1. Tutti i processi di preparazione dei campioni devono seguire procedure operative sterili. 2. Il diluente deve essere completamente preriscaldato a 36℃±1℃ per 15 minuti~30 minuti prima del test. 3. I campioni congelati possono essere scongelati a una temperatura compresa tra 2°C e 5°C per non più di 18 ore o a una temperatura non superiore a 45°C per non più di 15 minuti. 4. Campioni solidi e semisolidi: pesare 25 g del campione utilizzando procedure asettiche, collocarlo in una bottiglia sterile contenente 225 mL di diluente (nella bottiglia sono preimpostate da 5 a 10 microsfere di vetro sterili) e agitare con un oscillatore 2 volte , 30 secondi ogni volta, per preparare una soluzione omogenea del campione 1:10. 5. Campioni liquidi: per i campioni liquidi, agitarli accuratamente e quindi utilizzare una cannuccia sterile per prelevare 25 ml di campione e inserirli in una bottiglia sterile contenente 225 ml di diluente (nella bottiglia sono preimpostate da 5 a 10 microsfere di vetro sterili) Utilizzare un oscillatore per agitare due volte, 30 secondi ogni volta, per preparare una soluzione omogenea del campione 1:10.

1. Utilizzare una pipetta o micropipetta sterile da 1 ml per assorbire 1 ml della soluzione omogenea del campione 1:10 e iniettarla lentamente lungo la parete della provetta in una provetta sterile contenente 9 ml di diluente (notare che la punta della pipetta o della micropipetta (non toccare il diluente), utilizzare un oscillatore per agitare la provetta 3 volte, 10 secondi ogni volta, per preparare una soluzione omogenea 1:100 del campione. 2. Prendere un'altra pipetta sterile da 1 ml o un puntale per micropipetta ed effettuare incrementi di 10 volte dell'omogeneizzazione del campione in base alla sequenza operativa di cui sopra. Per ciascuna diluizione incrementale, utilizzare una pipetta o un puntale sterile da 1 ml.

Numero totale di batteri lattici

Conteggio dei bifidobatteri

Conteggio dello streptococco termofilo

Conteggio dei lattobacilli

Include i conteggi solo per Bifidobacterium spp.

Esempi di specie di Lactobacillus e terreni di coltura utilizzati per il rilevamento di diversi elementi

1. Selezionare una piastra con una conta delle colonie compresa tra 30CFU e 300CFU e nessuna colonia diffusa per contare il numero totale di colonie. Per piastre con meno di 30 CFU, registrare il numero specifico di colonie e per piastre con più di 300 CFU, registrare il numero di colonie come troppe per essere conteggiate. Il numero di colonie per ciascuna diluizione deve essere la media di due piastre. 2. Quando su una delle piastre crescono colonie a scaglie più grandi, non deve essere utilizzata. Invece, la piastra senza colonie a scaglie deve essere utilizzata come numero di colonie a quella diluizione se le colonie a scaglie sono inferiori alla metà della piastra. e la restante metà è La distribuzione delle colonie è molto uniforme, quindi è possibile contare metà della piastra e moltiplicare per 2 per rappresentare il numero di colonie su una piastra. 3. Quando sulla piastra appare una crescita della catena senza confini evidenti tra le colonie, contare ogni singola catena come una colonia.

1. Se il numero di colonie su una sola piastra di diluizione rientra nell'intervallo di conteggio appropriato, calcolare il numero medio di colonie sulle due piastre, quindi moltiplicare il valore medio per il corrispondente fattore di diluizione per ottenere il risultato del numero totale di colonie per grammo o per millilitro. 2. Se il numero di colonie su due piastre di diluizione in serie rientra nell'intervallo di conteggio appropriato, calcolare secondo la formula (1): N=∑C/(n1 n2)*d Nella formula: N——numero di colonie nel campione; ∑C——La somma del numero di colonie su una piastra (una piastra contenente un intervallo adeguato di numeri di colonie); n1——Il numero di piastre della prima diluizione (rapporto di diluizione basso); n2——Il numero di piastre della seconda diluizione (alto rapporto di diluizione); d——fattore di diluizione (prima diluizione). 3. Se il numero di colonie sulle piastre di tutte le diluizioni è superiore a 300CFU, contare la piastra con la diluizione più elevata. Altre piastre possono essere registrate come troppo numerose per essere contate. Il risultato viene calcolato moltiplicando il numero medio di colonie per fattore di diluizione più elevato. 4. Se il numero di colonie sulla piastra a tutte le diluizioni è inferiore a 30 CFU, il calcolo deve basarsi sul numero medio di colonie alla diluizione più bassa moltiplicato per il fattore di diluizione. 5. Se non si riscontra crescita di colonie sulle piastre di tutte le diluizioni (comprese le soluzioni originali dei campioni liquidi), il calcolo sarà inferiore a 1 moltiplicato per il fattore di diluizione più basso. 6. Se il numero di colonie della piastra a tutte le diluizioni non è compreso tra 30CFU e 300CFU e alcune di esse sono inferiori a 30CFU o superiori a 300CFU, il numero medio di colonie più vicine a 30CFU o 300CFU verrà moltiplicato per il fattore di diluizione per il calcolo .

1. Quando il numero di colonie è inferiore a 100 CFU, deve essere arrotondato per eccesso secondo il principio dell'"arrotondamento" e riportato come numero intero. 2. Quando il numero di colonie è maggiore o uguale a 100CFU, la terza cifra viene arrotondata utilizzando il principio dell'"arrotondamento" e vengono prese le prime due cifre e le cifre successive vengono sostituite con 0; la forma di un esponente di 10, secondo il principio dell'arrotondamento. Dopo l'arrotondamento, utilizzare due cifre significative. 3. Il campionamento della pesatura è riportato in CFU/g, mentre il campionamento volumetrico è riportato in CFU/mL.

Viene emesso un report in base ai risultati della conta delle colonie e l'unità di reporting è espressa in CFU/g (mL)

Terreno di coltura MRS: peptone, estratto di manzo in polvere e estratto di lievito in polvere forniscono fonti di azoto, fonti di carbonio, vitamine, minerali e altri nutrienti necessari per la crescita batterica, il glucosio funge da fonte di carbonio fermentabile, ioni magnesio e così via; 80, citrato di triammonio e acetato di sodio possono favorire la crescita dei batteri lattici e neutralizzare le sostanze citotossiche; l'agar funge da tampone;

Terreno di coltura MC: il peptone di soia, l'estratto di manzo in polvere e l'estratto di lievito in polvere forniscono fonti di azoto, fonti di carbonio, vitamine, minerali e altri nutrienti necessari per la crescita batterica; il glucosio e il lattosio servono come carboidrati per promuovere la crescita dei batteri dell'acido lattico e del calcio; carbonato Neutralizza l'acido prodotto dal metabolismo batterico per alleviare la sua tossicità acida sulle cellule. Il rosso neutro funge da indicatore acido-base e svolge un ruolo coagulante; amalgamare bene. Una volta omogeneo, versare sul piatto. Allo stesso tempo, è normale che sulla piastra sia presente un precipitato bianco.

Terreno MRS modificato di mupirocina sale di litio e cisteina cloridrato: peptone, estratto di manzo in polvere e estratto di lievito in polvere forniscono fonti di azoto, fonti di carbonio, vitamine, minerali e altri nutrienti necessari per la crescita batterica Elementi di glucosio come fonte di carbonio fermentabile; gli ioni manganese, gli ioni magnesio, Tween 80, il citrato di triammonio e l'acetato di sodio possono favorire la crescita dei batteri lattici e neutralizzare le sostanze citotossiche; l'agar funge da tampone; Il sale di litio della mupirocina inibisce altri batteri lattici tranne il Bifidobacterium cisteina cloridrato che agisce come agente riducente.