango adecuado de números de colonias); n1——El número de placas de la primera dilución (factor de dilución bajo); n2——El número de placas de la segunda dilución (alta proporción de dilución); d——factor de dilución (primera dilución). 3. Si el número de colonias en las placas de todas las diluciones es superior a 300 UFC, cuente la placa con la dilución más alta. Otras placas pueden registrarse como demasiado numerosas para contar. El resultado se calcula multiplicando el número promedio de colonias por el. factor de dilución más alto. 4. Si el número de colonias en la placa en todas las diluciones es inferior a 30 UFC, el cálculo debe basarse en el número promedio de colonias en la dilución más baja multiplicado por el factor de dilución. 5. Si no hay crecimiento de colonias en las placas de todas las diluciones (incluidas las soluciones originales de muestras líquidas), el cálculo será inferior a 1 multiplicado por el factor de dilución más bajo. 6. Si el número de colonias en placa en todas las diluciones no está entre 30 UFC y 300 UFC, y algunas de ellas tienen menos de 30 UFC o más de 300 UFC, el número promedio de colonias más cercanas a 30 UFC o 300 UFC se multiplicará por el factor de dilución para el cálculo. .

1. Cuando el número de colonias sea inferior a 100 UFC, se redondeará según el principio de "redondeo" y se informará como un número entero. 2. Cuando el número de colonias es mayor o igual a 100CFU, se redondea el tercer dígito usando el principio de "redondeo", y se toman los dos primeros dígitos, y los siguientes dígitos se reemplazan por 0 también se puede expresar en; la forma de un exponente de 10, según el principio de "redondeo". Después del redondeo, utilice dos cifras significativas. 3. El muestreo de peso se informa en UFC/g y el muestreo volumétrico se informa en UFC/mL.

Se emite un informe basado en los resultados del recuento de colonias y la unidad de informe se expresa en UFC/g (mL).

Medio de cultivo MRS: la peptona, el polvo de extracto de carne y el polvo de extracto de levadura proporcionan fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, vitaminas, minerales y otros nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano; la glucosa sirve como fuente de carbono fermentable, iones de magnesio, etc.; 80, el citrato de triamonio y el acetato de sodio pueden promover el crecimiento de bacterias del ácido láctico y neutralizar sustancias citotóxicas; el agar sirve como tampón como coagulante;

Medio de cultivo MC: la peptona de soja, el polvo de extracto de carne y el polvo de extracto de levadura proporcionan fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, vitaminas, minerales y otros nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano, la glucosa y la lactosa sirven como carbohidratos para promover el crecimiento de las bacterias del ácido láctico y el calcio; carbonato Neutraliza el ácido producido por el metabolismo bacteriano para aliviar su toxicidad ácida para las células. El rojo neutro sirve como indicador ácido-base y desempeña un papel coagulante. El medio de cultivo contiene 10 g/l de carbonato de calcio, que es una sustancia insoluble y necesita; Quede bien mezclado. Una vez homogéneo, verter en el plato. Al mismo tiempo, es normal que la placa tenga un precipitado blanco.

Medio MRS modificado de sal de litio de mupirocina y clorhidrato de cisteína: peptona, extracto de carne en polvo y extracto de levadura en polvo proporcionan fuentes de nitrógeno, fuentes de carbono, vitaminas, minerales y otros nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano. Elementos de glucosa como fuente de carbono fermentable; los iones de manganeso, iones de magnesio, Tween 80, citrato de triamonio y acetato de sodio pueden promover el crecimiento de bacterias del ácido láctico y neutralizar sustancias citotóxicas; el agar sirve como tampón como coagulante; La sal de litio de mupirocina inhibe otras bacterias del ácido láctico, excepto Bifidobacterium; el clorhidrato de cisteína actúa como agente reductor.