Wondershare EdrawMind
Галерея диаграмм связей клиническая иммунология
- 4
клиническая иммунология
К знаниям для экзамена на получение промежуточного профессионального звания в области медицинского тестирования относятся моноклональные антитела, реакции агглютинации, аутоиммунные заболевания, иммунопролиферативные заболевания, реакции преципитации и т. д.
Отредактировано в 2024-01-14 00:56:14
- Рекомендовано вам
- Структура
Промежуточный тест программного обеспечения «Инженер по управлению проектами системной интеграции» - Глава 6 «Общее управление проектом» (2)
- 2
Экзамен по программному обеспечению среднего уровня «Инженер по управлению проектами системной интеграции» - Глава 7 «Управление содержанием проекта» (2)
- 2
«Инженер по управлению проектами системной интеграции» Глава 8 Управление ходом проекта (1)
- 1
клиническая иммунология
Введение
Введение
Иммунная функция
защита
Устранить патогенные микроорганизмы
Усиливать
реакция гиперчувствительности
ослабить
иммунодефицитная болезнь
иностранный
самостабилизирующийся
Удаление поврежденных или стареющих клеток
Усиливать
аутоиммунное заболевание
Невозможно использовать самостоятельно
монитор
Устранение мутировавших или аберрантных злокачественных клеток
ослабить
злокачественная опухоль
Противоопухолевый
клетка
клетки, полученные из лимфоидных клеток-предшественников
NK-клетки
Клетки, играющие ключевую роль в остром воспалении
нейтрофилы
клетки, которые могут вызывать острые аллергические реакции
базофилы
Клетки с функцией совместного удаления иммунных комплексов из кровообращения.
красные кровяные клетки
иммунная реакция
Ряд реакций, возникающих при стимуляции антигенами.
Цель выделения или расщепления антигена
особенность
Определить свое и не свое
специфика
Память
Разнообразие, толерантность, саморегуляция
Классификация
врожденный иммунитет
Также известен как врожденный иммунитет, неспецифический иммунитет.
первая линия защиты
тканевый барьер
Кожа и слизистые оболочки
Функции
Первые дни
быстрый
врожденный
неспецифический
адаптивный иммунитет
Также известен как приобретенный иммунитет, специфический иммунитет.
процесс
идентифицировать
Антигенпрезентирующие клетки (АПК)
Признать, проглотить, деградировать
идентифицировать
проглотить
проглотить в желудок
деградация
расщепляется на антигенные пептиды
Представлять на рассмотрение
высвобождается после разложения
Представление информации об антигене
К Т-хелперам и родственным лимфоцитам
активация
Т, В-клетки
Процесс активации, пролиферации и дифференцировки после получения сигналов антигенной стимуляции.
прямая стимуляция
Стимуляция презентации после APC
В-клетки
Плазматическая клетка
Гуморальный иммунитет
Полный гуморальный иммунитет с помощью фагоцитов.
Т-клетки
Эффекторные клетки (Т-клетки-киллеры)
клеточный иммунитет
Этап эффекта
Плазматическая клетка
секретировать антитела
тимусзависимые клетки
При активации В-клеток
Нужна помощь Т-клеток-помощников
Т-клетки
Т-хелперы (Th-клетки)
секретировать цитокины
Т-клетки-киллеры (CTL)
Оказывать цитотоксическое действие
клетки-мишени
опухолевые клетки
клетки, инфицированные бактериями
пересаженные органы
ячейки памяти
После пролиферации и дифференцировки небольшое количество Т-клеток и В-клеток
Эффекторные функции непосредственно не выполняет.
Действующий на
иммунный ответ снова
Не требуется этап активации
Вырабатывать антитела напрямую
первичный иммунный ответ
Характеристики продукции антител
антитела низкой аффинности
Искусственный активный иммунитет и искусственный пассивный иммунитет.
искусственный активный иммунитет
Вакцинация вакциной (антигеном)
искусственный пассивный иммунитет
Иммунная сыворотка (антитела), лимфокин
например, столбняк
Нет необходимости стимулировать
Иммунитет немедленно
иммунные ткани и органы
система
иммунный орган
Иммунные клетки
иммунные молекулы
иммунный орган
центральный иммунный орган
Место, где иммунные клетки производятся, дифференцируются и созревают.
костный мозг
важный кроветворный орган
Место рождения клеток крови и лимфоцитов (Т, В)
В-клетки
зрелое место
Жидкости организма также поступают из костного мозга.
Тимус
Т-клетки
зрелое место
периферические иммунные органы
место иммунного ответа
Места идентификации и активации
рециркуляция лимфоцитов
Начальная точка, промежуточная станция и пункт назначения возвращения домой.
периферические иммунные органы
кровь
периферические иммунные органы
орган
Лимфатический узел
Самая большая сумма
селезенка
максимум
лимфоидная ткань, ассоциированная со слизистой оболочкой
миндалины, лимфатические узлы тонкой кишки, аппендикс
Иммунные клетки
Классификация
Лимфоциты
Т, В-клетки
NK-клетки
Мононуклеарно-фагоцитарные клетки
Вспомогательную роль
поздняя фаза гуморального иммунитета
ранняя стадия клеточного иммунитета
антигенпредставляющие клетки
Моноциты проникают в ткани
Это фагоциты
Лимфоциты
Т-клетки
Функция
клеточный иммунитет
общего количества лимфоцитов периферической крови
60%-80%
маркировка поверхности
CD28
выраженный в
Поверхность Т-клеток
Может взаимодействовать с CD80 на поверхности В-клеток.
Стимулировать активацию Т-клеток
CD45RO
специфичный к поверхности Т-клеток памяти антиген CD
субпопуляция
че
Функция
Стимулировать и усиливать иммунный ответ
Th1
Секретируют IL-2, IFN-r (интерферон-r), TNF-β (фактор некроза опухоли β).
Укрепление клеточного иммунитета
Th2
Секретирует ИЛ-4, 5, 6, 10
Стимулирование гуморального иммунитета
Негативно регулирует клеточные иммунные реакции
TCF-β
Негативная регуляция клеточного иммунитета
CTL
особое признание
Комплекс эндогенный антигенный пептид-молекула MHC класса I
Условия, при которых опухолевые клетки погибают
Выражает факторы MHC класса I
Специфическое уничтожение клеток-мишеней
В-клетки
Функция
Гуморальный иммунитет
общего количества лимфоцитов периферической крови
8%-15%
маркировка поверхности
mIgM = u-цепочечный Ig
CD80
выраженный в
активированная поверхность В-клеток
Взаимодействует с CD28 на поверхности Т-клеток.
Стимулировать активацию Т-клеток
CD21
Молекулы CD на поверхности зрелых В-клеток
Может связываться с вирусом Эпштейна-Барра
В2-клетки
Основные В-клетки периферической крови
Первичная клетка, осуществляющая гуморальный иммунитет
клетки В1
Аутоиммунные заболевания и B-клеточные опухоли тесно связаны с иммунной регуляцией организма.
Тип распознанного антигена
полисахарид
Естественные клетки-киллеры (NK-клетки)
Функции
неспецифический
Не требуется антигенная стимуляция
Нет необходимости активировать
Непосредственно убивать клетки-мишени
Не ограничен молекулами MHC
Цитоплазма содержит азурофильные гранулы.
маркировка поверхности
CD56, CD16
CD56 CD3-CD16
Два старика трахаются напрямую без стимуляции
Определение активных клеток-мишеней
Активность NK-клеток человека
Клеточная линия K562
Активность NK-клеток мыши
Клеточная линия YAC
Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность
Клеточно-опосредованный: NK-клетки
ADCC
Функция уничтожения NK-клеток также требует помощи антител.
Необходимы антитела
IgG
процесс
IgG связывается с соответствующей антигенной детерминантой клетки-мишени.
NK-клетки связываются с Fc-сегментом IgG.
Активируйте NK-клетки
Высвободите перфорин, гранзимы и т. д., чтобы убить клетки-мишени.
апоптоз клеток-мишеней
Обнаружение
Активность уничтожения NK-клеток
Тест на цитотоксичность
иммунные хелперные клетки
Глоссарий
Лимфоциты
Особенно Т-клетки
Активация требует участия нелимфоцитов.
Классификация
Мононуклеарно-фагоцитарные клетки
Дендритные клетки
Мононуклеарно-фагоцитарные клетки
большие фагоциты
Моноциты в крови
Макрофаги в тканях
Поверхность содержит рецепторы-мусорщики, TcrR, TLR, рецепторы комплемента.
Нет рецептора распознавания антигена
Поскольку макрофаги неспецифичны
мелкие фагоциты
нейтрофилы
маркировка поверхности
Мононуклеарно-фагоцитарные клетки
CD14
нейтрофилы
CD33
Дендритные клетки
Нет фагоцитарной способности
Обладает сильной способностью презентации антигена.
Антигенпрезентирующие клетки (АПК)
важные отметки на поверхности
Антиген MHC класса II
После активации макрофагов высокие уровни
Уровни экспрессии макрофагов в состоянии покоя низкие.
На постоянной основе
Мононуклеарно-фагоцитарные клетки
Дендритные клетки
Первично представляющие клетки первичного иммунного ответа
В-клетки
Активация не требуется
Основные представляющие клетки иммунного ответа снова
Неполная занятость
Эндотелиальные клетки
Эпителиальные клетки
активированные Т-клетки
должен быть активирован
Выделение и сохранение иммунных клеток
разделение
Выделение мононуклеарных клеток
Разделительная жидкость фиколла
Метод градиентного центрифугирования одинарной плотности
Есть только одна плотность, только один слой (средний слой) после центрифугирования.
Одноядерное тоже здесь
Изолировать мононуклеарные клетки
Лимфоциты
одноядерный
слоистый
тромбоциты, плазменный слой
Слой мононуклеарных клеток (среда для разделения фиколла)
гранулоциты, слой эритроцитов
Диапазон удельного веса
мононуклеарные клетки
1,075-1,090
многоядерные гранулоциты
Около 1.092
тромбоциты
1,030-1,035
Выделение лимфоцитов
Адгезионный метод, метод фильтрации на адсорбционной колонке
принцип
Мононуклеары могут активно прикрепляться к стеклу, пластику, нейлоновой вате, хлопковому волокну и декстрановому гелю.
Удаление моноцитов из суспензии
Получить чистую популяцию лимфоцитов
метод магнитного притяжения
Мононуклеус может фагоцитировать частицы железа.
Метод разделения Перколла
центрифугирование с непрерывным градиентом плотности
слоистый
мертвые клетки, тромбоциты, плазма
Моноциты (верхний слой)
Лимфоциты (нижний слой)
гранулоциты, слой эритроцитов
Выделение Т- и В-клеток
Метод седиментации с помощью электронной розетки
Т-клетки имеют рецепторы эритроцитов овцы (рецептор E/рецептор CD2).
Т-клетки
Метод седиментации розетки ЭА
В-клетки имеют рецепторы IgG Fc.
Может связываться с Fc-сегментом иммуноглобулина IgG.
В-клетки
Выделение подмножеств Т-клеток
принцип
По характеристикам соответствующих клеток и различным поверхностным маркерам
че
CD4
CTL
CD8
Метод связывания и разделения аффинных пластин
Метод разделения магнитных микросфер
Метод разделения клеточных сепараторов, активируемых флуоресценцией
сохранять
Длительная консервация
Криогеника жидкого азота
-196
Защитный агент
диметилсульфоксид
Анализ жизнеспособности изолированных клеток
Посмотрите, есть ли у него какая-либо функция
Проверьте функции перед сохранением
окраска трипановым синим
В том числе проверка того, жива или мертва сперма
трипановый синий
Неповрежденная клеточная мембрана, непроницаемая для живых клеток.
Живые клетки не окрашиваются
окрашивание мертвых клеток
синий
Обнаружение следов на поверхности
Метод сенсибилизированных антителами клеточных розеток
Электронная гирлянда
Э.А. Гарланд
Иммуноцитохимия
Антитела, меченные ферментами, связываются со специфическими рецепторами на клетках.
Процент окрашенных клеток, наблюдаемых под обычным микроскопом
Иммунофлуоресценция
Антитела, меченные флуоресцеином, связываются со специфическими рецепторами на клетках.
Наблюдение с помощью флуоресцентного микроскопа за процентом флуоресцентных клеток
проточной цитометрии
Функциональное тестирование лимфоцитов
Тестирование функции Т-клеток
Тест на пролиферацию Т-лимфоцитов/трансформацию лимфобластов (тест in vitro) (тест на трансформацию PHA-лимфоцитов)
принцип
После стимуляции Т-клеток митогенами или антигенами in vitro
Увеличение внутриклеточного синтеза белка и нуклеиновых кислот.
Увеличение размера, усиление синтеза ДНК в ядре и РНК в цитоплазме.
Увеличение цитоплазмы
Появляется кавитация
Свободный ядерный хроматин
Ядрышки очевидны
вернуться в лимфобласт
материнская целлизация
Превратился обратно в мать, чтобы размножаться.
раздражители
неспецифический митоген
Фитогемагглютинин (ФГА)
Конканавалин А (КонА)
Фитолакка американская (PWM)
специфический антиген
Производное очищенного белка (PPD) микобактерии туберкулеза
Столбнячный анатоксин
Стимулировать пролиферацию Т-клеток
опухолевый антиген
аллогенные клетки
Фитогемагглютинин (ФГА)
Стимулировать пролиферацию В-клеток
Вирус Эпштейна-Барра
Одновременно стимулирует пролиферацию Т- и В-клеток.
Производное очищенного белка (PPD) микобактерии туберкулеза
Метод обнаружения
Морфологическое исследование
Метод внедрения 3H-TdR (радионуклидный метод)
Активированные лимфоциты используют предшественники для синтеза ДНК.
тимидин, меченный 3H
В зависимости от количества смешивания
Анализ Т-клеточной цитотоксичности
принцип
Когда сенсибилизированные Т-клетки снова встречают соответствующий антиген клетки-мишени
Доказано разрушение и лизис клеток-мишеней.
Клиническое применение
Оценить иммунный уровень клеток организма
В частности, измерение способности CTL у опухолевых пациентов убивать опухолевые клетки.
Определить прогноз и наблюдать лечебный эффект
Тестирование in vivo
принцип
После того, как нормальный организм выработал клеточный иммунитет к определенному антигену,
Сделайте кожный тест с тем же антигеном.
положительная реакция гиперчувствительности замедленного типа
метод
Туберкулиновый тест (OT/PPD)
Подкожная вакцинация
2-3 дня спустя
покраснение, отек, волдыри
>20 мм
Доказательства туберкулезной инфекции
Если у больного диагностирован туберкулез
ППД отрицательный
Демонстрирует снижение клеточной иммунной функции.
Клиническое применение
Обладает ли он способностью к специфическому клеточному иммунному ответу на определенный антиген?
Клеточный иммунный статус
Диагностика некоторых патогенных микробных инфекций (туберкулез, проказа)
Диагностика заболеваний клеточного иммунодефицита
Определить прогноз заболевания
Функциональное тестирование В-клеток
Анализ пролиферации B-клеток
принцип
То же, что и анализ пролиферации Т-клеток.
раздражители
Мышиные В-клетки
Бактериальный липополисахарид (ЛПС)
В-клетки человека
Золотистый стафилококк и антитела анти-IgM с SPA
СПА
Стафилококковый белок А
Тест на гемолитические бляшки
Способность В-клеток вырабатывать антитела
принцип
Использование эритроцитов овцы (SRBC)
Иммунизированные мыши
Удалить селезенку мыши
Приготовление суспензии спленоцитов
Внутри находятся плазматические клетки
Приготовление чашек с агаром, содержащим SRBC.
Добавьте суспензию клеток селезенки в планшет.
Если вырабатываются антитела против SRBC, окружающая область становится сенсибилизированной.
При участии дополнения
Распустить SRBC
Образование гемолитических бляшек, видимых невооруженным глазом.
процесс
клиническое значение
В центре каждой бляшки находится клетка, образующая антитела.
Количество пластинок
Количество антителообразующих клеток
размер таблички
Сколько антител вырабатывает каждая клетка?
обратный тест на гемолитические бляшки
Определить количество клеток, продуцирующих антитела
Иммунно-связанный тест (ELISPOT)
ГОРШОК
смысл пятен
приложение
Тестирование in vitro
специфические антитела В-клеток
Количество секретируемых антител
Т-клетки, секретирующие цитокины
Может обнаруживать клетки, секретирующие антитела
Он также может определить количество секретируемых антител.
Функциональный тест фагоцитарных клеток
Функциональный тест нейтрофилов
Функциональный тест хемотаксиса
Метод проницаемости фильтрующей мембраны (метод камеры Бойдена)
тест окна кожи
Внутриклеточная бактерицидная способность
Тест на восстановление нитросинего тетразолия (NBT)
Положительный показатель нормальных людей
5%-10%
Уровень позитивности значительно увеличился
системная бактериальная инфекция
Фагоцитоз и метаболическая активность
Хемилюминесцентный метод
Вещества, способные повысить светоотдачу
Люминол
Функциональный тест макрофагов
Испытание на очистку от частиц углерода
Фагоциты могут поглощать частицы углерода
иммунные молекулы
Иммуноактивные клетки или родственные клетки
Секретируется для участия в иммунном ответе организма или иммунной регуляции.
Белковые и полипептидные вещества
Классификация
Иммуноглобулин
антитело
дополнять
Цитокины
молекулы клеточной адгезии
антиген дифференцировки лейкоцитов человека
Иммуноглобулин
Иммуноглобулин (Ig)
Глобулин, имеющий химическую структуру, аналогичную молекуле антитела.
Y-образная форма
Антитела (Ат)
Глобулин, продуцируемый В-клетками, которые пролиферируют и дифференцируются в плазматические клетки после стимуляции антигеном.
Осуществление гуморальной иммунной функции
Антитела с минимальными побочными эффектами
низкомолекулярные антитела
Самый эффективный носитель терапевтических препаратов
Моноклональные антитела
Все антитела являются иммуноглобулинами.
Не все иммуноглобулины являются антителами.
например, множественная миелома
Классификация
Секретируемый (sIg)
В основном содержится в жидкостях организма
Имеют различные функции антител
Модель (миг)
Экспрессируется на поверхности В-клеток в качестве рецептора антигена.
мембранный поверхностный иммуноглобулин
химическая структура
Молекулы Ig состоят из 4 пептидных цепей.
2 идентичные тяжелые цепи (H)
цепочка γ, α, µ, δ, ε
Разные тяжелые цепи, разные типы иммуноглобулинов
2 идентичные легкие цепи (L)
К, L цепь
К:Л примерно 2:1
Два тяжелых и два легких, верхний измененный и нижний постоянный, тяжелая и постоянная классификация, легкая и постоянная классификация, легкий и тяжелый вариабельный узловой антиген
Классификация иммуноглобулинов
константная область тяжелой цепи
Типирование иммуноглобулинов
константная область легкой цепи
Антигенность константной области тяжелой цепи (CH)
IgG (γ)>IgA (α)>IgM (μ)>IgD (δ)>IgE (ε)
ФК-сегмент
Константная область (область VH)
Эпитопы изотипа иммуноглобулина
Постоянная область (CH, CL)
сайт связывания антигена иммуноглобулина
Вариабельность тяжелой цепи (H) и легкой цепи (L) (область V)
Гипервариабельная область (HVR)
В вариабельной области антитела (V-область)
сайт, который связывается с антигенным эпитопом
Также известен как область, определяющая комплементарность (CDR).
Есть 6 сайтов, которые фактически связываются с антигеном.
Классификация
IgG
главная сила
Самый высокий контент
Единственное антитело, способное проникать через плаценту
Аутоантитела, гиперчувствительные антитела II типа, вторичные антитела (вторичные антитела) при иммунологическом тестировании.
IgG1, IgG2, IgG3, IgG4
Самое высокое содержание IgG1
IgG4 не может активировать комплемент
Конвективный иммуноэлектрофорез
IgG1 и IgG2
из-за электроосмоса
Двигайтесь к катоду
IgG3 и IgG4
из-за текущего
двигаться в сторону позитива
Длительный инкубационный период
Высокая близость
первичные антитела вторичного иммунного ответа
эффект
IgM
первое марта
пентамер
Большая молекулярная масса
Макроглобулин
Самые ранние антитела, синтезированные и секретируемые в онтогенезе.
Повышение IgM в пуповинной крови новорожденных
внутриутробная инфекция
Антитела, впервые вырабатываемые после стимуляции антигеном
Уровни IgM в сыворотке повышаются во время инфекции.
недавнее заражение
Может вызывать агрегацию эритроцитов в солевой среде.
Определение группы крови (слайдовый метод)
Низкая близость
Самая сильная способность активировать комплемент
натуральные лектины
холодный агглютинин
синдром холодных агглютининов
Аутоиммунные заболевания, вызванные иммуноглобулинами IgM
IgA
пограничник
Секретируемый (sIgA)
димерная структура
Содержит J-цепочку и секреторный пластырь.
Участвуют в местном иммунитете слизистых оболочек.
первичное антитело
Наличие желудочно-кишечного тракта, бронхиального секрета, молозива, слюны, слез.
sIgA в грудном молоке улучшает местный иммунный барьер у младенцев через 4-6 месяцев после рождения
местные антитела
IgE
минимум содержания
Цитотропные антитела
Сродство тучных клеток и базофилов
Реакция гиперчувствительности I типа
увеличивать
Реакция гиперчувствительности I типа
Бронхиальная астма, аллергический ринит
неаллергические заболевания
IgE миелома
паразитарная инфекция
Получение фрагментов иммуноглобулина
ферментативный метод
Чувствительность к папаину
IgG расщепляется на 2 Fab-фрагмента и Fc-фрагмент.
Ферменты, используемые для образования Fc-фрагментов иммуноглобулинов.
Пепсин
IgG расщепляется на F(ab)2 и несколько небольших фрагментов.
подтема
Анализ иммуноглобулинов в жидкостях организма
Определение IgG, IgA, IgM
Уровень содержания г/л
Метод односторонней циркулярной иммунодиффузии.
иммунотурбидиметрия
Наиболее используемое
Иммуноферментный анализ
Определение подклассов IgG
самая низкая чувствительность
дополнять
Обзор
Дополнение (С)
Группа гликопротеинов сыворотки крови, обладающих ферментоподобной активностью и термолабильных (в основном β-глобулины).
но не фермент
Синтезируется клетками печени и макрофагами
Антигены стимулируют организм
не будет производить
система комплемента
Состав
неотъемлемые ингредиенты
С1, С2, С3, С4, С5
регуляторный белок комплемента
Состав рецептора комплемента
С3
Самый высокий контент
С2
Самое низкое содержание
Фактор D (без C2)
Самое низкое содержание
Минимальная молекулярная масса
Cq1
Самая большая молекулярная масса
Фрагмент С1
химические свойства
Сублимационной сушки
держать его активным
инактивация комплемента
56℃
30 минут
Сильная кислота и основание
Сильное потрясение
определенные добавки
Эфир
спирт этиловый
Протеаза
УФ-облучение
путь активации
C9 - это N
этап идентификации
Требуется участие иммуноглобулинов
IgM или IgG связываются с антигеном.
Активируйте C1q и C1s
стадия активации
C1s расщепляет C4 и C2
Образование конвертазы C3 (C4b2b)
Конвертаза C3 расщепляет C3
Формы конвертазы C5 (C4bC2bC3b)
Этап атаки фильма MAC
Конвертаза C5 расщепляет C5
Образование комплекса C5b67
C5b678 встроен в клеточную мембрану
N C9 введите
образуют трансмембранные поры
Внешняя вода может проникать в клетки
вызывающий лизис клеток
Во время активации комплемент расщепляется на несколько фрагментов.
более мелкие фрагменты
а
более крупные фрагменты
б
Исключение C2
больший фрагмент
C2a
меньший фрагмент
C2b
Единственный небольшой фрагмент классического пути
эффект
Антитела-хелперы оказывают цитолитический эффект.
Участвуют в защитном эффекте организма и самостабилизации.
Вызывают иммунопатологические реакции
С3а и С5а
Действует на клеточную мембрану ядер тучных клеток и базофилов.
Денуклеирует клетки с высвобождением гистамина и лейкотриенов.
Изменения в медицинской документации при анафилактоидных реакциях
анафилатоксины
Клетки Раджи
На поверхности имеется большое количество рецепторов C3b, C1q и C3d.
не смейся
Использует эти рецепторы для связывания с циркулирующими иммунными комплексами, которые связывают комплемент.
Затем добавьте радионуклид, меченный античеловеческим IgG.
Обнаруживаемые циркулирующие иммунные комплексы
Определение общей активности комплемента
Дополняющий тест на 50% гемолиз (определение CH50)
принцип
Антитела к SRBC (овечьим эритроцитам) связываются с поверхностными антигенами SRBC.
Активация комплемента (классический путь)
Минимальный объем сыворотки для 50% гемолиза
Отражает общую активность комплемента
Более 100% гемолиз
Более чувствителен и его легче наблюдать.
Зависимость гемолитической реакции от дозы комплемента
Специальная S-образная кривая
Чаще всего используют гемолизин.
2 единицы (2U)
единица
Ед/мл
Влияние
Снижение гемолитической активности
PH
Буферы и ионная сила
увеличить высоту
ион
Буфер ионов кальция, магния
избыток
Подавить гемолитическую активность
клиническое значение
увеличить высоту
злокачественная опухоль
C3 и C4 также увеличились.
тест на фиксацию комплемента
принцип
Комплексы антиген-антитело связывают комплемент.
Свободный антиген или антитело не могут связывать комплемент.
буфер для разбавления
Соответствующее количество хлорида натрия
Небольшое количество ионов кальция и магния.
Иметь определенное значение pH
Обнаружение
Антиген или антитело
система индикации
гемолизин
Антитела, лизирующие эритроциты
Овечьи эритроциты
Система антиген-антитело
эффект
Указывает, связано ли дополнение
Обнаружение присутствия антигена или антитела, подлежащего тестированию.
Классификация
реакционная система
система комплемента
Это реагент
Общее использование
Свежая сыворотка морской свинки
Не проходит тестирование
система индикации
гемолизин
эритроциты овцы
процесс
Добавьте реагент 1
Известный антиген/известное антитело
Добавьте сыворотку (посмотрите на антитела/посмотрите на антигены)
Добавьте реагент 2
добавить дополнение
Добавьте реагент 3
Присоединяйтесь к системе обучения
Если в сыворотке есть антитела, то комплемент уже соединился с первым этапом и реагент 3 больше не может соединяться.
Не гемолитический
Не гемолитический
Позитивный
Наличие антигена/антитела, подлежащего тестированию
Единица дозировки
служебная единица
минимальный полный гемолиз
Дозировка
Антиген, антитело, гемолизин, эритроциты овцы
по 0,1 мл каждый
дополнять
0,2 мл
Всего 0,6 мл
Официальная пробная дозировка добавки
формула
минимальное количество полного гемолиза
разбавление 1:60
Да
Y*2: 60 = 0,2: X
X: коэффициент разбавления
2: 2 дополнительных модуля
0.2: Дозировка добавки
клиническое значение
уменьшать
Увеличение потребления
РА (ревматоидный), СКВ (системная красная волчанка), активный аутоиммунный гемолиз (гиперчувствительность II типа), отторжение трансплантата
Бактериальные инфекции
Особенно инфекции грамотрицательных клеток.
наиболее чувствительные микроорганизмы
Снижение уровня комплемента в сыворотке часто является результатом активации альтернативного пути комплемента.
Стимуляция липополисахаридом (ЛПС)
Недостаточный синтез
тяжелое заболевание печени
Недоедание
огромная потеря
Обширные ожоги
Сильное кровотечение
нефротический синдром
клиническое значение
Генетические заболевания дефицита комплемента
Дефект ингибирующей молекулы C1
Это не недостаток C1
наследственный ангионевротический отек
Дефект С3
тяжелая инфекция
Цитокины
Активированные иммунные клетки и некоторые стромальные клетки
секретируемые активные вещества
химическая природа
Белок или низкомолекулярный пептид
Преимущественно гликопротеины
Преимущественно низкомолекулярные белки
Чаще всего существуют в одной форме
Не ограничено MHC
биологические функции
Опосредуют и регулируют иммунные реакции и воспалительные реакции.
Регулируют различные физиологические функции клеток.
Сами по себе В-клетки невозможно стимулировать к выработке антител.
Активация и пролиферация В-клеток
Требуются двойные сигналы, двойное распознавание и цитокины.
Обнаружение
наиболее часто используемый метод
Иммунологический анализ
ИФА
Предпочтительный метод
Измерение только иммунореактивности
Не проверено на иммунную активность
проточной цитометрии
Иммуноферментный тест (ELISAPOT)
Методы, которые не позволяют измерить молекулы-предшественники цитокинов
Анализ биологической активности
включать
Интерлейкин (Иллинойс)
Ил-2
Производство Т-клеток
Продвижение и поддержание долгосрочной культуры Т-клеток
Фактор роста Т-клеток
отторжение трансплантата
После активации IL-2 секретируется, чтобы стимулировать эффекторные Т-клетки (CTL) проникнуть в трансплантат и стимулировать B-клетки к выработке антител.
При гиперчувствительности замедленного типа (ЗГТ)
не только вызывают активируемую антигеном пролиферацию Т-клеток
Это также может привести к пролиферации Т-клеток-свидетелей.
Может активировать NK-клетки
Обнаружение
Анализ стимулированной пролиферации клеток
уменьшать
Хронический гепатит В
Хронический гепатит В
Мононуклеары после стимуляции ЛПС
Способность секретировать IL-1 и IL-2 значительно ниже, чем у нормальных людей.
Ил-4
Производство клеток Th2
Способствовать переключению классов иммуноглобулинов
Мононуклеары периферической крови больных туберкулезом, стимулированные микобактериальными антигенами
очевидно увеличить
Запустите покоящиеся В-клетки для перехода в фазу синтеза ДНК.
Реакция гиперчувствительности I типа
Стимулирует пролиферацию и дифференцировку специфических В-клеток в плазматические клетки.
Вырабатывать характерный IgE
Увеличивать
активный туберкулез легких
Ил-3, Ил-5
Реакция гиперчувствительности I типа
После связывания с поверхностными рецепторами эозинофилов
стимулировать его активацию
Высвобождает эозинофильные гранулы и биологически активные вещества.
Ил-5
Стимулируют пролиферацию, дифференцировку и хемотаксис эозинофилов.
Ил-6
Множественная миелома, больные миеломой
Важные факторы, увеличивающие количество остеокластов
Ключевые факторы, способствующие пролиферации и дифференцировке плазматических клеток
Чаще всего используется для стимуляции пролиферации клеток гибридомы В-клеток.
Хроническое отторжение возникает после трансплантации органов
Уровень цитокинов у пациентов
значительно увеличился
Ил-6
Ил-6, Ил-1
Стимулирует гепатоциты к секреции белков острой фазы
Ил-8
Хемотаксическое действие на нейтрофилы
Ил-10
отрицательный иммунный регулятор
Может ингибировать синтез IL-2 и IL-1.
Ил-18
Обладает хемотаксической активностью
метод
Анализ хемотаксической активности
Интерферон (ИФН)
интерферон типа I
альфа-интерферон
производство лейкоцитов человека
бета-интерферон
Продуцируется фибробластами человека
Сильный противовирусный эффект
интерферон II типа
ринтерферон
Производство Т-клеток
Производство клеток Th1
эффект
Иммуномодулирующий эффект
сильнейший
противовирусный эффект
Ингибируют трансформацию клеток Th0 в клетки Th2.
Поскольку это производится Th1, оно, конечно же, направлено на мою мать.
То есть ингибирование активации и пролиферации клеток Th2.
Может активировать NK-клетки
ИФН-α и ИФН-р действуют на разные рецепторы.
Образуется после стимуляции антигеном
Метод обнаружения
Анализ противовирусной активности
факторы роста
Трансформирующий фактор роста (TGF)
TCF-β
Негативная регуляция клеточного иммунитета
семейство хемокинов
фактор некроза опухоли (TNF)
ФНО-α
кахексия
Основные цитокины, вызывающие кахексию
стимулировать клетки-мишени к выработке
Ил-1, Ил-6
Может активировать NK-клетки
Обнаружение
Обладает цитотоксической активностью
Доступные анализы цитотоксической активности
ФНО-β
Т-клетками
Производство клеток Th1
Колониестимулирующий фактор (CSF)
Факторы, активирующие функцию NK-клеток
ИЛ-2, ИФН-р, ФНО-α
Фактор клеточной адгезии (CAM)
Получается в результате взаимного связывания и адгезии между клетками или между клетками и внеклеточным матриксом.
Маломолекулярные пептиды или гликопротеины
форма функционирования
Связывание лигандов рецепторов
эффект
Участвуют в иммунном ответе, воспалении, коагуляции, заживлении ран и метастазировании опухолей и т. д.
Молекулярная основа
Классификация
Семейство, зависимое от ионов кальция/семейство мукокадинов
семейство интегринов
Суперсемейство иммуноглобулинов
муциноподобное семейство
семья избранных
Не включает семейство воспалительных факторов.
Основные методы измерения
ИФА-метод
Функции
Производительность
Плейотропия
перекрывать
Эффект сопротивления
синергия
Необходимость специфического связывания с высокоаффинными рецепторами на клетках-мишенях.
оказывать биологическое воздействие
то же, что инсулин
Обладает чрезвычайно сильным биологическим действием.
Необходимы лишь следовые количества цитокинов.
Может действовать паракринным, аутокринным или эндокринным образом.
то же, что гормоны
клинические эффекты
Оценка иммунного статуса организма и функции клеточного иммунитета
Наиболее используемое
Вспомогательная диагностика конкретных заболеваний
специфический
Просто вспомогательное средство
Обнаружение эффектов лечения заболеваний и рекомендации по использованию лекарств
профилактика болезни
лечение заболеваний
Сейчас многие цитокины превращены в лекарства.
другой
О цитокинах, продуцируемых Т-клетками
Типы антител, которые могут влиять на В-клетки
Реакция антиген-антитело
принцип
Структурная комплементарность и близость антигенных детерминант (эпитопов) и гипервариабельных областей антител
Антигенсвязывающая способность
нековалентное связывание
Не образует ковалентных связей
электростатическое притяжение
Силы Ван дер Ваальса
самый слабый
сила водородной связи
гидрофобная сила
сильнейший
Это связано с тем, что гидратную мембрану антигена и антитела необходимо отодвинуть в сторону, чтобы обнажить место связывания.
Так что это самый сильный
Близость
Сила связывания между сайтом связывания антигена на молекуле антитела и реагирующим эпитопом антигена.
в зависимости от
степень дополнительности пространственной конфигурации
отражает
Комплементарные взаимоотношения антиген-антитело
выражать
Константа равновесия K
Чем больше значение K, тем сильнее сродство.
Чем сильнее связывание с антигеном
Близость
Адаптивная сила связывания между антигенсвязывающим участком молекулы антитела и соответствующей антигенной детерминантой.
Внутренняя сила связывания между антигеном и антителом
отражает
Сила связывания между антигеном и антителом
Функции
специфика
обратимость
Пропорциональность
этап
специфика
Комплементарность между антигенными детерминантами и гипервариабельными областями антител
перекрестная реактивность
две разные молекулы антигена
Антигенные эпитопы с частично идентичной или сходной структурой
Могут перекрестно реагировать с соответствующими антисыворотками друг друга.
Реакция вайфей
Bacillus mutans и Klebsiella имеют одинаковый антигенный эпитоп.
Замена Chrysotitis sp на mutans.
Диагностика сыпного тифа (критциоза)
Уйди с работы на улице, немедленно возвращайся
Снаружи: Эпифиз. Сторона: Класс метаморфоза: Макула. Непосредственно: Риккетсии.
обратимость
Диссоциация может произойти при определенных условиях.
аффинная хроматография
Изменение pH и ионной силы раствора способствует диссоциации комплекса антиген-антитело.
тем самым очищая антиген или антитело
Остается биологически активным после диссоциации.
Пропорциональность
Количество образующихся конъюгатов зависит от концентрации реагентов.
Оптимальное соотношение (точка эквивалентности)
Отношение концентрации антигена к антителу, которое вызывает наиболее быструю видимую реакцию.
Зона эквивалентности
Соответствующий диапазон соотношения молекул антиген-антитело
Максимальная реакция осаждения также происходит при
феномен группы
Избыток антигена и антитела без преципитации
Передний ремень
Передозировка антител
задний ремень
Избыток антигена
Простой спереди и простой сзади
Антитела относительно плоские.
этап
Первый этап
Специфическое связывание антигена и антитела
Быстрый, невидимый
секунды в минуты
вторая стадия
Агглютинация, преципитация, лизис клеток
Медленный ответ, видимый
минуты в часы
Влияющие факторы
электролит
Заставить антиген и антитело потерять часть своего заряда
склонен к агглютинации или осаждению
0,85% хлорид натрия
ускорить образование иммунных комплексов
от медленного к быстрому
SCN-, CLO4-, NO3-, SO4-, H2PO4-
Самый быстрый из них
CL-
рН
Реакции антиген-антитело должны проводиться в среде с подходящим pH.
Оптимальный pH6-9
Потому что рН человека составляет 7,35-7,45.
температура
повышение температуры
Может ускорять молекулярное движение
Повышенная вероятность столкновения антиген-антитело.
Ускорение реакции
Температура: 37 ℃
Приготовление иммуногенов и антисывороток
Приготовление иммуногена
Иммуноген
Может стимулировать организм вырабатывать антитела или сенсибилизированные лимфоциты.
Вещества, вызывающие специфические реакции
характеристика
Иммуногенность
возникает иммунный ответ
Способность индуцировать выработку антител или сенсибилизированных лимфоцитов.
Иммунореактивность (антигенность)
Характеристики специфической связывающей способности
Классификация
полный антиген
иммунореактивный
иммуногенный
случается
иммунореактивный
Неиммуногенный
Нет иммунного ответа
Не вырабатывает антитела и не сенсибилизирует лимфоциты.
Пептиды, стероидные гормоны, нуклеозиды, некоторые лекарства (пенициллин)
Неиммуногенный
Только в сочетании с носителем (чаще всего используется бычий сывороточный альбумин)
быть иммуногенным
тимусзависимый антиген
Я-работник-на меня нельзя положиться
подготовка
Свежие или хранящиеся при -40 ℃
частиц антигена
большой
Клеточные антигены, бактериальные антигены, паразитарные антигены
внутривенная иммунизация
растворимый антиген
Малая молекула
Белки, гликопротеины, липопротеины, ферменты, комплемент, бактериальные токсины, фрагменты иммуноглобулинов, нуклеиновые кислоты.
грубая добыча
Приобретение одиночных клеток
Механическое затирание
Ферментная обработка
Метод разрушения клеток
многократное замораживание и оттаивание
Ультразвуковое разрушение
Метод автолиза
Ферментная обработка
Метод обработки ПАВ
Экстракция и очистка
Метод высаливания
Способ высаливания сульфата аммония
Метод экстракции сульфатом октановой кислоты аммония
Способ высаливания сульфата натрия
Нейтральная соль (33-50% насыщенный сульфат аммония)
Может разрушить гидратную мембрану
нейтрализовать заряд
агрегировать и осаждать белки
Самый классический
самый грубый
Технология разделения и очистки белков
Не влияет на активность
Метод полимерного осаждения (CIC)
Обнаружение циркулирующих иммунных комплексов
Метод осаждения ПЭГ
Не может отражать ситуацию с циркулирующими иммунными комплексами малых молекул.
Определение антиген-неспецифических иммунных комплексов
Функции
Простой
Плохая специфичность
подвержен температурному воздействию
Полиэтиленгликоль (ПЭГ)
молекулярная масса
6000
Чем больше молекулярная масса белка
Чем меньшая концентрация ПЭГ требуется для осаждения, тем
3%-4%ПЭГ
Преципитируемые иммунные комплексы
>5%
Исчезает особенность выделения преципитата ЦИК.
8%-12%
Преципитирует IgG
Технология участия комплементов обнаруживает CIC
метод
Твердофазный метод C1q
Метод антитела C3-CIC-ELISA
Невозможно обнаружить циркулирующие иммунные комплексы, образованные антителами класса IgA.
Поскольку IgA не может связывать комплемент
альдегидные эритроциты
Функции
Способность выдерживать нагрев до 60°C.
Можно многократно замораживать и оттаивать, его нелегко сломать.
Реакция свертывания крови сильнее, чем у свежих эритроцитов.
Длительное время хранения
Несколько вирусов могут быть очищены одновременно
Сильная применимость к вирусам
иммунный адъювант
Помогает вызвать иммунный ответ
Вводится в организм до или одновременно с антигеном.
Может быть неспецифическим
Усилить иммунный ответ
Изменить тип иммунного ответа
тип
иммуногенный
Цитокины, липополисахарид, Bacillus pertussis, вакцина БЦЖ.
клетки и бактерии
Неиммуногенный
Гидроксид алюминия, жидкий парафин, ланолин, квасцы.
Адъюванты для иммунизации животных
Адъювант Фрейнда
Полный адъювант Фрейнда
Парафин жидкий, ланолин, вакцина БЦЖ.
Еще одна вакцина БЦЖ
Неполный адъювант Фрейнда
Жидкий парафин, ланолин
Механизм
Изменение физических свойств антигена
Повышение иммуногенности
Замедлить деградацию и элиминацию антигена
Эффективно стимулирует иммунную систему
Стимулирует моноцитарно-фагоцитарную клеточную систему
Улучшите его способность обрабатывать и представлять антигены.
Стимулируют пролиферацию и дифференцировку лимфоцитов
Увеличение титров иммунного ответа организма.
Изменить тип антитела
Производить больше IgG
Индукция реакций гиперчувствительности замедленного типа.
Тип IV
Невозможно изменить специфичность антигена.
Если специфичность изменится, эта вакцина уже не будет прежней.
Приготовление антисыворотки (приготовление антител)
антисыворотка: сыворотка, содержащая антитела
Множественные В-клетки в организме активируются и производят антитела против определенного антигена.
поликлональное антитело
Каждая В-клетка вырабатывает антитело
Множественные В-клетки представляют собой поликлональные антитела.
тип
Тип Р
Кролики и другие мелкие животные
Сильная близость и трудность диссоциации.
Подходит для широкого спектра
для диагностических реагентов
Тип Н
Лошади и другие крупные животные
Слабое родство, легко диссоциировать.
Подходит для узкого диапазона
для иммунотерапии
Вакцина против столбняка
выбирать
программа
время
1-й и 2-й раз
10-20 дней
3-й раз и позже
7-10 дней
Сбор крови после иммунизации
5-7 дней
5.7.10.20
Место сбора крови
Взятие крови из сонной артерии
Крупные и средние животные
Удаление глаз или купирование хвоста
мышь
Очистка антисыворотки
Удаление адсорбатов гетероантител
Раствор антигена без специфического антигена
аффинная хроматография
Специфическое сродство (специфичность)
Очистка антител, ферментов и рецепторных белков
лучший, самый эффективный
Например, извлечение специфических IgG высокой чистоты.
привязка по родству Достаточно преданный
гель-фильтрация
Разделите белки по их молекулярной массе.
Большие молекулы проходят первыми
гель через отверстие Посмотрите на размер
Метод высаливания
Самый классический и грубый
Не влияет на активность белка
Метод экстракции каприловой кислоты
Высаление добычи нефти очень классический
Ионообменная хроматография
По заряду, который несет белок
Ионы заряжаются по-разному
аффинная хроматография
процесс
Когда антисыворотка проходит через колонку
Удельное сродство твердофазного носителя к разделяемому веществу
IgG адсорбируется хроматографической колонкой.
Затем меняют подвижную фазу, чтобы исчезла специфическая адсорбция целевого вещества.
IgG диссоциирует из колонки
для достижения цели очищения
гель-фильтрация
Гель-хроматография/молекулярно-ситовая фильтрация
По молекулярной массе белка
большой белок
Непосредственно через промежутки между гелями
сначала смываю
маленький белок
войдет в гель
был элюирован позже
Метод высаливания
Способ высаливания сульфата аммония
Метод экстракции сульфатом октановой кислоты аммония
Способ высаливания сульфата натрия
Нейтральная соль (33-50% насыщенный сульфат аммония)
Может разрушить гидратную мембрану
нейтрализовать заряд
агрегировать и осаждать белки
Самый классический
самый грубый
Технология разделения и очистки белков
Не влияет на активность
Ионообменная хроматография
Различные сборы
положительно заряженный
анионообменная смола
Потому что я хочу обменять анион
отрицательно заряженный
Катионообменная смола
Потому что то, что я хочу обменять, это катионы
Идентификация и сохранение антисывороток
идентификация
Специфичность антител
двусторонняя иммунодиффузия
Определение титра антител
Шахматное титрование (метод квадратичного титрования)
двусторонняя иммунодиффузия
Оптимальная рабочая концентрация
Критерии оценки
Антиген и антитело
Сильный позитив
самое высокое разведение
самая низкая концентрация
сохранять
кратковременное хранение
2-8℃
Хранить 5 лет
Общие методы
Избегайте повторного замораживания и оттаивания
Криоконсервация
Хранить 5-10 лет.
вакуумная сушка
Моноклональные антитела
Основные принципы гибридомной технологии
Создание моноклональных антител
Защитный агент
диметилсульфоксид
Моноклональные антитела
Изолированные B-клетки
Колония клонов, образовавшаяся после пролиферации
одиночный эпитоп
Та же структура
Функционально гомогенные антитела
Развести слитые клетки
Каждая культура хорошо
На самом деле
0-количество ячеек
Теория
1 ячейка
Молекулы антигена, продуцируемые гибридомными клетками
единственная антигенная детерминанта
антител
специфика
в зависимости от
Скрининг клональных клеток
Клональная культура положительных клеток гибридомы
метод предельного разведения
Наиболее используемое
микроскопия
Интуитивно понятный и надежный
Длительное время работы и легко загрязняется.
сортировщик клеток с активированной флуоресценцией
Высокая эффективность и дороговизна
метод пластинки с мягким агаром
Трудно освоить
Фундаментальный
Спленоциты
Сенсибилизированные В-клетки
Функция секреции антител
клетки миеломы
несекреторный
Не вырабатывает иммуноглобулины
Может делиться бесконечно и обладает бессмертием.
Предотвращение возврата арендной платы
8-азагуанин
Препарат, который может создавать линии клеток миеломы, лишенные гипоксантин-гуанинфосфорибозконвертазы (HGPRT)
сохранять
-196℃ жидкий азот
агент слияния клеток
Полиэтиленгликоль (ПЭГ)
ШЛЯПА средняя
Гипоксантин (Н), аминоптерин (А), тимидин (Т)
Аминоптерин (А)
Антагонист фолиевой кислоты, блокирующий основной путь синтеза ДНК в клетках.
Гибель неслитых клеток
Выживаемость клеток гибридомы
тип
Технология гибридомы B-лимфоцитов
Приготовьте моноклональные антитела.
Технология гибридомы Т-лимфоцитов
Получение различных лимфокинов
подготовка
Метод индукции in vivo
Возьмите мышей BALB/c.
Внутрибрюшинное введение 0,5 мл жидкого парафина с последующим введением фитана.
индуктор
вызвать асцит
1 неделю спустя
Внутрибрюшинная инокуляция гибридомных клеток
Размножаются в брюшной полости мышей
Продукция и секреция моноклональных антител
10-14 дней после вакцинации
Аспирационный асцит
клетки брюшины
фидерные клетки
Получить большие количества моноклональных антител.
характеристика
Очень специфичный
Связывается только с соответствующим эпитопом
Нацеливайтесь только на один эпитоп
высокая степень однородности
Повторяемость
слабая реакция агглютинации
Не выпадает в осадок
После осаждения нет возможности провести иммунотурбидиметрию.
Высокая чувствительность к окружающей среде
Метод очистки
Метод высаливания
Метод экстракции каприловой кислоты
гель-фильтрация
Ионообменная хроматография
аффинная хроматография
Самый эффективный
То же, что очистка антисыворотки
сохранять
вакуумная сушка
Генная инженерия
принцип
Технология рекомбинантной ДНК и белковой инженерии
Модифицируйте и собирайте гены, кодирующие антитела, в соответствии с различными потребностями.
Импортируйте соответствующие ячейки получателя.
повторно экспрессированное антитело
преимущество
Уменьшить или даже устранить отторжение организмом антител
гуманизированные антитела
Сохраняет аффинность и специфичность родительского антитела.
Уменьшить гетерогенность антител
Способствует применению в организме человека
тип
химерные антитела
Ген функциональной вариабельной области, одобренный Ig человека, дегенен
Химерные антитела мышь-человек
Функции
Уменьшить неоднородность
Сохраняет специфичность и аффинность родительского антитела.
Уменьшите количество отказов
модифицированное антитело
Детерминанты комплементарности (CDR) в вариабельных областях человеческого антитела (гипервариабельные области)
Перейти к исходной последовательности мыши
Функции
Имеет специфичность моноклональных антител мышиного происхождения.
Поддерживать авидность антител
человеческие антитела
Полностью человеческие антитела
Самая идеальная форма терапевтических антител
Биспецифические антитела/бифункциональные антитела
Два сайта связывания антигена имеют разную специфичность.
объединяет две разные молекулы антигена
Технология комбинаторной библиотеки антител
Вариабельные области легкой и тяжелой цепи
случайная комбинация
Разработать новую технологию метода спаривания легких и тяжелых цепей.
реакция агглютинации
Обзор
частиц антигена
Бактерии, эритроциты
или поверхность, покрытая растворимым антигеном или антителом
твердые частицы
Растворимый антиген должен покрывать твердые частицы.
В противном случае невидимый
Связывается с соответствующим антителом или антигеном
Видимые сгустки
Классификация
реакция прямой агглютинации
частиц антигена
реакция непрямой агглютинации
растворимый антиген
Нужна помощь оператора связи
Функции
Качественный
Полуколичественный
После разведения
Используйте самый высокий фактор разведения в качестве активности или титра.
Удобно и просто
Никакого специального оборудования не требуется
два этапа
Специфическое связывание антигена и антитела
Происходит видимая агломерация частиц
Влияние
Стимулировать агглютинацию
Увеличение электролитов или белка
Увеличение вязкости тестируемого раствора
лечение цистиназой
Лечение нейраминидазой
реакция прямой агглютинации
частиц антигена
агглютиноген
Антиген (частицы)
Лектин
антитело
метод
метод слайдов
Известные антитела
тестовый антиген
При определении группы крови кровь является антигеном, поэтому используются известные антитела.
Может обнаруживать как антигены, так и антитела
приложение
Идентификация штамма
Может обнаружить оба антигена
Антитела также можно проверить
Серологическое типирование
Определение группы крови АВО
метод пробирки
Полуколичественный
известный антиген
Тест на антитела
Тест Waifei, тест перекрестного соответствия, тест Feida
Совет: дипломаты настолько толстые, что у них течет кровь.
Вайфей тест
Использование одного и того же эпитопа протеобактерий и клебсиелл.
Тест на тиф
тест Фейды
Реакция брюшнотифозной агглютинации
Такой толстый, такой грустный
Определить антитела
реакция гетерофильной агглютинации
Вирус Эпштейна-Барра
появляются антитела IgM.
Может неспецифически агглютинировать эритроциты овцы и эритроциты лошади.
гетерофильное антитело
поверхностные рецепторы
C3d-рецептор
Диагностика инфекционного мононуклеоза
непрямая реакция агглютинации
Растворимый антиген или антитело
Невозможно обнаружить
антиген АФП
реакция прямой непрямой агглютинации
известный антиген
Тест на антитела
Агглютинация положительная
Далее, сначала идет антиген, поэтому это известный антиген.
Антиген-сенсибилизирующий носитель
обратная реакция непрямой агглютинации
Известные антитела
тестовый антиген
Агглютинация положительная
Носитель, сенсибилизирующий антитела
приложение
диагностика беременности в латексе
Девиз: Сделать все правильно и сделать все правильно
Антитела относительно плоские.
Разница: носитель, сенсибилизирующий антиген или антитело.
реакция агглютинации с прямым непрямым ингибированием
по очереди
Известные антитела
тестовый антиген
Агглютинация отрицательная.
Интерпретация результатов также обратная.
Однако известно, что антитела не сенсибилизируют носитель.
Еще один аллерген 2
процесс
приложение
Тест Асколи на сибирскую язву
реакция обратного непрямого ингибирования агглютинации
по очереди
известный антиген
Тест на антитела
Агглютинация отрицательная.
Интерпретация результатов также обратная.
Но известный антиген не является сенсибилизирующим носителем
Еще один аллерген 2
реакция синергической агглютинации
Белок А Staphylococcus aureus (SPA) в качестве носителя
Неспецифическое связывание с Fc-сегментом IgG (сенсибилизированная частица-носитель)
Тестовый антиген (неизвестно)
для растворимых антигенов
Прямое обнаружение бактериальных вирусов
непрямая реакция гемагглютинации
перевозчик
красные кровяные клетки
Обычно используется
Овцы, кролики, куры
Эритроциты человека типа O
Потому что на поверхности О-типа нет антигена.
Покрытие эритроцитов антигеном или антителом
вектор сенсибилизации формы
Простые эритроциты не являются сенсибилизирующими носителями.
Посмотрите, пассивно ли агглютинируют эритроциты.
результат
Позитивный
агглютинация
вокруг дна ямы
Отрицательный
Дно отстойника
маленькая точка
Как тест TPPA на сифилис
тест латексной агглютинации
непрямая реакция агглютинации
частицы латекса
адсорбируемый белок
принцип
адсорбированный антиген
Обнаружение антител
антиген
Денатурированный IgG
Ревматоидный фактор (РФ)
Также известен как ревматоидный фактор.
Гемолизин «О»
Антигемолизин «О» (АСО)
вектор используется
полистирол, латекс
диаметр
0,8 мкм
Функции
метод пробирки
метод слайдов
Прочность склеивания
Разница
Менее чувствительны, чем тесты на коагуляцию.
Желатиновая реакция агглютинации
непрямая реакция агглютинации
Антиген, адсорбированный на розовом желатине
Обнаружение антител
Тестируемые вирусы
Антиглобулиновый тест (тест Кумбса)
Тест Кумбса
Выявление аутоиммунного гемолиза
Методы выявления неполных антител к эритроцитам
Классификация антител
полное антитело
IgM
Потому что это пентамер
Может привести к слипанию эритроцитов, а затем их перекрестной сшивке.
видно невооруженным глазом
неполные антитела
Функции
Может связываться с антигенами (сенсибилизировать)
Видимой реакции агглютинации не должно происходить.
фрагмент антитела IgG
Иммунные антитела представляют собой преимущественно неполные антитела.
тип
прямой антиглобулиновый тест
Определение границы поверхности
Имеет диагностическую ценность при резус-гемолитической болезни новорожденных.
Потому что это необходимо для определения того, являются ли клетки сенсибилизированными.
непрямой антиглобулиновый тест
Определить бесплатно
Обнаружение материнских антител Rh(D) (антитела анти-D)
приложение
анализ крови на соответствие
анти-D антитело
Диагностика неонатальной гемолитической анемической болезни
Обнаружение неполных антител к бактериям
Тест на холодную конденсацию
синдром холодных агглютининов
Выявление аутоиммунного гемолиза
Вызывается IgM/макроглобулином/холодовым агглютинином.
разделен на
Тип одного растения
Гибридный
процесс
при более низких температурах
Антитела и агглютинация аутологичных эритроцитов
Симптомы цианоза рук и ног
Температура повышается до 20-25℃.
Активируется комплемент и происходит гемолиз.
Температура повышается на 37℃.
Полностью обратимое разделение
Симптомы исчезают
Тест на холодную конденсацию
in vitro
Оптимальная температура 0-4℃
Диссоциировать при 37°C
Оценка результатов
Отрицательный
Титр холодных агглютининов <1:32
Позитивный
Титр холодных агглютининов > 1:64.
диагноз
первичная атипичная пневмония
реакция осаждения
циркулирующие иммунные комплексы
оптимальная температура осадков
4℃
реакция осаждения в жидкости
иммунотурбидиметрия
определение
Буфер
Фосфатный раствор
Агент, повышающий мутность
Полиэтиленгликоль (ПЭГ)
Может быстро образовывать частицы иммунного комплекса (IC)
В случае незначительного избытка антител и иммобилизации
IC пропорционален количеству антигена, подлежащему измерению.
принцип
Оптические измерительные приборы в сочетании с автоматизированными системами анализа
Классификация иммуномутности
иммунотурбидиметрия
Проходящий свет
Ни один свет не попадает на комплекс (IC)
Свет, попадающий на комплекс (IC), поглощается
Значение поглощения (количество поглощаемого света) и количество IC
Положительная корреляция
Чем больше IC, тем выше поглощение
иммунотурбидиметрия
Рассеянный свет
Свет, преломляющийся после попадания на комплекс (IC)
Когда диаметр частицы намного меньше длины волны падающего света
Распределение рассеянного света относительно равномерное.
Станьте Рэлеем Скаттером
Обнаружение интенсивности рассеянного света
Положительная корреляция
Чем больше микросхем, тем сильнее рассеянный свет
Классификация
турбидиметрия рассеяния по конечной точке
После достижения равновесия антиген-антитело
Определить количество комплекса
турбидиметрия с рассеянием скорости
Анализ иммуноглобулина
самый чувствительный
Самый подходящий подход
Для определения активности ферментов
Более точным
Кинетический метод определения
приложение
Появляется второй пиковый сигнал
Первый пиковый сигнал генерируется всеми тестируемыми антигенами.
Второй пиковый сигнал не появляется
Количество протестированного антигена слишком велико
помещение
Передозировка антител
Система обнаружения передозировки антител
Система обнаружения, разработанная для выявления избытка антител
Предотвратить эффект крючка
Предотвратить передозировку антигена (феномен послезоны)
Пороговые пределы избытка антигена
Влияющие факторы
Качество антител
Сильная специфичность, высокая эффективность и сильное сродство.
Используйте антитела R-типа
реагент для обнаружения
Клиническое применение
Тестирование содержания Ig
наиболее часто используемый метод
Тест на аполипопротеин сыворотки
наиболее часто используемый метод
Обнаружить иммуноглобулины
IgG, IgA, IgM
Высокое содержание
Обнаружение подклассов иммуноглобулинов
Дополнение С3, С4
Следовой белок мочи
Терапевтическая концентрация препарата
Тест на седиментацию в геле
Односторонний тест на диффузию в агаре
Можно сделать вручную
Можно только проверить на антиген
принцип
Смешайте количественное количество антител с агаровым гелем.
пластинка с агаром
Просверлите отверстия в пластиковой доске
Ввести сыворотку (антиген) в лунку.
пластинчатый метод
В 0,9% агаровом геле
37℃, свободное расширение
кольцевая диффузия
метод пробирки
0,7% раствор агарозы
Диффузия при 50 ℃
Образование видимого кольца осадков
Положительная корреляция
Чем выше содержание антигена
Чем больше кольцо осадков
Должна быть построена стандартная кривая
Добавьте одновременно 5–7 стандартов антигенов в разных концентрациях.
Определить диаметр седиментационного кольца
абсцисса
Стандартная концентрация антигена
ось Y
Диаметр седиментационного кольца
Применение моноклональных антител для измерения полиморфных антигенов
измеренное значение
На низкой стороне
Одиночный и ниже
Измерение белка М с использованием поликлональных антител
измеренное значение
На высокой стороне
Как высоко
метод
метод пробирки
пластинчатый метод
Метод расчета
Кривая Манчини
Подходит для крупномолекулярных антигенов и длительной диффузии (>48 часов).
Квадрат диаметра кольца преципитации d2 имеет линейную зависимость от концентрации антигена c.
с/d2=к
к: константа
Кривая Фэи
Подходит для низкомолекулярных антигенов и более короткого времени диффузии.
logc/d=k
c: Концентрация антигена
d: Диаметр седиментационного кольца
к: константа
клиническое значение
Используется в больницах первичного звена
Определение содержания IgG, IgA, IgM и комплемента C3 и C4.
При измерении белка М с использованием поликлональных антител
Круг седиментации расширяется
Методологическая оценка
Не очень чувствителен
Время обнаружения
48-72 часа
2-3 дня
Стандартная кривая должна быть получена одновременно.
для количественного определения
Двусторонний тест диффузии в агаре
форма
метод пробирки
Сначала добавьте в пробирку агар, содержащий антитела.
После застывания в середину добавить слой обычного агара.
После охлаждения добавьте раствор антигена в верхний слой.
После размещения антиген и антитело свободно диффундируют в средний слой агара.
пластинчатый метод
две дырки
антиген
Аг
антитело
Аб
Оценка результатов
близко к антигену
Высокий уровень антител
Рядом с лункой для антител
Высокое содержание антигена
Тот, кто держится в стороне, с большей вероятностью будет
Появляется дуга
Потому что молекулярная масса мала
Распространение быстро
Из-за небольшого круга медленной диффузии локальная концентрация велика.
Линия преципитации будет изгибаться в сторону большей молекулярной массы.
Чья голова меньше?
Определение титра антител
Шахматное титрование (метод титрования Основателя)
Двухфазный иммунодиффузионный тест
Цель
Выбирайте оптимальную рабочую концентрацию
Самое высокое разведение, которое было сильно положительным
Самая низкая концентрация, которая является сильно положительной.
иммуноэлектрофорез
принцип
Электрическое поле постоянного тока
Комбинированные продукты электрофоретического анализа и гель-диффузии (реакция осаждения)
Наиболее часто используемые гели
агароза
концентрация
0,8%-1,0%
В целом электрофорез белковых молекул в геле практически такой же, как и свободный электрофорез.
Поскольку соотношение буфера в геле
99%
принцип
Антигены и антитела заряжены отрицательно.
Потому что антиген более отрицательно заряжен
надеть катод
плыть к аноду
Потому что антитела менее отрицательно заряжены
Наденьте анод.
Под действием электроосмотической силы
Электроосмотическая сила: вода плывет от анода к катоду.
плыть к катоду
Конвективный иммуноэлектрофорез
IgG1 и IgG2
из-за электроосмоса
Двигайтесь к катоду
IgG3 и IgG4
Из-за отрицательного заряда
двигаться в сторону позитива
Классификация
Конвекционный иммуноэлектрофорез (ЦИЭП)
Двухфазная иммунодиффузия в сочетании с электрофорезом
антигенный катод
Антитела анод
антитела IgG
из-за электроосмоса
Молочно-белая линия преципитации образуется при оптимальном соотношении антигена и антитела.
Феномен, называемый обратной регрессией отрицательного полюса.
Влияние
электроосмос
Электрофоретическая мощность антител ниже, чем электроосмотическая мощность.
Так что плывите к катоду
рН
Какой заряд имеет молекула?
Зависит от pH буфера
Чем дальше значение pH буфера от изоэлектрической точки
Чем больше заряжено
плавать быстрее
Изоэлектрическая точка
Значение pH раствора, при котором белки диссоциируют на равные положительные и отрицательные заряды.
Ракетный иммуноэлектрофорез (РИЭ)
Диапазон измерения
мкг/мл или выше
Однофазная иммунодиффузия в сочетании с электрофорезом
Высота пика пропорциональна количеству антигена.
Вершина вершины имеет форму неясных облаков.
Электрофорез не достиг конечной точки
например, в сочетании с авторадиографией
Повышенная чувствительность
1000 раз
Иммуноэлектрофорез (ИЭП)
Двухфазная иммунодиффузия в сочетании с зональным электрофорезом
процесс
Зональная технология прежде всего
Обнаружение неиспользуемых зон
После прекращения электрофореза
Затем поместите сыворотку (антитела) в параллельный резервуар с антителами.
Просто сделайте одно отверстие и влейте туда сыворотку.
Посмотрите на дугообразную линию седиментации.
результат
измеримый
М-белок
клиническое значение
Качественный тест
Анализ сывороточного белка при множественной миеломе и макроглобулинемии
М-белок
между γ и β
Идентификация антигенного компонента
Идентификация моноклональных гамма-антител
Может примерно отражать тип иммуноглобулина
могу лишь примерно отразить
Не точно
IgG
Между α и медленным γ
IgA
β и γ1
IgM
β2 или γ
IgD
β или γ
IgE
β для замедления γ
Иммунофиксационный электрофорез (ИФЭ)
первый человек, сообщивший
Альфонсо
Иммунохимические методы (реакция связывания антиген-антитело) в сочетании с зональным электрофорезом
принцип
Зональная технология прежде всего
обнаружить различные зоны
Затем покройте легкие цепи каппа и лямбда антителами (антитела против легких цепей каппа и лямбда) или антисывороткой к тяжелой цепи (антитела против тяжелой цепи).
Образование сложного осадка
Промыть и покрасить
рендерит цветные зоны
клиническое значение
М-белок
наиболее часто используемый метод
Моноклональные антитела
Качественная и типирующая (тип легкой и тяжелой цепи) идентификация
Предпочтительный метод
Идентификация легких цепей иммуноглобулинов и обнаружение еженедельных белков в моче, а также κ и λ-типирование.
График результатов
Цепи G, A, M, каппа и лямбда
SP означает общий сывороточный белок.
Электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE)
принцип
зональный электрофорез
Гель имеет сетчатую структуру.
Имеет эффект молекулярного сита.
Чем меньше молекулярная масса
двигайся быстрее
Несколько полос могут быть разделены
недостаток
Белки с одинаковой молекулярной массой не могут быть разделены.
процесс
отдельные полосы
Эффект разделения незаметен невооруженным глазом.
Электрофоретические полосы появляются только после окрашивания.
Добавьте гель для укладки в верхний слой геля, чтобы улучшить эффект разделения.
Компактный протеин для улучшения плавания
Разделение белков сыворотки может дать
20+ ингредиентов
изоэлектрофокусирующий электрофорез
принцип
Специальный буфер создает градиент pH в геле.
Часто используемые гели
полиакриламидный гель
То же, что СДС
Функции
Изолированные молекулярные массы одинаковы.
Белки с разными изоэлектрическими точками
радиоиммуноанализ
радиоиммуноанализ
Часто используемые радионуклиды
125 I (йод 125)
Метод маркировки 125 I (йод 125)
прямая запись
Мечение пептидов, белков и ферментов йодированием
метод
Метод хлорамина Т (ч-Т)
Метод мечения лактопероксидазы
косвенная маркировка
Применимый к
Маломолекулярные соединения, не имеющие меченых групп йода
метод
Метод обозначения соединений (метод Болтона-Хантера)
Требовать
Радиохимическая чистота
>95%
Требования иммунной активности
>80%
В элюат радионуклидных маркеров добавлен стабилизатор.
столько же 1% яичного белка
удельная радиоактивность
Интенсивность радиоактивности, содержащаяся в единице химического количества маркера
Радиохимическая чистота
методы испытаний
Используйте трихлоруксусную кислоту для осаждения всех белков в тестируемом образце.
Стандарт инсулина
Снижает максимальное связывание инсулина 125I с антисывороткой на 50%.
ДозировкаX
Дозировка проинсулина Y
Скорость перекрестной реактивности = X/Y
Титр
После серийного разведения антисыворотки
реагировать с меченым антигеном
Методология
высокая чувствительность
Образцы и реагенты
Меньшая дозировка
Сильная специфичность
Хорошая повторяемость
легко использовать
легко стандартизировать
недостаток
радиоактивное загрязнение
Клиническое применение
Гормоны (такие как ХГЧ, инсулин и т. д.), лекарства (дигоксин, морфин, барбитураты), опухолевые маркеры (АФП, СЕА), следовые белки
Это все микроэлементы
Радиоиммуноанализ (РИА)
РИА
принцип
реакция конкурентного торможения
Есть конкуренция
Поэтому скорость становится медленнее
Можно только измерить
антиген
единица
цена в минуту или цена в секунду
Обратно пропорционально
Чем больше антигенов нужно протестировать
Менее радиоактивный материал
процесс
Меченые антигены и известные антитела
Все ограничено
Отдельный меченый комплекс антиген-антитело (B) и несвязанный меченый антиген (F)
метод
Второй метод осаждения антител
Метод осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ).
ПЭГ может неспецифически осаждать макромолекулярные белки, такие как комплексы антиген-антитело.
Не осаждает низкомолекулярные антигены.
недостаток
Более неспецифические осадки
При температуре выше 30°C осадок легко растворяется повторно.
PR-реагентный метод
Сохраняет преимущества вторичных антител и ПЭГ.
Экономная дозировка, быстрое и простое разделение
Метод адсорбции активированным углем
Иммунорадиометрический анализ (ИРМА)
ИРМА
принцип
реакция неконкурентного связывания
Может обнаружить антиген
Антитела также можно проверить
Одноточечный ИРМА
реакционная система
меченое антитело
Антиген или антитело, подлежащие тестированию
Антиген, покрытый твердой фазой
разница
принцип
Сначала используйте избыток меченого антитела для реакции с тестируемым антигеном.
образуют комплекс
в супернатанте
Измерьте количество радиации в супернатанте
Затем твердофазный антиген используется для связывания несвязавшихся меченых антител.
и отделить его
Может обнаружить антиген
Антитела также можно проверить
Двухсайтовая ИРМА
сэндвич-метод двойных антител
реакционная система
меченое антитело
Антиген, подлежащий тестированию
Антитела, покрытые твердой фазой
разница
принцип
сэндвич-метод двойных антител
Необходимо смыть оставшиеся меченые антитела.
Измерение радиоактивности твердой фазы
Можно только проверить на антиген
В сравнении
приложение
Клетки Раджи
На поверхности имеется большое количество рецепторов C3b, C1q и C3d.
не смейся
Использует эти рецепторы для связывания с циркулирующими иммунными комплексами, которые связывают комплемент.
Затем добавьте радионуклид, меченный античеловеческим IgG.
Обнаруживаемые циркулирующие иммунные комплексы
Флуоресцентная иммунотехника
Обзор
Самая ранняя установленная технология маркировки
Не может быть использован для количественного определения.
концепция
флуоресцеин
Маркеры, непосредственно участвующие в люминесценции
флуоресценция
Молекулы в основном состоянии (стабильные, с низкой энергией)
После поглощения света определенной длины волны
Возбужденное синглетное состояние (более высокая энергия)
При быстром возвращении в основное состояние
Излучает свет от специальной установки возбуждения люминесценции.
Эффективность флуоресценции
Процент флуоресцеина, который преобразует поглощенную световую энергию во флуоресценцию.
тушение флуоресценции
При определенных физических и химических факторах флуоресценция может ослабнуть или даже исчезнуть.
УФ-облучение
высокая температура
Используйте тушители флуоресценции для устранения неспецифической флуоресценции.
метиленовый синий
Эванс синий
Основной фуксин
раствор йода
флуоресцентное вещество
Флуоресцентные пигменты
Флуоресцеин изотиоцианат (FITC)
желто-зеленый
молекулярная масса
389,4 кДа
Максимальный поглощенный свет (длина волны возбуждения)
490-495 нм
Максимальный излучаемый свет
520-530 нм
Наиболее широко используемый
преимущество
Человеческие глаза чувствительны к желто-зеленому
Обычно в срезах образцов зеленая флуоресценция меньше, чем красная.
Тетраэтилродамин (RB200)
Апельсин
Максимальный поглощенный свет (длина волны возбуждения)
570 нм
Максимальный излучаемый свет
595-600 нм
Нерастворим в воде
Растворим в этаноле и ацетоне
Можно хранить длительное время
Тетраметилродамин изотиоцианат
Оранжево-красный
Максимальный поглощенный свет (длина волны возбуждения)
550 нм
Максимальный излучаемый свет
620 нм
Может иметь двойную маркировку FITC.
Фикоэритрин (R-RE)/(PE)
оранжевый цвет
Максимальное поглощение (длина волны возбуждения)
565 нм
488 нм
Максимальный излучаемый свет
620 нм
575 нм
Нерастворим в воде
Растворим в этаноле и ацетоне
Может иметь двойную маркировку FITC.
широко используемый
Общий свет возбуждения 488 нм
Другие флуоресцентные вещества
Лантаниды хелаты
Европий (Eu3)
Наиболее широко используемый
Применимый к
флуоресцентный иммуноанализ с временным разрешением
Генерирует флуоресценцию после действия фермента.
Отсутствие флуоресцентного эффекта
Флуоресценция может возникать под действием ферментов.
Получение флуоресцентных антител
Мечение антител флуоресцеином
метод
Метод перемешивания
Диализ
Очистка меченых антител
метод
Диализ
хроматографическое разделение
Идентификация антител
Титр антител
двухфазный иммунодиффузионный тест
Когда содержание антигена составляет 1 г/л
Титр>1:16
Влияющие факторы
температура
Чем ниже температура
Чем выше эффективность, тем выше прочность
рН
Зависит от флуоресцентных пигментов
Например, FITC снижается в кислой среде.
Хелаты лантаноидов усиливают кислотность
концентрация
Слишком высокая концентрация
явление самозатухания
Поскольку оно слишком велико, молекулам приходится сильно сталкиваться.
терять энергию
Растворитель
Флуоресцентные примеси в растворах этанола
Нужна обработка
усилитель
Ускорить окрашивание
Не влияет на цветовые эффекты
Флуоресцентный микроскоп
источник света
источник возбуждающего света
Ртутная лампа высокого давления
ксеноновая лампа
Галогенная лампа
фильтр
Термический фильтр
Перед конденсатором светлой комнаты
Блокирует прохождение инфракрасных лучей и изолирует тепло.
фильтр возбуждения
между источником света и объективом
Избирательно пропускает свет в ультрафиолетовом видимом диапазоне длин волн.
Классификация
УФ-фильтр (УГ)
УФ-свет с длиной волны 275–400 нм проходит сквозь
Максимальный коэффициент пропускания
365 нм
Синий УФ-фильтр (BG)
Проходит синий ультрафиолетовый свет длиной 325–500 нм.
Максимальный коэффициент пропускания
410 нм
Абсорбционный фильтр
между объективом и окуляром
Блокирует возбуждающий свет и пропускает излучаемую флуоресценцию.
темный фон
Показать флуоресценцию
легко наблюдать
Глаза защищены от сильного стимулирующего светового раздражения
Диапазон пропускания
410-650 нм
Классификация
ОГ
оранжево-желтый
ГАРАНТИРОВАННАЯ ПОБЕДА
светло-зеленовато-желтый
другой
Смотреть ФИТЦ
фильтр возбуждения
БГ12
Абсорбционный фильтр
OG4 или GG9
Смотреть РБ200
фильтр возбуждения
БГ12
Абсорбционный фильтр
ОГ5
Технология флуоресцентных антител
Также известен как
Флуоресцентная иммуногистохимия
Требуется для тканевого или клеточного ответа
Флуоресцентная микроскопия
Надо посмотреть под микроскопом
процесс
меченое антитело
Метить можно только антитела.
Реакция с тканевыми или клеточными антигенами в срезе
После промывки и разделения
Наблюдение комплексов и частей под микроскопом
клиническое значение
Охарактеризовать или локализовать антигены тканевых клеток
позиция
Какая часть излучает свет (ядро, цитоплазма, оболочка и т. д.)
Можно провести тесты на локализацию антигена.
Технология флуоресцентных антител
ферментная тканевая иммунохимия
Подготовка образцов
Должны быть ячейки
Сыворотка и плазма неприемлемы.
источник
Срезы тканей, отпечатки тканей, мазки клеток, мазки микробов, мазки отслоенных клеток, концентрированные образцы биологических жидкостей (осадки плеврального выпота и асцита)
Типы
прямой метод
Непосредственная реакция с антигеном
помечены на антителе
Проверить можно только антиген.
Функции
Высочайшая специфичность
Метод с наименьшим неспецифическим окрашиванием
Высокая прямая специфичность
плохая чувствительность
Мало неспецифических факторов флуоресцентного окрашивания.
косвенный метод
Проверьте неизвестные антитела, используя известные антигены.
первичное антитело
человеческий Ig
вторичное антитело
Ig овцы/кролика, меченные светлячком или ферментом
То же самое касается ИФА-тестирования на антитела.
Есть вторичное антитело
Маркировано на вторичном антителе
Вторичное антитело, меченное флуоресцеином, конъюгированное с первичным антителом
Может обнаружить антиген
Антитела также можно проверить
Преимущества по сравнению с прямым методом
Обнаружение различных антигенов
Просто приготовьте флуоресцентное антитело
Поскольку флуоресцеин помечен на вторичном антителе
Обнаружение
антинуклеарные антитела
Самый эффективный
метод двойной маркировки
Пометьте разные антитела FITC и родамином соответственно.
Окрасить тот же образец
Клиническое применение
Не заменяет другие рутинные исследования.
Тестирование аутоантител
Антинуклеарные антитела (АНА) в сыворотке
Обнаружение патогенов
Определить патогены
Уровни специфических антител в сыворотке
Иммунопатологическое тестирование
Обнаружение поверхностных антигенов и рецепторов
Идентификация лимфоцитов и субпопуляций
Проточной цитометрии
Тип флуоресцентного иммуноанализа
Флуоресцентный иммуноанализ с временным разрешением (TRFIA)
принцип
С элементами лантаноидов
Маркировка антигена или антитела
Определено с использованием методов временного разрешения
временное разрешение
неспецифическая флуоресценция
Время жизни флуоресценции короткое.
Лантаниды хелаты
Длительное время жизни флуоресценции
После неспецифического затухания флуоресценции
Снова обнаружить флуоресцентный сигнал
Стокса смещения
Разница длин волн между спектром возбуждения и спектром излучения
Если стоксово смещение мало
Спектры возбуждения и излучения часто перекрываются.
мешать друг другу
Хелаты лантаноидов имеют большие смещения.
Легко устраняет рассеяние интерференции возбуждающего света.
сила сигнала
Флуоресценцию можно усилить в кислотном растворе.
Клиническое применение
аналог радиоиммуноанализа
Обнаружение следов веществ
Еще один белок, который нужно обнаружить
Флуоресцентно-поляризационный иммуноанализ (FPIA)
принцип
Использование реакций конкуренции антиген-антитело.
Разница в степени поляризации флуоресценции меченого антигена и комплекса
приложение
в крови или моче
Определение малых молекул
концентрация препарата
Первый метод
Флюоресцентный иммуноферментный анализ
принцип
Используйте реакцию антигена и антитела с помощью флуоресцентного субстрата ферментативной реакции.
Предыдущий метод – это метод сэндвича с двойными антителами.
Добавить субстрат
процесс
Субстрат 4-МУП не имеет флуоресценции.
Излучает флуоресценцию при стимуляции ЩФ.
Анализатор проточной цитометрии (FCM)
Обзор
Использование характеристик интегрированной оптики, механики жидкости, электронно-компьютерных технологий и флуоресцеина для создания флуоресценции.
Технология многопараметрического количественного измерения и сортировки каждой ячейки
Часто используемые источники света
излучаемый свет
Свет, поглощаемый флуоресцеином
лазер
состав
Система потока жидкости
Тестовая система оптического преобразования и преобразования сигналов
Компьютерные системы обработки и усиления сигналов
принцип
Одноклеточные суспензии и оболочки, меченные специальным флуоресцентным топливом.
Войдите в комнату потока
Формирование столба одноклеточной жидкости, который инкапсулирует клеточную суспензию в покровной жидкости.
Столб жидкости и горизонтальный лазерный луч (источник возбуждающего света)
вертикальное пересечение
данные
Прямо рассеянный свет (FS)
размер частицы
Боковой рассеянный свет (SS)
Сложность внутри частицы
гладкость поверхности
Это то же самое, что и пять категорий.
Флуоресценция (ФЛ)
Количество флуоресцентных частей, окрашенных частицами
окрашивание ПИ
клеточный цикл
Часто используемые ДНК-маркеры
ИП (йодид пропидия)
Обычно используемые длины волн возбуждения
488 нм
Обычно используемые длины волн излучения
620 нм
Сортировка урожайности
Существует соответствующая связь между скоростью сбора урожая и чистотой.
Высокая чистота отсортированных клеток
Урожайность относительно низкая.
Оболочка жидкости
эффект
Обернуть образец потока
Центрируйте поток пробы в сопле
Гарантированная точность
Не допускайте приближения клеток к стенке сопла и блокировки отверстия.
приложение
Подмножества Т-клеток
Высочайшая чувствительность обнаружения
В-клетки, окрашенные флуоресцентными антителами против Ig
Поверхность показывает изменения флуоресценции со временем.
кольцо, пятно, колпачок, исчезнуть
иммуноферментный анализ
иммуноферментный анализ
Использование эффективной и специфической каталитической активности ферментов.
ферментный конъюгат
Ферментативно-меченый антиген или антитело
Биомагнификация каталитических субстратов
Небольшое количество фермента может отражать большое количество веществ.
Маркировочная техника
Антиген или антитело
Позиционирование, качественное, количественное
Функции
ферменты и субстраты
потребности в ферментах
Сильная активность
Высокая чистота
Легко сочетается с антигеном и антителом.
Активность стабильна после маркировки
Не влияет на иммунную реактивность антигенов и антител.
специфика
В тестируемом образце не присутствует эндогенный фермент или ингибитор, идентичный меченому ферменту.
продукты, полученные ферментативным катализом
легко судить или измерять
Часто используемые ферменты
Пероксидаза хрена (HRP)
субстрат
Тетраметилбензидин (ТМБ)
наиболее часто используемый
синий
хорошая стабильность
Нет необходимости избегать света, нет мутагенного эффекта.
недостаток
Плохая растворимость в воде
О-фенилендиамин (ОПД)
Один из наиболее чувствительных субстратов хромогена.
оранжево-желтый
нестабильный
Доступен в виде таблеток или порошка.
Восстановить перед использованием
концепция
Получено из овощей
гликопротеин
Содержание сахара 18%
состав
бесцветный гликопротеин
главный фермент
Независимость от активности ферментов
Максимальный пик поглощения
275 нм
Железо кроваво-красное
кофермент
активная группа фермента
Максимальный пик поглощения
403 нм
наиболее часто используемый
Щелочная фосфатаза (AP/ALP)
субстрат
п-Нитрофенилфосфат (п-НПП)
цвет
желтый
концепция
Извлечен из кишечной палочки или слизистой оболочки кишечника теленка.
Классификация
Бактериогенный
слизистая оболочка кишечника
Высокая активность
β-галактозидаза (β-Gal)
субстрат
4-метилумбеланоил-RD галактопиранозид (4-MUU)
Функции
Более высокая чувствительность, чем HRP
30-50 раз
Но при измерении необходимо
флюорометр
концепция
Экстракция кишечной палочки
В крови человека отсутствует этот фермент.
Отсутствие вмешательства эндогенных ферментов во время измерения
Ферментные маркеры
Метод маркировки
Метод сшивания глутаральдегидом
Модифицированный метод периодата натрия
HRP (пероксидаза хрена), меченные антигеном и антителом
наиболее часто используемый метод
Твердофазный носитель
Наиболее часто используемый твердофазный носитель для ИФА.
полистирол
покрытый
Процесс связывания антигена или антитела с твердой основой.
Буфер
PH9.6
карбонатный буфер
закрыто
1%-5% альбумин бычьей сыворотки или 5%-20% телячьей сыворотки.
Снова покрыто
Устранить неспецифическое развитие цвета
Предотвратить попадание примесных белков в сыворотку и вмешательство в результаты.
Классификация
ферментная иммуногистохимия
используется при патологии
Локализация антигенов в срезах тканей или других образцах
только антиген
Просто позиционирование
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Квалификация или количественное определение антигенов или антител в жидкостях
Гомогенный иммуноферментный анализ
Технология иммуноферментного иммуноанализа (EMIT)
Иммуноанализ доноров клоназы (CEDIA)
Фермент, меченный на антигене, неактивен. Активен только после конкретной привязки
гетерогенный иммуноферментный анализ
твердофазный иммуноферментный анализ
иммуноферментный анализ в жидкой фазе
Разделяйте и различайте связанные и свободные маркеры ферментов в зависимости от необходимости.
разделены на гетерогенные фазы
Развод требует разделения
Гомогенный иммуноферментный анализ
Однородный без разделения
Нет необходимости в перевозчике
иммуноферментный анализ
Закон о конкуренции
принцип
Объединенный фермент теряет свою активность.
Проверка активности фермента
Чего не хватает, так это связывающего фермента.
преимущество
Для измерения низкомолекулярных антигенов (гормонов) или гаптенов (лекарств)
гетерогенный иммуноферментный анализ
гетерогенное разделение фаз
принцип
Объединенный фермент остается активным.
Просто надо помыть доску
Это другой этап
Классификация
иммуноферментный анализ в жидкой фазе
Определение чрезвычайно малых количеств коротких пептидных гормонов
Лекарственные препараты и другие низкомолекулярные гаптены
Чувствительность
нг на стр
твердофазный иммуноферментный анализ
Используйте твердые опоры в качестве носителей.
общий
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Как обнаружить антигены
Сэндвич-метод двойных антител (двухэтапный метод)
процесс
твердофазное антитело
Сначала соедините специфическое антитело с твердофазным носителем.
Реакция антиген-антитело
Добавьте антиген для тестирования
Образование твердофазного комплекса антитело-антиген.
первая стирка
Антитела, меченные ферментами
Добавьте меченные ферментом антитела
Формирование твердофазного комплекса антитело-антиген-меченное ферментом антитело (на двух разных эпитопах тестируемого антигена)
вторая стирка
Развитие цвета
Добавьте субстрат для развития цвета.
Количество окрашенного продукта пропорционально тестируемому антигену.
Применимый к
наиболее часто используемый метод
Мультивалентные антигены по меньшей мере с двумя эпитопами.
макромолекулярный антиген
Такие как поверхностный антиген гепатита В, альфа-фетопротеин, ХГЧ.
внеклеточная растворимая молекула адгезии
растворимый антиген
Двухсайтовый (одношаговый метод)
процесс
Объедините тестируемый антиген и антитело, меченное ферментом.
Присоединяйтесь к реакции одновременно
Два антитела не мешают друг другу
После одной стирки
Добавьте субстрат для развития цвета.
недостаток
Когда концентрация тестируемого антигена слишком высока
эффект крючка (феномен задней полосы)
Уменьшенная цветопередача
ложноотрицательный результат
Образцы можно разбавить и протестировать повторно.
Закон о конкуренции
Обратно пропорционально
Чем выше количество антигена, подлежащего измерению
Менее цветные продукты
процесс
твердофазное антитело
Сначала соедините специфическое антитело с твердофазным носителем (ограниченное количество).
Реакция антиген-антитело
Добавьте тестируемый антиген и антиген, меченный ферментом (ограниченное количество).
Конкурирующие связывающиеся специфические антитела
мойка
Развитие цвета
Добавьте субстрат для развития цвета.
Применимый к
Маломолекулярные антигены только с одним эпитопом.
Лекарства, гормоны и т.д.
Как обнаружить антитела
косвенный метод
Антитела к вирусу гепатита С
процесс
твердофазный антиген
Нанесение антигена на твердофазный носитель
Реакция антиген-антитело
Добавьте антитело для тестирования
Образование твердофазного комплекса антиген-антитело, подлежащего тестированию.
первая стирка
Вторичное антитело, меченное ферментом
Добавьте меченое ферментом вторичное антитело (козий античеловеческий IgG)
Образование твердофазного комплекса антиген-антитело-обнаруживаемое-меченное ферментом вторичное антитело.
вторая стирка
Один маркер обнаруживает несколько аналитов
Вторичные антитела, меченные ферментами, могут обнаружить любой комплекс антиген-антитело.
Развитие цвета
Прямо пропорциональный
Закон о конкуренции
Ядерное антитело вируса гепатита B (HBcAb), антитело e вируса гепатита B (HBeAb)
Обратно пропорционально
Чем выше количество антител, подлежащих измерению
Менее цветные продукты
процесс
твердофазный антиген
Нанесение антигена на твердофазный носитель
ограниченный выпуск
Реакция антиген-антитело
Добавьте тестируемое антитело и антитело, меченное ферментом (ограниченное количество).
Конкурирующие связывающиеся специфические антитела
мойка
Развитие цвета
Добавьте субстрат для развития цвета.
Влияющие факторы
Недостаточное центрифугирование образца
наличие фибрина
Этикетки ферментов прилипают к фибрину.
В результате невозможно смыть
темный цвет
ложноотрицательный результат
Гемолиз
Потому что гемолиз имеет темный цвет
ложноотрицательный результат
метод сэндвича с двойным антигеном
чувствительность и специфичность
выше, чем косвенный метод
приложение
Обнаружение поверхностных антител к гепатиту В
метод захвата
также известный как обратный косвенный метод
процесс
Вторичные антитела против IgM, покрытые твердофазным носителем
Добавьте образец для тестирования
IgM могут захватываться твердофазными носителями.
Добавить специфический антиген
Добавить меченные ферментом антитела к специфическим антигенам.
Образование твердофазного комплекса вторичное антитело-IgM-антиген-фермент-меченное антитело.
приложение
антитело типа IgM
приложение
внеклеточный растворимый фактор адгезии
ИФА
Основные методы измерения
Технология хемилюминесцентного иммуноанализа
принцип
Сочетание высокой чувствительности люминесцентного анализа с высокой специфичностью антигена и антитела.
Технология меченого иммуноанализа для обнаружения следовых количеств антигенов или антител.
То же, что радиоиммуноанализ
Метод маркировки
метод карбодиимидной конденсации
конденсирующий агент
карбодиимид
Метод окисления периодата натрия
Меченые гликопротеины обладают хорошей стабильностью.
Нелегко упасть
Метод сочетания солей диазония
Простота, низкая стоимость и хорошая повторяемость.
Метод активации N-гидроксисукцинимида
светиться
Основное состояние
поглощать свет
перейти в возбужденное состояние
вернуться в исходное состояние
Процесс высвобождения фотонов
Тот же принцип, что и флуоресценция.
хемилюминесцентный агент
тип
прямой хемилюминесцентный иммуноанализ
Используйте эфир акридиния.
в щелочной среде
Прямое мечение антигенов (антител)
Возникает реакция антиген-антитело
Хемилюминесцентный иммуноферментный анализ
Ферментные маркеры, участвующие в люминесценции посредством каталитических реакций или передачи энергии.
Используйте пероксидазу хрена или щелочную фосфатазу.
Маркировка антигена или антитела
Возникает реакция антиген-антитело
Хемилюминесцентный иммуноанализ на микрочастицах
Отметка
щелочная фосфатаза
Электрохемилюминесцентный иммуноанализ
Участвуют в реакциях окисления посредством передачи энергии.
Антитело, меченное рутением терпиридином (антиген)
трипропиламин
Донор электронов (акцептор электронов)
В электрическом поле на поверхности электрода происходит специфическая реакция хемилюминесценции за счет переноса электрона.
Включая два процесса: электрохимию и хемилюминесценцию.
преимущество
Похоже на радиоиммуноанализ
Но никакого загрязнения
Высокая чувствительность и сильная специфичность
нг или даже стр.
Широкий линейный диапазон
Маркер стабилен
Реагент имеет длительный срок годности и нетоксичен.
высокая степень автоматизации
приложение
Гормоны, опухолевые маркеры, концентрации лекарств, маркеры миокарда, вирусные антитела и другие следы биологической активности.
Обнаружение
небольшое количество
Технология амплификации биотин-авидина
активированный биотин
Использование карбоксильной группы биотина
Используйте химическую модификацию для получения производных различных реакционноспособных групп.
После активации
Легко связывается с соответствующими группами в различных антигенах, антителах, ферментах и молекулах нуклеиновых кислот.
биотинилированные маркеры
состав
я звоню
имидазольное медное кольцо
Авидин: триптофан
II кольцо
Тиофеновое кольцо
Связывание антител и других крупных молекул
Биотин (В)
Авидин (А)
высокая близость
Сочетание скорости, специфичности и стабильности
авидин
крестообразная форма
Биотин
треугольник
Авидин имеет четыре сайта и может связывать 4 биотина.
Итак, происходит реакция усиления.
Маркируйте различные типы активированного биотина.
активированный биотин
Невозможно пометить карбоксильные группы.
Потому что он был химически модифицирован с его помощью.
Применение системы биотин-авидин (БАС)
B: биотин, A: авидин, S: амплификация
Метод маркировки авидином
метод периодата натрия
метод АВС
принцип
C: Значение фермента
фермент, мечущий биотин
биотинсвязывающий авидин
Биотинилированное антитело, конъюгированное с авидином
меченые ферменты и антитела
Это все биотин
Авидин используется только для связывания с биотином.
в сочетании с ИФА
Значительно улучшить чувствительность ИФА
фермент, меченный в
на биотине
твердофазный мембранный иммуноанализ
Обычно используемые твердофазные мембраны
Нитроцеллюлозная мембрана (НК)
Коллоидное золото
Комплексы антиген-антитело помечены частицами золота.
под микроскопом
Темно-коричневые частицы
невооруженным глазом
красные или розовые пятна
ХГЧ
Обнаружить ХГЧ
Тест на коллоидное золото моноклональных антител
Высочайшая чувствительность
тест на ХГЧ при овуляции
Чтобы избежать перекрестной реакции
Моноклональный двухточечный иммуноферментный анализ
8-10 недель
достичь пика
ХГЧ в сыворотке несколько выше, чем в моче
Единственный гормон, секреция которого не увеличивается по мере увеличения массы плаценты.
Отличие молярной беременности от нормальной беременности
Количественный тест на концентрацию ХГЧ
Классификация
Тест иммунофильтрации с пунктирным золотом
на пленке NC
Жидкость течет вертикально вниз
Коллоидное золото, как одежда для легких
Иммунохроматографический анализ с использованием точечного золота
на пленке NC
горизонтальный поток жидкости
как тест-полоски на беременность
Иммунно-связанный тест (ELISPOT)
Измеримые В-клетки
секретировать специфические антитела
Секрецию антител также можно измерить.
Измеримые Т-клетки
Т-клетки, секретирующие цитокины
Вестерн-блот/ВБ
процесс
три фазы
Электрофорез в ДСН-полиакриламидном геле (ДСН-ПААГ)
зональный электрофорез
электроперенос
в условиях трансфер-электрофореза
Перенос на нитроцеллюлозную мембрану (мембрана NC)
Блот белка на твердофазную мембрану
Все еще невидимый невооруженным глазом
Обнаружение ферментативной реакции
Блотированный белок (эквивалент твердофазного носителя, покрытого антигеном)
Реакция со специфическими антителами и вторичными антителами, меченными ферментами.
Добавьте субстрат для развития цвета.
Комплексный SDS-PAGE и ELISA
Клиническое применение
ВИЧ
Подтверждающий тест
Обнаружение компонентов антител
появляется gp41/gp120/gp160
две полоски внутри
Если он умрет, позвоните в 120, и это его не вылечит. Он сбежит.
gp120 связывается с CD4
Уничтожить CD4 Т-клетки
CD4/CD8
Коэффициент уменьшается
Анализ антител к экстракционному антигену (антитела ENA)
Южное пятно
Блоттинговые методы обнаружения нуклеиновых кислот
иммуногистохимия
Обзор
иммуногистохимия
меченые специфические антитела
Тесты для обнаружения, количественного определения и качественной идентификации антигенов.
Можно только проверить на антиген
Источник образца
живая ткань
Срезы тканей
Различные жидкости организма и пункционные жидкости (сыворотка и плазма неприемлемы, поскольку в них нет клеток)
Мазки и отпечатки
Культивируемые клетки
Живой клеточный слайд
Цель фиксации образца
коагуляционный белок
Прекращают действие внутриклеточных ферментов
Предотвратить аутолиз
Поддерживать форму и структуру клеток
Поддерживать антигенность клеток
Предотвращает отпадение клеточных слоев
Удалить липиды, которые предотвращают связывание антител
Подавить рост бактерий
Антикоррозия
Иммуногистохимический процесс
Экстракция и очистка антигена
Антиген, подлежащий тестированию
Иммунизация животных и слияние клеток
Получение специфических антител
гибридомная технология
Очистка антител
Конъюгат маркеров с антителами
Образуют меченые антитела
Обработка и подготовка образцов
первичный реагент
антитело
Моноклональные антитела
Поскольку он может обнаруживать только ткань, он должен быть антигеном, поэтому он может обнаруживать только антигены.
ключевой шаг
Иммуноокрашивание
иммунофлуоресцентная гистохимия
Антитела, меченные флуоресцеином
Можно только проверить на антиген
Функции
Может одновременно обнаруживать в образцах несколько антигенов.
Преимущества по сравнению с методами иммуногистохимии ферментов
При наблюдении с помощью флуоресцентной микроскопии
Меры предосторожности
Осматривайте образцы сразу после окрашивания.
Не желательно долго наблюдать одно поле зрения.
Используйте нефлуоресцентное масло для линз.
Наблюдение в темной комнате
ошибка
Наблюдение лучше всего при температуре 37℃.
ферментная иммуногистохимия
Используйте антитела, меченные ферментами (антигены).
Антитела и антигены можно измерить
Классификация
Метод иммуногистохимии антител, меченных ферментами
То же, что и иммуноферментный анализ.
Немеченые антитела, иммуноферментный гистохимический метод окрашивания с ферментным мостиком
Фермент не помечен на антителе
Антиферментные антитела в качестве третьих антител
Иметь мостиковое антитело в качестве вторичного антитела
Формирование комплекса тест-антиген-специфическое антитело-мостиковое антитело-антиферментное антитело
Ферментативное окрашивание немеченых антител - метод PAP (пероксидазно-антипероксидазный метод)
Третье антитело другое.
Третье антитело (антиферментное антитело) и фермент образуют растворимый комплекс (комплекс PAP).
Этот комплекс состоит из 2 антиферментных антител и 3 ферментов пероксидазы.
пятиугольная структура
очень стабильный
трансплантационный иммунитет
Классификация
аутотрансплантация
Трансплантат происходит от самого хозяина
Нет реакции отторжения
сингенный трансплантат
Трансплантация между генетически идентичными особями
Идентичные близнецы
Реакции отторжения обычно не возникают.
аллогенная трансплантация
Трансплантация между особями одного вида, но с разными генотипами.
целевой антиген, вызывающий отторжение
Главный антиген гистосовместимости (MHA)
Главный антиген гистосовместимости (MHA) главного комплекса гистосовместимости (MHC) на хромосоме 6.
Также известен как человеческий лейкоцитарный антиген (HLA).
Человеческий MHC=HLA
Классификация
ХЛА я
HLA-A, HLA-B, HLA-C
Все поверхности ядерных клеток
Большинство лимфоцитов
нервные клетки
нет ядра
HLA-C
Не оказывает существенного влияния на трансплантационный иммунный процесс.
HLA II
HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP
Распределяется в профессиональных клетках APC, активированных Т-клетках и эпителиальных клетках тимуса.
иммуноглобулинподобный домен
Функциональные домены α2 и β2
Область связывания антигенного полипептида
Функциональные домены α1 и β1
Область связывания CD4
Функциональная область β2
HLA-DR
Самый иммуногенный
Самое важное при отторжении трансплантата
Метод CDC для обнаружения антигена HLA-DR
Клетки, подлежащие тестированию
очищенные В-клетки
Поскольку белки класса II присутствуют на поверхности В-клеток и макрофагов (профессиональных АПК)
Взаимодействие класса HLA-I не исключено.
с очищенными В-клетками
биологическое типирование
ПЦР-ПДРФ
ПЦР-ССО
Наиболее широко используемый метод типирования HLA класса II.
ПЦР/ССП
принцип
Разработать набор праймеров, специфичных для последовательности (SSP) для аллелей HLA.
ПЦР-амплификация тестируемой ДНК
получать
аллель-специфические продукты амплификации
ПЦР-SSCP
СБТ
Самый точный и интуитивно понятный метод.
должен
Выделение ДНК клеток, подлежащих тестированию
ПЦР-амплификация с использованием локус-, групповых или аллель-специфичных праймеров
Очистка и секвенирование амплифицированных продуктов
Сравнение измеренной последовательности гена с известной последовательностью ДНК банка генов.
Цитология HLA-типирования
отрицательная типизация
стандартные ячейки
Гомозиготные типированные клетки, имеющие только один антиген LD на поверхности.
позитивное типирование
стандартные ячейки
пресенсибилизированные лимфоциты
Структура и функции молекул MHC
МХК
Группа тесно связанных генов на хромосоме, кодирующих основные антигены гистосовместимости.
МХК-I
Опухолевые клетки могут быть уничтожены клетками Tc только в том случае, если они экспрессируют MHC-I.
Тромбоциты экспрессируют только MHC-1.
МХК-II
Важные поверхностные маркеры презентирующих клеток (APC)
В-клетки могут экспрессировать MHC класса I и класса II.
Распознается хелперными CD4 Т-клетками
Лента
Аллотипические эпитопы (полиморфная часть молекул HLA класса II)
Область связывания антигенного пептида
Распознать молекулы CD4 и CD8
Площадь образца Ig
Иммуноглобулинподобная область: домен β2
Закрепление молекул HLA на клеточной мембране
трансмембранная область
и внутриклеточная передача сигналов
Внутриклеточная область (цитоплазматическая область)
HLA-II
Область связывания антигенного полипептида
Функциональные домены α1 и β1
иммуноглобулинподобный домен
Функциональные домены α2 и β2
Область связывания CD4
Функциональная область β2
Факторы, определяющие полиморфизм MHC
Гены MHC представляют собой несколько аллелей
являются кодоминантными
Определение путей
путь прямой идентификации
Донорский БТР
Донорский трансплантационный антиген (MHC)
представлен Т-клеткам-реципиентам
косвенный путь идентификации
ПолучательAPC
Донорский трансплантационный антиген (MHC)
представлен Т-клеткам-реципиентам
Распознавание донорского MHC Т-клетками
признанная молекула
являются пептидами, полученными из обработанных молекул аллотипа MHC
Пока существует разница в одну аминокислоту между донором и реципиентом.
может возникнуть реакция отторжения
тип
Реакция хозяина против трансплантата (HVGR)
Отказ донора получателем
Реакция «трансплантат против хозяина» (GVHR)
Отказ донора от реципиента
Реакция хозяина против трансплантата (HVGR)
Классификация
острое отторжение
От нескольких минут до 1-2 дней
Возникает необратимое гуморальное отторжение.
Быстрый, сильный, необратимый
гуморальный иммунный ответ
основное вещество, опосредующее
Цитотоксические антитела (цитотоксические Т-клетки/Т-киллеры/Тс-клетки)
причина
Лица с несовместимыми группами крови по системе АВО и другими группами крови, несовместимыми резус-группами крови, многоплодными беременностями, повторными переливаниями крови или лицами, перенесшими трансплантацию органов.
Плохая перфузия трансплантированного органа или чрезмерное время ишемии.
Неправильная консервация и обращение с трансплантатами.
острое отторжение
от недель до месяцев
самый распространенный тип
диагноз
Значения sIL-2R и сывороточного креатинина увеличились одновременно
3H-TdR 4-часовой метод включения
4-часовой анализ трансформации клеток 3H-TdR
Методы обнаружения сенсибилизированных Т-клеток у реципиентов
Удовлетворительный тест для прогнозирования острого кризиса отторжения
Дифференциация острого отторжения и вирусной инфекции
1-5 дней до появления клинических симптомов
Увеличение соотношения CD4/CD8
>1,2
Указывает на то, что скоро произойдет острое отторжение.
цитомегаловирусная инфекция
снижение CD4/CD8
<1,08
Высокая вероятность заражения
хроническое отторжение
месяцы или даже годы
Заболевание прогрессирует медленно
Реакция «трансплантат против хозяина» (GVHR)
пересадка костного мозга
Если вы не получаете иммуносупрессивное лечение
Зависит от HLA-DR
Перед лечением необходимы высокие дозы лучевой терапии и химиотерапии, чтобы убить все клетки костного мозга.
проявлять иммунную недостаточность
Показать это
Требуется только соответствие группы крови ABO.
Костный мозг, попадающий в организм реципиента, имеет большое количество иммунных клеток.
Может осуществлять иммунный ответ на органы и ткани реципиента.
HLA-серологическое типирование
Тест на микрокомплементзависимую цитотоксичность (CDC)/тест на микролимфоцитотоксичность
Методы типирования HLA-I и HLA-II
Тест на комплементзависимую цитотоксичность
генетически предрасположенный
Неопознаваемый
HLA-DP
Для идентификации необходимо цитологическое типирование HLA.
Идентификация пресенсибилизированных клеток путем типирования клеток
Известные специфические стандартные типирующие сыворотки против HLA
Известные антитела
Если характеризуется как анти-HLA-DR или DQ
Использование тромбоцитов для адсорбции антител HLA-I
В сочетании с лимфоцитами для тестирования
Антиген, подлежащий тестированию
добавить дополнение
Цитологическое типирование HLA
Идентифицируемый HLA-DP
Используемые стандартные ячейки
отрицательная типизация
Гомозиготные типированные клетки, имеющие только один антиген LD на поверхности.
позитивное типирование
пресенсибилизированные лимфоциты
Двусторонний тест на смешанные лимфоциты/тест на смешанные лимфоциты
Определить, совместимы ли антигены HLA донора и реципиента.
Если количество инфильтрированных и трансформированных клеток наибольшее
Указывает на сильный положительный MLC
Это означает, что антиген D полностью несовместим.
Невозможно определить тип HLA
Профилактика и лечение
HLA-перекрестная совместимость
Тест на перекрестную токсичность лимфоцитов (тест на перекрестную токсичность лимфоцитов)
тест на перекрестную токсичность лимфоцитов
Цель
Есть ли в сыворотке реципиента антитела против донорских лимфоцитов
Донорские лимфоциты
Антитела в сыворотке реципиента
Монофазная смешанная лимфоцитарная реакция между клетками реципиента и клетками донора, обработанными ромицетином С.
и перекрестное сопоставление
То же, что и основная сторона
обращаться
Терапия аллогенными антителами против CD3
Наиболее важные осложнения
сывороточная болезнь
опухолевый иммунитет
Макрофаги
Инфильтрация макрофагов в опухолевые поражения
распространение опухоли и метастазирование
отрицательная корреляция
Противоопухолевый механизм действия
Уничтожьте опухолевые клетки посредством пути ADCC.
опухолевый антиген
Вновь возникшие или сверхэкспрессированные во время возникновения и развития опухоли.
Антигенные вещества
конкретная классификация
Опухолевой специфический антиген (TSA)
неоантигены, специфичные для опухолевых клеток
Экспрессируется только в опухолевых клетках
Отсутствующие и нормальные тканевые клетки
антиген отторжения, ассоциированный с меланомой
МАРА
простатический специфический антиген
СРП
опухолеассоциированный антиген
Неспецифичен для опухолевых клеток
Нормальные ткани и клетки также экспрессируют
Когда возникает рак
Содержание значительно увеличилось
альфа-фетопротеин
АФП
Механизм противоопухолевого эффекта
клеточный иммунитет
Самая важная роль
Т-клетки, NK-клетки, макрофаги
гуморальный иммунный механизм
Цитолитический эффект комплемента
Эффект антител
Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC)
Иммуномодулирующий фагоцитоз антител
Антитела блокируют определенные рецепторы на поверхности опухолевых клеток.
Антитела связываются с рецепторами и блокируют передачу сигналов в опухолевых клетках.
Антитела препятствуют адгезии опухолевых клеток
Распространенные опухолевые маркеры
эмбриональные антигены
Альфа-фетопротеин (АФП)
первичный рак печени
АФП>300 мкг/л
рост
беременные женщины
новорожденный
острый гепатит
первичный рак печени
Динамические кривые АФП и АЛТ
Дифференциация рака печени и доброкачественного заболевания печени (активного гепатита)
динамическое повторение кривой
доброкачественное заболевание печени
Так высоко, как вы хотите
динамический разделитель кривых
Повышенный АФП
снижение АЛТ
Подумайте о раке печени
Раково-эмбриональный антиген (СЕА)
Имеет несколько изоформ
СЕА-А, СЕА-П, СЕА-М и т. д.
Содержит сложные антигенные детерминанты и множество изомерных гликопротеинов.
курильщик
Легкое увеличение
Опухоли кишечника
Рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак поджелудочной железы
Антигены сахарной цепи
CA153
рак молочной железы
Хочешь, чтобы я прикоснулся
Грудь, которую можно трогать
CA125
рак яичников
Хочешь меня
Сын вот-вот родится, значит в яичнике
Белок 4 придатка яичка человека (HE4)
Новые онкомаркеры
рак яичников
CA199
опухоли желудочно-кишечного тракта
Хочу 99
Я не могу это переварить, это стоит 99
рак поджелудочной железы
9. Если смотреть сбоку, это похоже на поджелудочную железу.
Рак поджелудочной железы, рак желчного пузыря, рак толстой кишки, рак желудка
Антиген плоскоклеточного рака (SCCA)
Плоскоклеточная карцинома
Плоскоклеточный рак пищевода
рак шейки матки
Ферменты и изоферменты
Простатический специфический антиген (ПСА)
рак простаты
органоспецифические опухолевые маркеры
соотношение ф-ПСА и ф-ПСА/т-ПСА
Дифференциация рака простаты и доброкачественных заболеваний простаты
И т-ПСА, и ф-ПСА повышены.
Соотношение ф-ПСА/т-ПСА
<10%
Рак простаты вероятен
Простатическая кислая фосфатаза (PAP)
рак простаты
Нейрон-специфическая енолаза (NSE)
Мелкоклеточный рак легкого (овсяноклеточный рак)
a-L-фукозидаза (AFU)
первичный рак печени
Не имеет отношения к АФП
дополнительные эффекты
Повышенный AFU также можно увидеть при отрицательном AFP.
Гормоны
Ванилилминдальная кислота (ВМА)
Феохромоцитома
хорионический гонадотропин человека
Трофобластные опухоли и опухоли зародышевых клеток
Пузырный занос, эрозивный занос, хориокарцинома
кальцитонин
медуллярный рак щитовидной железы
адренокортикотропный гормон (АКТГ)
Мелкоклеточный рак легкого (овсяноклеточный рак)
белок
β2-микроглобулин (β2-МГ)
Злокачественные новообразования, миелома, лимфома, заболевания почек
Поскольку β2-микроглобулин
Встречается на поверхности всех ядросодержащих клеток.
Ферритин
злокачественные опухоли, воспаления
Белок недели (BJP)
множественная миелома
Экспрессирует антиген группы крови АВО.
клетки рака желудка
Невозможно быть
Моносахарид
иммунодефицитная болезнь
первичный иммунодефицит
первичный дефицит В-клеток
Х-сцепленная агаммаглобулинемия
Гамма-глобулин = иммунный глобулин
синдром Брутона
Отсутствие миндалин
Общие клинические проявления
концепция
Врожденная агенезия В-клеток
Уменьшение или дефектность В-клеток
Снижение или дефицит антител
Трудно найти в костном мозге
Плазматическая клетка
Нормальное количество Т-клеток
Рецидив инфекции возник у ребенка через 6 мес после рождения (дошкольник)
Текущая резистентность к IgG и секреторному IgA в течение 6 месяцев.
селективный дефицит IgA
Наиболее распространенные заболевания гуморального иммунодефицита
Сывороточные IgA и sIgA снизились.
Часто сопровождается рецидивирующими инфекциями пищеварительного тракта и дыхательных путей.
в слизистой оболочке
Заместительная терапия гамма-глобулином
неверный
общий вариабельный иммунодефицит
Болезнь В-клеточного иммунодефицита
Из-за дефектной функции В-клеток и аномальной передачи сигналов
гуморальный иммунодефицит
синдром Брутона
Первичный дефицит Т-клеток
синдром врожденной гипоплазии тимуса
болезнь клеточного иммунодефицита
синдром ДиДжорджа
Часто сопровождается недостаточностью паращитовидных желез.
Восприимчивость к вирусным и грибковым инфекциям.
Потому что ни клеточный, ни гуморальный иммунитет не работает
Дефицит клеточного иммунитета
Гуморальный иммунодефицит
Потому что Т-клетки CD4 (Th-клетки) необходимы
Трансплантация эмбрионального тимуса эффективна
болезнь первичной фагоцитарной недостаточности
хроническая гранулема
Нарушения количества, функции движения или адгезии, бактерицидной активности фагоцитов.
Рецидивирующие инфекции, вызванные гнойными бактериями или грибами.
Дефицит G-6-PD может вызвать
Из-за отсутствия G-6-PD макрофаги имеют недостаточное энергоснабжение и сниженную способность к фагоцитозу и уничтожению.
нейтрофилы
Способность к хемотаксису значительно снижена
Синдром Чедиака-Хигаси
Лейкоцитарный синдром Лази
Хроническая инфекция кожи и слизистых оболочек Candida albicans
Кожный тест на Candida albicans
диабет
гореть
нормальный новорожденный
Фагоцитарная способность значительно снижена.
Дефицит комплемента или антител
Снижение ферментного метаболизма
хроническая гранулема
Уровень положительных результатов теста NBT значительно увеличился
септицемия
дефицит комплемента
Дефект ингибирующей молекулы C1
наследственный ангионевротический отек
повторяющиеся бактериальные инфекции
не вирус
При системной красной волчанке и хроническом нефрите
Не обязательно
Тяжелый комбинированный иммунодефицит (ТКИД)
У пациента возникли отклонения в развитии через 6 месяцев после рождения.
Восприимчив к тяжелой инфекции и смерти.
сцепленный с полом тяжелый комбинированный иммунодефицит
X-SCID
Х-сцепленное рецессивное наследование
Т-клетки
отсутствие или значительное снижение
В-клетки
Нормальный, но нефункциональный
Вызывает снижение продукции Ig и расстройство конверсии типа.
дефицит аденозиндезаминазы
Дефицит аденозиндезаминазы (АДА)
аутосомно-рецессивное наследование
принцип
Дефицит фермента ухудшает разложение аденозина и дезоксиаденозина.
Вызывает накопление большого количества нуклеотидных метаболитов dATP и dGTP.
Токсическое воздействие на ранние Т- и В-клетки
Вызывает дефекты Т- и В-клеток
клиническое значение
После вакцинации младенцев вакциной БЦЖ
Возникает смертельная и диссеминированная инфекция.
вторичное иммунодефицитное заболевание
Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД)
СПИД
Заразить
CD4 Т-клетки
основной
Макрофаги
Дендритные клетки
В-клетки
Микроглия в тканях головного мозга
индекс
ВИЧ-антитела положительные
Восприимчивость к пневмоцистной пневмонии Pneumocystis carinii
Инверсия соотношения CD4/CD8
саркома Капоши
Увеличение В-клеток и иммуноглобулинов
предварительный отборочный тест
ИФА-метод
Подтверждающий тест
иммуноблоттинг
тест
Гуморальный иммуноанализ
Обнаружение дефектов В-клеток
Клеточные иммуноанализы
Обнаружение дефектов Т-клеток
кожный тест
антиген
Вещества, которые легко сенсибилизируются при контакте в естественной среде.
туберкулин
грибковые микроорганизмы албиканс
трихомицин
Стрептокиназа-стрептокиназа (СК-СД)
вирус паротита
тест
Одновременное тестирование нескольких антигенов
Позитивный
Положительный кожный тест на более чем 3 антигена.
Дети до 2 лет
антиген-положительный
Отрицательный
Положительный результат менее чем на 2 антигена
Диаметр реакции 48 часов
<10 мм
намекать
Иммунодефицит или сниженная чувствительность
PHA-тест стимуляции
неспецифическая клеточная иммунная функция
PHA-L: фитогемагглютинин.
PHA стимулирует пролиферацию и трансформацию лимфоцитов.
Определить функцию Т-клеток
Тест на пролиферацию и трансформацию лимфоцитов
Новорожденный через неделю
Возникает реакция раздражения PHA
Исключить возможность серьезного дефицита клеточного иммунитета.
СПИД
В основном поражает клетки CD4 (Т-хелперы Th).
gp120 связывается с белком рецептора CD4
Снижение соотношения CD4/CD8.
Дефицит клеточного иммунитета
Болезнь дефицита фагоцитоза
Внутриклеточная бактерицидная способность нейтрофилов
Тест на восстановление нитросинего тетразолия (NBT)
Позитив значительно увеличился
септицемия
Функциональный тест хемотаксиса
Камерный метод Бойдена
Хемотаксис в маленькой комнате
фагоцитоз макрофагов
Испытание на очистку от частиц углерода
иммунопролиферативное заболевание
Заболевания, вызванные аномальной пролиферацией лимфоцитов
плазмоклеточная болезнь
Вызвано чрезмерной пролиферацией плазматических клеток или B-лимфоцитов, продуцирующих Ig.
Чрезмерное количество в сыворотке или моче
моноклональный иммуноглобулин
или фрагменты легкой или тяжелой цепи
плазмоцитома
Снижение синтеза IL-4, ингибирование активации B-клеток и ингибирование способности презентации антигена APC.
болезнь тяжелых цепей
Мутации и аномальная пролиферация плазматических клеток
может производить только
Тяжелая цепь иммуноглобулина или дефектная тяжелая цепь
Большие количества в сыворотке или моче
Заболевания, вызванные свободными тяжелыми цепями иммуноглобулинов
злокачественное заболевание плазматических клеток
болезнь легкой цепи
Мутировавшие плазматические клетки производят большое количество аномальных легких цепей.
Избыточные отложения легких цепей в почках и других висцеральных тканях.
Вызывает повреждение почек и амилоидоз.
Типы белков легкой цепи делятся на лямбда-тип и k-тип.
Нефротоксичность лямбда-типа выражена сильнее.
Протеинемия К-типа М
Соотношение типов K/λ в сыворотке
>4:1
Классификация
злокачественное заболевание плазматических клеток
Множественная миелома (ММ)
Злокачественная опухоль, характеризующаяся аномальной пролиферацией одной линии плазматических клеток в костном мозге.
зрелые B-клеточные опухоли
первичная макроглобулинемия
болезнь тяжелых цепей
доброкачественное плазмоклеточное заболевание
Первичная доброкачественная моноклональная игемия
Вторичная моноклональная гиперигемия
клинические проявления
Переполняющая протеинурия/преренальная протеинурия
= легкая цепь иммуноглобулина
= белок BJ мочи/BJP/недельный белок/агглютинин/легкая цепь иммуноглобулина
Моноклональная гиперплазия плазматических клеток
Моноклональный иммуноглобулин (белок М)
синдром гипервязкости
Повышение скорости оседания эритроцитов
Мочевой белок
закупорка почечных канальцев
приводящие к почечной недостаточности
Плазматические клетки проникают в костный мозг
Вызывает разрушение костного мозга, боль в костях (чаще всего) или переломы.
гиперкальциемия
Анемия, инфекция, кровотечение, иммунная дисфункция
Поскольку нормальные клетки костного мозга не могут производить
лабораторные тесты
Количественное определение сывороточного иммуноглобулина (белок М)
М-белок
моноклональная пролиферация плазматических клеток
Класс, подкласс, генотипический и идиотип однородный.
Иммуноглобулин
Нет активности антител
Никакой другой иммунологической активности.
Чаще встречается в
Множественная миелома, гипергаммаглобулинемия, злокачественная лимфома, болезнь тяжелых цепей, болезнь легких цепей
Увеличение общей концентрации белка и увеличение белка М.
IgG является наиболее распространенным
Увеличение IgA
предварительный отборочный тест
односторонняя иммунодиффузия в агаре
иммунотурбидиметрия
Обнаружение белка легкой цепи мочи
Белок недели (BJP)
Легкая цепь иммуноглобулина (белок М)
Конденсин
предварительный отборочный тест
Метод термического осаждения-растворения
При условии PH: 4,9±0,1.
Нагрейте до 40-60℃
происходит коагуляция
Поднимите до 90-100 ℃
растворяться
Уменьшить до 56℃
вновь затвердеть
Может быть отрицательным в крови
Потому что белок этой недели имеет небольшую молекулярную массу.
Легко выводится почками
Зональный электрофорез сыворотки
использовать
Мембрана из ацетата целлюлозы и электрофорез в агарозе
Белковая полоса М
плотная узкая белковая полоса
в зоне r (иногда в бета или зоне)
Самые основные, предпочтительные методы предварительного скрининга и качественных испытаний.
Невозможно правильно определить тип иммуноглобулина
иммуноэлектрофорез
Мы можем только оценить, какой это тип Ig.
Невозможно подтвердить
иммунофиксационный электрофорез
Подтверждающий тест на белок М
наиболее часто используемый метод
Качественная и типирующая идентификация моноклональных антител
Предпочтительный метод
Идентификация типов легкой цепи белка М
наиболее часто используемый метод
подтема
аутоиммунное заболевание
основная концепция
Иммунная толерантность
к собственным тканям и клеточным компонентам
Нет иммунного ответа
вызвать минимальный иммунный ответ
Обладает иммуностабилизирующим действием
Следовые количества аутоантител и сенсибилизированных лимфоцитов могут существовать в нормальной сыворотке человека.
самоиммунный
Иммунная толерантность нарушается.
Генерировать иммунный ответ на собственные компоненты
Наличие аутоантител или сенсибилизированных Т-лимфоцитов.
аутоиммунное заболевание
Аутоантитела или сенсибилизированные Т-лимфоциты могут вызывать иммунные реакции с соответствующими собственными компонентами.
Повреждение тканей и органов или дисфункция вследствие иммунного ответа.
Классификация
органоспецифические аутоиммунные заболевания
ограничивается определенным органом или тканью
Хронический тиреоидит, тиреоидит Хашимото.
Болезнь Аддисона (первичная хроническая надпочечниковая недостаточность)
Миастения, атрофический гастрит.
Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, аутоиммунная гемолитическая анемия.
Специфические тромбоциты и эритроциты
неорганоспецифические аутоиммунные заболевания
Группа заболеваний, поражающих множество тканей, органов или систем.
Системная красная волчанка (СКВ), ревматоидный артрит (РА), синдром Шегрена (СС)
Общая особенность
Большинство причин неизвестны
Нет стимула становиться больше
спонтанность
идиопатический
В основном женщины
Больше женщин, чем мужчин
Стариков больше, чем молодых
генетически предрасположенный
Сенсибилизированные Т-лимфоциты с аутоантителами или аутологичными тканевыми клетками
Болезни могут пересекаться
неизлечимый
Чередование приступов и ремиссий
аутоантиген
Высвобождение загадочных антигенов
Сперматозоиды, содержимое глаз, мозг и т. д.
Те, кто не контактировал с иммунной системой, иммунная система не знает.
Симпатическая офтальмия
Одно глазное яблоко повреждено, содержимое вытекло
Тело также атакует другой здоровый глаз.
изменения в собственном составе
Денатурированный IgG
Стимулирует выработку организмом антиденатурированных антител IgG (ревматоидный фактор РФ).
ревматоидный артрит
Перекрестная реактивность, вызванная общими антигенами
ревматическая лихорадка
Белок М у гемолитических стрептококков группы А
То же, что и антигены базальной мембраны эндокарда, суставов и клубочков.
вызвать перекрестную реакцию
острый гломерулонефрит
ревматическая лихорадка
Распространенные аутоиммунные заболевания
Реакция гиперчувствительности I типа
II реакция гиперчувствительности
миастения гравис
аутоантиген
рецептор ацетилхолина
механизм
Аутоантитела связываются с рецепторами ацетилхолина в нервно-мышечных соединениях.
Интернализованный и деградированный
Вызывает снижение чувствительности мышечных клеток к ацетилхолину, выделяемому мотонейронами.
Вызывает слабость скелетных мышц
Гипертиреоз (болезнь Грейвса)
аутоантиген
Рецептор тиреотропного гормона (TSHR)
Антитела к рецепторам ТТГ
механизм
диффузный токсический зоб
Реакция гиперчувствительности III типа
Системная красная волчанка (СКВ)
аутоантиген
ядерный антиген
Нуклеиновые кислоты, нуклеопротеины, гистоны
аутоантитела
антинуклеарные антитела (АНА)
механизм
Иммунные комплексы откладываются в
Сердечно-сосудистая соединительная ткань, базальная мембрана клубочка, серозная оболочка, синовиальная оболочка суставов и стенки мелких кровеносных сосудов органов.
активировать комплемент
Привлечь нейтрофильную инфильтрацию
Функции
Чаще встречается у молодых женщин
Кумулятивная мультиорганная, мультисистемная
лицо
Бабочка эритема
кожа
кольцевидная эритема
Фотосенсибилизация, лихорадка, сыпь.
Поражение почек (гломерулонефрит), сердечно-сосудистые заболевания
анемия, психиатрические симптомы
Артралгия, серозит
дополнять
активный период
из-за чрезмерной активации
падение уровня
После стабилизации
Повышенная реактивность
аутоантитела
антинуклеарные антитела (АНА)
Большинство аутоиммунных заболеваний являются положительными.
В основном встречается при нелеченной СКВ.
Преимущественно тип IgG
Не специфичен для органа или вида
Реагирует с ядрами клеток всех животных.
Классификация
антитела против ДНК
антигистоновые антитела
Анти-негистоновые антитела
антинуклеолярные антитела
Обнаружение
непрямая иммунофлуоресценция
антитела против дцДНК
Антитела против двухцепочечной ДНК
Относится к антинуклеарным антителам (АНА).
Специфические, характерные антитела
Частое явление в активные периоды
метод
Trypanosoma equi или Greenfly
антигенная матрица
непрямая иммунофлуоресценция
Самый специфичный, чувствительный и часто используемый метод.
антитела против Sm
сигнатурные аутоантитела
Ревматоидный артрит (РА)
аутоантитела
тип
Ревматоидный фактор (РФ)
Денатурированный Fc-сегмент IgG
аутоантитела к антигенам
Преимущественно тип IgM
IgA, IgG, IgE
Отрицательный результат не исключает РА.
Антикератиновые антитела (АКА)
Признаки прогноза
высокий титр
Состояние более серьезное
Антициклические цитруллинированные антитела (антитела к ЦЦП)
Очень специфичный
Ранняя диагностика может привести к положительному результату
Метод радиочастотного обнаружения
Тест на агглютинацию частиц латекса
косвенный метод
Могу проверить только IgM
ИФА
РФ для разных типов Ig
Кроличьи IgG используются в качестве антигена, нанесенного на твердофазный носитель.
В сочетании с тестируемым образцом
Добавьте меченные ферментом античеловеческие IgG, IgM, IgA и IgE соответственно.
РФ как мостиковый антиген
Синдром Шегрена (СС)
также известен как
синдром Шегрена
особенность
Дисфункция секреторных желез
Сухость кожи и слизистых оболочек
Чаще всего поражаются слезные и слюнные железы.
Сухие глаза и рот
разделен на
начальный
Кумулятивные ткани, кроме экзокринных желез
Вторичный
Пометить антитело
антитела против SSA/Ro
антитело анти-SSB/La
Полимиозит (ПМ) и дерматомиозит (СД)
полимиозит
Преимущественно мышечные повреждения
Дерматомиозит
Повреждение мышц и повреждение кожи
Пометить антитело
Джо-1
Я пнул свою кожу ногами.
ПМ-1
Склеродермия (Скл)
Системное заболевание
Прогрессирующий системный склероз (ПСС)
Производительность
Кожа становится более плотной и твердой
Пометить антитело
антитело против Scl-70
Будь строг со своей женой (7)
Метод обнаружения общих антинуклеарных антител (общего ANA) в сыворотке крови
Непрямой иммунофлуоресцентный анализ (IIF)
антиген
клетки HEp2
Клетки рака головы человека, богатые ядерными компонентами
Реагирует с тестируемой сывороткой
Затем добавьте меченные FITC античеловеческие IgG (вторичные антитела)
Самый эффективный
Характер флуоресценции и клиническое значение
Однородный тип
Высокий потенциал
Встречается при системной красной волчанке (СКВ).
Тип периферической/ядерной мембраны
Высокий потенциал
Видел только в SLE
Особенно в активный период SEL
Быстрая активность заболевания
Наиболее общий
пятнистый тип
Смешанное заболевание соединительной ткани (СЗСТ)
смешанные пятна
ядрышковый тип
Склеродермия (СКЛ)
Жесткосердные люди
Реакция гиперчувствительности IV типа
вызванный реакцией Т-клеток на аутоантигены
аутореактивный Т-клеточный опосредованный
диабет 1 типа
Наличие аутореактивных Т-клеток у пациентов
CD8 CTL
Th1-клетки
Общие тесты на аутоантитела
Профиль антител против ENA
ЭНА
Общее название экстрагируемых зигогенных антигенов.
Доступен в физиологическом растворе или фосфатном буфере.
извлеките это
АНА не может
антитела к ЭНА
В основном IgG
Метод обнаружения
иммуноблоттинг
клиническое значение
Не включает антитела против двухцепочечной ДНК (антитела против дцДНК).
Потому что он принадлежит АНА
Обнаружение других аутоантител
Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (ANCA)
Васкулит
Целевой антиген перинуклеарных (pANCA) антител
Миелопероксидаза (МПО)
Миелоидно-специфический
Итак, вокруг ядра
Целевой антиген цитоплазматических (cANCA) антител
Протеаза-3 (PR3)
Антимитохондриальные антитела (АМА)
Первичный билиарный цирроз печени (ПБЦ)
Антифосфолипидное антитело (APLA)
Включает антикардиолипиновые антитела (ACLA).
Гиперкоагуляционное состояние крови
тромбоз
АКЛА
Женщины с СКВ более склонны к образованию тромбов
Во время беременности возможен выкидыш
Антитела против гладких мышц (ASMA)
Аутоиммунный гепатит (АИГ)
Непрямой иммунофлуоресцентный анализ (IIF)
в качестве субстрата
клетки печени обезьяны
Ткань почки, желудка или печени крысы
Антитиреоглобулиновые антитела (АТГА)
Тиреоидит Хашимото (HT)
Антитело против париетальных клеток (PCA), антитело против внутреннего фактора
атрофический гастрит
злокачественная анемия
болезнь гиперчувствительности
реакция гиперчувствительности
аллергия
После первоначальной реакции на сенсибилизацию
ответь еще раз
физиологическая дисфункция
потеря клеток ткани
Аномальный иммунный ответ
иммунная защита
слишком высоко
Реакция гиперчувствительности I типа
IgE-антитела, опосредованные
Цитотропизм
связывается с тучными клетками
Немедленная гиперчувствительность/анафилаксия
несколько минут
принцип
Продукция аллерген-специфического IgE после первичного ответа
Связывается с рецепторами IgE Fc на тучных клетках.
сенсибилизация
Сенсибилизированная дегрануляция тучных клеток во время повторного ответа
Высвободить биоактивные медиаторы
Гистамин, лейкотриены
причина
спазм гладких мышц
В основном вызвано лейкотриенами
Основные вещества, вызывающие бронхиальную астму
Увеличение проницаемости мелких кровеносных сосудов.
Увеличение секреции желез слизистой оболочки.
Чувствительные нервные окончания
активация эозинофилов
Основные компоненты, участвующие в реакции
аллергены
определенные лекарства
пенициллин
ингаляционные аллергены
пыльца, клещи
пищевые аллергены
молоко, креветки
Требуется участие фактора активации тромбоцитов.
антитело
IgE антитела
Также могут встречаться подклассы IgG.
IgG4
Поскольку это не активирует комплемент
Гиперчувствительность I типа без участия комплемента.
участвующие клетки
Тучные клетки
эозинофилы
паразитарная инфекция
Может быть увеличено
базофилы
Клинические симптомы
формула
Тип I: быстрое начало, I миллиард кислотно-основного типа, шоковая астма I типа и аллергия.
Миллиард:E:IgE
Системный
анафилактический шок
Вызвано приемом лекарств или инъекцией гетерогенной сыворотки.
Такие как противостолбнячный антитоксин, дифтерийный антитоксин.
пенициллиновый анафилактический шок
кровяное давление падает
Вызывается вазоактивными веществами
телеангиэктазия
паразитарная инфекция
местонахождение
респираторная аллергическая реакция
Аллергический ринит и аллергическая астма
Желудочно-кишечная аллергическая реакция
аллергический гастроэнтерит
аллергическая реакция кожи
Крапивница, экзема, ангионевротический отек
Вызывают функциональное повреждение эффекторных органов.
но без существенных патологических повреждений
вызывает реакции гиперчувствительности I типа
ИЛ3/ИЛ5, ИЛ4
Метод тестирования
Тест на специфичность
Внутрикожный тест на аллерген
Ковыряние, расчесывание, внутрикожные инъекции.
внутрикожная инъекция
Кожные пробы, такие как пенициллин.
положительный контроль
Гистамина гидрохлорид
ложно положительный
Большое количество гормональных препаратов
ложноотрицательный результат
Эффекты антигистаминных препаратов
процесс
Шприц вводит экстракт аллергена в кожу.
Антиген должен быть соответствующим образом разбавлен.
Объем впрыска
0,01-0,02мл
место инъекции
внутренняя часть предплечья
Невозможно пустить кровь или сделать подкожную инъекцию.
несколько аллергенов одновременно
расстояние
2,5-5,0 см
Очень подозрительный и чувствительный
5,0 см
20-30 минут для наблюдения за результатом
Покраснение (прик-тест)
Волдыри (внутрикожный тест)
Обнаружение специфического IgE (sigE)
Тест на адсорбцию радиоаллергенов (RAST)
процесс
Адсорбируйте очищенные аллергены на твердые носители.
Добавьте сыворотку для тестирования
Поместите радиоактивно меченное антитело против IgE (вторичное антитело).
Количественное определение уровней специфических IgE в сыворотке.
Например, сывороточная аллергия
Требуется инъекция противостолбнячного антитоксина.
Маленькие и множественные инъекции
Реакция гиперчувствительности II типа
Цитотоксический или цитолитический
Яд II типа, 23mygod
Антигены поверхности клеток-мишеней связываются с антигенами класса IgG или IgM.
При участии комплемента, макрофагов и NK-клеток
Основные ингредиенты
антитело
IgG или IgM
Дополняющее участие
растворение
участвующие клетки
Макрофаги
Опсонофагоцитоз
NK-клетки
ADCC-эффект
клиническое заболевание
формула
Гипертиреоз, мышечная сила, жар и кровоизлияния
трансфузионная реакция
гемолитическая болезнь новорожденного
Резус для беременных (-), резус для первого ребенка ( )
Предотвращение гемолиза плода при следующей беременности
В течение 72 часов после доставки
Инъекции антирезусных антител
Независимо от того, насколько высока скорость
Аутоиммунная гемолитическая болезнь (АИГА)
Лекарственно-аллергическая цитопения
Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП)
Синдром легочного кровотечения-нефрита (синдром Гудпасчера)
Гипертиреоз
(Болезнь Грейвса)
миастения гравис
(МГ)
острая ревматическая лихорадка
(АРФ)
Обнаружение
Тест на антитела к клеткам крови
Может быть вызван антигеном АВО
Вот и все о крови
клиническое значение
Помогает в диагностике аутоиммунной гемолитической анемии.
антирезусные антитела
Помогает при гемолитической болезни новорожденных, вызванной резус-несовместимостью групп крови.
Стрептолизин О (АСО)
Белок М клеточной стенки стрептококка
Соответствует сердцу и клубочкам
Таким образом, они будут объединены, чтобы нанести ущерб.
Заболевания, связанные со стрептококком
фарингит
тонзиллит
средний отит
скарлатина
острый гломерулонефрит
острая ревматическая лихорадка
Реакция гиперчувствительности III типа
иммунный комплекс
Растворимый иммунный комплекс среднего размера (IC: IgG, IgM)
Откладывается в базальной мембране капилляров локально или в нескольких местах по всему телу.
активировать комплемент
Комплемент вызывает повреждение стенок кровеносных сосудов
А затем индуцировать участие тромбоцитов, базофилов и нейтрофилов.
Застой, отек, местный некроз
Нейтрофильная инфильтрация
Основная характеристика воспалительной реакции
метод памяти
Соединение типа III, 23mygod, Третье пленарное заседание
Основные ингредиенты
антитело
IgG, IgM
участвующие клетки
нейтрофилы
Самая мощная причина повреждения тканей
базофилы
Тучные клетки
тромбоциты
Иммунный комплекс (ИК), циркулирующий иммунный комплекс (ЦИК)
Растворимый иммунный комплекс антиген-антитело среднего размера
болезнь
местное иммунокомплексное заболевание
Реакция Артюса/Реакция Артура
Экспериментальная местная аллергическая реакция
Многократные подкожные инъекции лошадиной сыворотки кроликам
После 4-6 инъекций
Местный отек, кровоизлияния и некроз.
Реакция Артюса
инсулин
Поэтому при введении инсулина нужно вводить его в положение больного
вакцина
инъекция антисыворотки
системное иммунокомплексное заболевание
формула
Fenglang освежающий почки A
Ответ: Реакция Артюса.
сывороточная болезнь
Начало заболевания происходит через 1-2 недели после инъекции ксеногенной сыворотки животных.
Лихорадка, сыпь, лимфаденопатия, отек суставов и боль, а также преходящая протеинурия.
Немедленный шок
Реакция гиперчувствительности I типа
Постстрептококковый гломерулонефрит
Гемолитическая стрептококковая инфекция группы А.
2-3 недели
Откладывается на базальной мембране клубочков
иммуннокомплексный нефрит
Ревматоидный артрит
Денатурированный IgG
Аутоантитела к IgG = ревматоидный фактор (РФ)
Аутоантитела против IgG
Преимущественно антитела IgM
Встречается в мелких суставах
ревматоидный артрит
Встречается в крупных суставах.
системная красная волчанка
Комплексы ДНК и анти-ДНК-антитело
базальная мембрана кровеносных сосудов, отложенная в почках, суставах и других частях тела.
Вызывает гломерулонефрит, артрит и другие полиорганные поражения.
Обнаружение
Тестирование в организациях
иммуногистохимия
Обнаружение иммунных комплексов (ЦИК)
(ЦИК)
Классификация
Антигенспецифические методы
неантигенспецифические методы
Часто используется в клинической практике
Реакция гиперчувствительности IV типа
Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ)
Эффекторные Т-клетки (CD4 Th1) (CD8 CTL)
После связывания со специфическим антигеном
Воспалительная реакция, характеризующаяся мононуклеарно-макрофагальной инфильтрацией и повреждением тканей.
Основные ингредиенты
антиген
внутриклеточные паразиты
Бруцеллы, микобактерии туберкулеза, сальмонеллы тифи.
так грустно не выйти замуж
Вирусы, паразиты
Химический материал
Красители, краски, пестициды, косметика
лекарство
пенициллин
Также может возникнуть гиперчувствительность I типа.
клетки-мишени
клетки, содержащие микобактерию туберкулеза
Трансплантированные клетки или органы
опухолевые клетки
белок, к которому присоединен гаптен
участвующие клетки
эффекторные Т-клетки
CD4
Th1
CD8
CTL
Мононуклеары-макрофаги
болезнь
инфекционная реакция гиперчувствительности замедленного типа
Заражение внутриклеточными паразитическими возбудителями
Микобактерия туберкулеза
полостной туберкулез
Вирус
простейшее
контактный дерматит
Воздействие низкомолекулярных гаптеновых веществ
отторжение трансплантата
реакция хозяина против трансплантата
ВВГР
реакция трансплантат против хозяина
ГГР
Обнаружение
Принципы кожного тестирования
Внутрикожные инъекции, кожный пластырь
24-48 часов
Местное покраснение, отек, уплотнение, волдыри и т. д.
Цель
Обнаружение реакций гиперчувствительности IV типа
Статус клеточной иммунной функции
Туберкулиновый тест (ОТ)
метод
4-8 недель после заражения
может появиться
Старый туберкулин (ОТ) или очищенное белковое производное (PPD) микобактерии туберкулеза
48-72 часа наблюдения
покраснение, отек или твердость
>5 мм
Позитивный
Оценка результатов
<5 мм
Отрицательный
Это не означает, что больной инфицирован туберкулезом.
Потому что микобактерия туберкулеза задерживается
5-9/10-19 мм
Позитивный
Были инфицированы микобактерией туберкулеза или вакцинированы бациллой Кальметта-Герена (БЦЖ).
≥20 мм или волдыри или некроз
Сильный позитив
Высокий риск заражения туберкулезом
Цель
Выберите получателей вакцины БЦЖ
Исключить туберкулезную инфекцию
Понять функцию клеточного иммунитета
кожный патч-тест
Марлю, смоченную раствором аллергена, накладывают на внутреннюю сторону предплечья или спину.
Накройте целлофаном или вощеной бумагой.
24-72 часа
покраснение, отек, волдыри
Разница в кожных тестах
инфильтративная пневмония
Пятнистая тень легких
Лихорадка, кашель, кровь в мокроте.
диагноз
Посев мокроты на кислотоустойчивые бактерии
Диагностика туберкулеза
Подведем итог
формула
Тип I с немедленным началом, тип II яд, комплекс типа III, IV с отсроченным началом
Антитела и клетки
100 миллионов кислотно-щелочных удобрений, 23года, Третий пленум ЦК КПК, 4Т клетки
болезнь
Тип I
Шоковая астма и аллергия
Тип II
Гипертиреоз, мышечная сила, жар и кровоизлияния
Тип III
Fenglang освежающий почки
Тип IV
Трансплантационный туберкулез, контактный дерматит
Инфекционные заболевания
бактериальная инфекция
стрептококковая инфекция
Грамположительные стрептококки
Стрептококк пиогенный
Бета-гемолитический стрептококк группы А
Метод тестирования
тест латексной агглютинации
иммунотурбидиметрия
Часто используемые иммунологические маркеры
Антистрептолизин «О»
ASO
увеличить высоту
Острый фарингит и другие инфекции верхних дыхательных путей.
ревматическая лихорадка
Реакция гиперчувствительности III типа
ревматический миокардит
ревматоидный артрит
перикардит
острый гломерулонефрит
Сальмонелла брюшного тифа
Клинические симптомы
самоизлечивающийся гастроэнтерит
Смертельная брюшной тиф (кишечная лихорадка)
Метод тестирования
гипертрофическая реакция
Такой толстый, такой грустный
Иммуноферментный анализ
ИФА
Микобактерия туберкулеза
туберкулез
Метод тестирования
туберкулиновый тест
Старый туберкулин (ОТ)
Производное очищенного белка туберкулина (PPD)
Символы активности туберкулеза
антитела против PPD
Позитивный
вирусная инфекция
вирус гриппа
состав
Гемагглютинин (ГА)
Нейраминидаза (NA)
метод
Тест торможения гемагглютинации
принцип
Вирусную суспензию смешивают с тестируемой сывороткой (антителами).
Имеют соответствующие антитела
Может ингибировать связывание гемагглютинина на поверхности вируса с эритроцитами.
Если добавить эритроциты, они больше не будут объединяться.
Нет агглютинации
Позитивный
Вирус Коксаки
Может заразить организм и стимулировать иммунную систему организма.
Атака бета-клеток поджелудочной железы
вызвать диабет
Гепатит А
Метод обнаружения
ИФА и хемилюминесцентная технология
Обнаружение HAV-IgM и IgG
IgM
Диагностировать текущую инфекцию
раннее заражение
IgG
Поздняя стадия заражения
прошлая инфекция
Гепатит Б
HBsAg (поверхностный антиген)
появился раньше
HBsAb (антитело против HBs)
защитные антитела
HBeAg (е-антиген)
Указывает на то, что HBV активно реплицируется in vivo.
Очень заразно
HBeAb (антитело против HBe)
Снижение способности к репликации
Снижение заразности
HBcAg (основной антиген)
ВГВ присутствует и активно реплицируется
прямой индикатор
Трудно обнаружить
HBcAb (анти-HBc)
IgM
Острая фаза гепатита В и ранняя инфекция
IgG
прошлая инфекция
ДНК ВГВ
самый чувствительный
самый прямой
хронический активный гепатит
клинические проявления
В анамнезе есть хронический гепатит.
HBc IgM положительный
нарушение функции печени
ген повреждения
внепеченочное повреждение
Вызвано отложением иммунных комплексов
механизм разрушения
Клетки CD8 вызывают лизис клеток, распознавая HBcAg и HLA-I, экспрессируемые на мембране клеток печени.
Попросите двойную сыворотку
Цель
Наблюдать, выше ли титр антител в период восстановления, чем в начальной стадии.
врожденная инфекция
Инфекции, попавшие плодом в организм матери
под общим названием ФАКЕЛ
4 предмета евгеники и образования
Токсоплазма гонди (ТОХ)
Вирус краснухи (RUV)
Цитомегаловирус (ЦМВЦ)
Вирус простого герпеса (ВПГ)
Клинические симптомы
аборт
уродство
Умственная отсталость, нарушение слуха.
паразитарная инфекция
Шистосомальная инфекция
реакция осаждения кольцевого яйца
Реакция антиген-антитело
Секреция зрелых мирацидий внутри яиц (вокруг яиц)
Связывается с антителами в сыворотке человека
Образование специфических выделений в форме пузырьков, пальцев, полосок с выраженными преломляющими свойствами.
Позитивный
полиэтиленгликоль
гибридомная технология
термоядерный агент
иммунная мутность
Агент, повышающий мутность
Очистка антигена
метод осаждения полимера