1. Все процессы подготовки проб должны соответствовать стерильным процедурам. 2. Перед тестированием разбавитель должен быть полностью нагрет до температуры 36℃±1℃ в течение 15–30 минут. 3. Замороженные образцы допускается оттаивать при температуре от 2°С до 5°С не более 18 часов или при температуре не более 45°С не более 15 минут. 4. Твердые и полутвердые образцы: взвесьте 25 г образца с соблюдением асептических процедур, поместите его в стерильную бутылку, содержащую 225 мл разбавителя (во флаконе установлено от 5 до 10 стерильных стеклянных шариков), и встряхните с помощью осциллятора 2 раза. 30 секунд каждый раз, чтобы приготовить гомогенный раствор образца 1:10. 5. Жидкие образцы: жидкие образцы тщательно встряхните, затем с помощью стерильной соломинки возьмите 25 мл образца и поместите его в стерильную бутылку, содержащую 225 мл разбавителя (в бутылке заранее установлено от 5 до 10 стерильных стеклянных шариков). 2. Дважды встряхните генератором по 30 секунд, чтобы приготовить гомогенный раствор образца с соотношением 1:10.

1. Используйте стерильную пипетку или микропипетку объемом 1 мл, чтобы поглотить 1 мл гомогенного раствора образца 1:10, и медленно введите его вдоль стенок пробирки в стерильную пробирку, содержащую 9 мл разбавителя (обратите внимание, что кончик пипетки или кончик микропипетки не прикасайтесь к разбавителю), встряхните пробирку с помощью генератора 3 раза по 10 секунд каждый раз, чтобы приготовить гомогенный раствор образца 1:100. 2. Возьмите еще одну стерильную пипетку или наконечник микропипетки объемом 1 мл и выполните 10-кратную гомогенизацию образца в соответствии с вышеуказанной последовательностью операций. Для каждого постепенного разведения используйте стерильную пипетку или наконечник пипетки емкостью 1 мл.

Общее количество молочнокислых бактерий

Количество бифидобактерий

Количество термофильных стрептококков

Количество лактобактерий

Включает количество только Bifidobacterium spp.

Примеры видов Lactobacillus и культуральных сред, используемых для обнаружения различных предметов

1. Выберите чашку с количеством колоний от 30 КОЕ до 300 КОЕ и без расползающихся колоний, чтобы подсчитать общее количество колоний. Для чашек с содержанием менее 30 КОЕ запишите конкретное количество колоний, а для чашек с содержанием более 300 КОЕ запишите количество колоний как слишком большое для подсчета. Число колоний для каждого разведения должно быть средним по двум чашкам. 2. Если на одной из чашек растут более крупные хлопьевидные колонии, ее не следует использовать. Вместо нее следует использовать чашку без хлопьевидных колоний в качестве количества колоний при этом разведении, если хлопьевидные колонии составляют менее половины чашки. Распределение колоний очень равномерное, поэтому вы можете посчитать половину чашки и умножить на 2, чтобы получить количество колоний на одной чашке. 3. Когда на чашке появляется рост цепей без явных границ между колониями, считайте каждую отдельную цепочку колонией.

1. Если количество колоний только на одной чашке для разведения находится в пределах соответствующего диапазона подсчета, рассчитайте среднее количество колоний на двух чашках, а затем умножьте среднее значение на соответствующий коэффициент разведения, чтобы получить результат общего числа колоний на грамм или на миллилитр. 2. Если количество колоний на двух чашках с серийными разведениями находится в пределах соответствующего диапазона подсчета, производят расчет по формуле (1): N=∑C/(n1 n2)*d В формуле: N — количество колоний в образце; ∑C — сумма количества колоний на чашке (чашка, содержащая подходящий диапазон чисел колоний); n1——Количество тарелок первого разведения (малая степень разведения); n2 — количество чашек второго разведения (высокая степень разведения); d — коэффициент разведения (первое разведение). 3. Если количество колоний на чашках во всех разведениях превышает 300 КОЕ, подсчитайте чашку с самым высоким разведением. Другие чашки могут быть записаны как слишком многочисленные для подсчета. Результат рассчитывается путем умножения среднего количества колоний на число. Самый высокий коэффициент разбавления. 4. Если количество колоний на чашке при всех разведениях меньше 30 КОЕ, расчет следует основывать на среднем количестве колоний при наименьшем разведении, умноженном на коэффициент разведения. 5. Если на чашках всех разведений (включая исходный раствор жидкой пробы) рост колоний отсутствует, расчет должен быть меньше 1, умноженного на наименьший коэффициент разведения. 6. Если количество колоний в чашках при всех разведениях не находится между 30 КОЕ и 300 КОЕ, а некоторые из них меньше 30 КОЕ или превышают 300 КОЕ, для расчета среднее количество колоний, наиболее близких к 30 КОЕ или 300 КОЕ, будет умножено на коэффициент разведения. .

1. Если количество колоний менее 100 КОЕ, оно округляется в большую сторону по принципу «округления» и указывается как целое число. 2. При количестве колоний больше или равно 100КОЕ третья цифра округляется по принципу «округления» и берутся первые две цифры, а последующие цифры заменяются на 0; это также может быть выражено через; вид показателя степени 10, по принципу «округления». После округления используйте две значащие цифры. 3. Взвешивание проб указывается в КОЕ/г, а объемное – в КОЕ/мл.

Отчет выдается на основе результатов подсчета колоний, а единица измерения выражается в КОЕ/г (мл).

Культуральная среда MRS: пептон, порошок говяжьего экстракта и порошок дрожжевого экстракта обеспечивают источники азота, источники углерода, витамины, минералы и другие питательные вещества, необходимые для роста бактерий. Глюкоза служит ферментируемым источником ионов марганца, ионов магния и т. д.; 80, триаммонийцитрат и ацетат натрия могут способствовать росту молочнокислых бактерий и нейтрализовать цитотоксические вещества; фосфат служит буфером и коагулянтом;

Культуральная среда MC: соевый пептон, порошок говяжьего экстракта и порошок дрожжевого экстракта являются источниками азота, источника углерода, витаминов, минералов и других питательных веществ, необходимых для роста бактерий. Глюкоза и лактоза служат углеводами, способствующими росту молочнокислых бактерий, а также кальцием; карбонат Нейтрализует кислоту, вырабатываемую в результате метаболизма бактерий, чтобы уменьшить ее кислотную токсичность для клеток. Нейтральный красный служит индикатором кислотно-щелочного состояния; культуральная среда содержит 10 г/л карбоната кальция, который является нерастворимым веществом и нуждается в коагуляции; Тщательно перемешайте. Когда смесь станет однородной, вылейте ее на тарелку. При этом наличие белого осадка на пластинке является нормой.

Модифицированная среда MRS, содержащая литиевую соль мупироцина и гидрохлорид цистеина: пептон, порошок говяжьего экстракта и порошок дрожжевого экстракта обеспечивают источники азота, источники углерода, витамины, минералы и другие питательные вещества, необходимые для роста бактерий, в качестве ферментируемого источника углерода; ионы марганца, ионы магния, Твин 80, триаммонийцитрат и ацетат натрия могут способствовать росту молочнокислых бактерий и нейтрализовать цитотоксические вещества; фосфат служит буфером и коагулянтом; Литиевая соль мупироцина подавляет действие других молочнокислых бактерий, кроме бифидобактерий, в качестве восстановителя выступает гидрохлорид цистеина;