Galerie de cartes mentales 6Tests microbiologiques
Il s'agit d'une carte mentale sur les tests microbiens en microbiologie alimentaire-6, y compris la détermination de la quantité microbienne, la collecte et le traitement des échantillons, Bioanalyse et technologies associées, etc.
Modifié à 2024-01-20 17:23:40Cent ans de solitude est le chef-d'œuvre de Gabriel Garcia Marquez. La lecture de ce livre commence par l'analyse des relations entre les personnages, qui se concentre sur la famille Buendía et raconte l'histoire de la prospérité et du déclin de la famille, de ses relations internes et de ses luttes politiques, de son métissage et de sa renaissance au cours d'une centaine d'années.
Cent ans de solitude est le chef-d'œuvre de Gabriel Garcia Marquez. La lecture de ce livre commence par l'analyse des relations entre les personnages, qui se concentre sur la famille Buendía et raconte l'histoire de la prospérité et du déclin de la famille, de ses relations internes et de ses luttes politiques, de son métissage et de sa renaissance au cours d'une centaine d'années.
La gestion de projet est le processus qui consiste à appliquer des connaissances, des compétences, des outils et des méthodologies spécialisés aux activités du projet afin que celui-ci puisse atteindre ou dépasser les exigences et les attentes fixées dans le cadre de ressources limitées. Ce diagramme fournit une vue d'ensemble des 8 composantes du processus de gestion de projet et peut être utilisé comme modèle générique.
Cent ans de solitude est le chef-d'œuvre de Gabriel Garcia Marquez. La lecture de ce livre commence par l'analyse des relations entre les personnages, qui se concentre sur la famille Buendía et raconte l'histoire de la prospérité et du déclin de la famille, de ses relations internes et de ses luttes politiques, de son métissage et de sa renaissance au cours d'une centaine d'années.
Cent ans de solitude est le chef-d'œuvre de Gabriel Garcia Marquez. La lecture de ce livre commence par l'analyse des relations entre les personnages, qui se concentre sur la famille Buendía et raconte l'histoire de la prospérité et du déclin de la famille, de ses relations internes et de ses luttes politiques, de son métissage et de sa renaissance au cours d'une centaine d'années.
La gestion de projet est le processus qui consiste à appliquer des connaissances, des compétences, des outils et des méthodologies spécialisés aux activités du projet afin que celui-ci puisse atteindre ou dépasser les exigences et les attentes fixées dans le cadre de ressources limitées. Ce diagramme fournit une vue d'ensemble des 8 composantes du processus de gestion de projet et peut être utilisé comme modèle générique.
Microorganismes présents dans les aliments et leurs Détection des métabolites
Détermination du nombre microbien
nombre de plaques standard CPS
processus d'expérimentation
échantillonnage
dilution
dilution dix fois
Inoculation : 2-3 dilutions en série, contrôles parallèles
méthode de coulée
Méthode de revêtement
Détecte les bactéries sensibles à la chaleur
Plus adapté aux bactéries strictement aérobies
La morphologie de la colonie est évidente et les caractéristiques du groupe peuvent être observées.
A ne pas confondre avec les particules alimentaires
Les colonies ont tendance à se chevaucher et à se mélanger
nourrir
milieu, conditions
Culture inversée : perte de poids moyenne inférieure à 15 %
Empêcher les gouttelettes d'eau de couler
Empêcher la croissance des bactéries
Nombre de colonies
Sélectionnez une plaque avec un nombre de colonies bactériennes approprié, 30 à 300 CFU pour les bactéries et 10 à 150 CFU pour les moisissures/levures.
Méthodes : observation à l’œil nu, compteur de colonies
Identifier les colonies : les colonies sont trop petites ou similaires aux particules de l'échantillon - méthode de réduction du colorant, TTC (tétrazolium rouge, milieu chromogène), caractéristiques bactériennes
calculer
Rapport, deux chiffres significatifs, le contrôle à blanc a des résultats de tests sur colonies invalides
importance
Déterminer le degré de contamination microbienne et la qualité de l’hygiène
Prédire la durée de conservation des aliments
reflète la fraîcheur
Surveiller la dynamique de croissance et de reproduction
Tests de produits biologiques : contamination, probiotiques
Autres méthodes
Méthode du film sec hydraté-milieu de culture
Principe : Système de milieu de culture préfabriqué, film sec d'hydratation renouvelable, milieu de culture, gel soluble dans l'eau froide, indicateur, grille imprimée
Étapes opératoires : dilution, inoculation, culture, comptage, reporting
avantage
grande productivité
Petite erreur
Internationalisation : approbation des organismes officiels
Rapide : 6 à 14 heures peuvent estimer des résultats précis dans les 24 heures 3 à 5 jours pour confirmer le nombre de moisissures et de levures
support d'identification
méthode d'inoculation par rotation
Selon la spirale d'Archimède comme trajectoire d'inoculation, l'échantillon est inoculé à un rythme décroissant.
Inoculation automatique en spirale, système de comptage
Méthode de comptage : Il y a plus de colonies au milieu et moins autour d'elles. Calculez le nombre de colonies par unité de surface.
avantage
Les résultats de mesure sont fortement corrélés avec SPC
défaut
Méthode de détermination du numéro le plus proche MPN
Utiliser les fonctions physiologiques spéciales des micro-organismes à tester et utiliser des milieux de culture sélectifs (pour réduire les interférences) pour déterminer la présence et l’abondance des micro-organismes.
Détection de micro-organismes aux propriétés nutritionnelles et métaboliques tels que les coliformes
facile à utiliser
Les micro-organismes qui ne sont pas dominants dans la communauté microbienne peuvent être mesurés
coliformes
Bactéries intestinales, liées à la contamination fécale
Bactéries non saccharomyces négatives aérobies et anaérobies facultatives qui fermentent le lactose pour produire de l'acide et des gaz dans certaines conditions de culture.
Fermentation primaire : LST, fermentation secondaire BGLB pour les producteurs de gaz
L’importance de détecter E. coli
Bactéries indicatrices de contamination fécale pour évaluer la qualité de l'hygiène alimentaire
Évaluer le potentiel de contamination par des bactéries entériques pathogènes, telles que Salmonella, Shiga
Avantages en tant que bactéries indicatrices
Nombreuses sources, grandes quantités, taux de détection élevé
Le temps de survie externe est fondamentalement le même
La résistance aux fongicides est fondamentalement la même
Facile à utiliser, aucun équipement compliqué requis
haute sensibilité
Méthode de comptage par réduction de colorant (méthode d'estimation)
Principe : Les cellules vivantes contiennent des enzymes réductases qui peuvent réduire des carburants spécifiques d'une couleur à une autre.
Réactifs couramment utilisés
Bleu de méthylène
bleu à blanc
Résazurine
Le bleu foncé vire au rose, au blanc
Tétrazole
Incolore à rouge
Le temps de réduction est inversement proportionnel à la concentration microbienne et est souvent utilisé pour l’hygiène du lait et l’activité des spermatozoïdes.
avantage
Facile, rapide et économique
défaut
La capacité réductrice des micro-organismes est différente et difficile à estimer. Elle ne convient pas aux aliments contenant des réductases.
Méthode de comptage microscopique direct DMC
tableau de comptage comptage direct
Chambre de comptage cellulaire Petrovholzer (bactéries générales), hémocytomètre (spores de levures/moisissures)
Compte le nombre de micro-organismes dans un certain volume, mais ne peut pas distinguer diverses bactéries
avantage
Analyse rapide et pratique de la morphologie cellulaire, diapositives faciles à enregistrer
défaut
Convient uniquement aux échantillons à haute teneur bactérienne, avec une faible précision et faciles à fatiguer.
Autres méthodes
Méthode de frottis avec coton-tige, méthode d'échantillonnage
Détection de micro-organismes de surface
Appliqué sur les aliments, les surfaces d'équipement, les lieux publics
Méthode de filtration sur membrane, concentration de l'échantillon
Les échantillons contenant très peu de bactéries peuvent enrichir les bactéries et améliorer le taux de détection.
Non limité par le volume de l'échantillon
Méthode de détection : SPC, comptage microscopique, combiné à une méthode de coloration
Méthodes physiques, chimiques, moléculaires et immunologiques
la physique
Mesure d'impédance
impédance
Dans les matériaux biologiques présentant une résistance, une inductance et une capacité, l'impédance qui empêche la mesure du courant est appelée impédance.
Principe : Les micro-organismes modifient les propriétés électriques du milieu de culture et le substrat électriquement inerte se décompose en molécules et ions électroactifs. La conductivité du milieu de culture augmente et l'impédance diminue.
Modifications de la conductivité au fil du temps
Temps de détection : le temps écoulé entre la culture et le changement soudain de la valeur d'impédance, inversement proportionnel au nombre bactérien d'origine
Déduire le nombre bactérien initial des micro-organismes
Les micro-organismes ont des courbes d'impédance différentes
Identification microbienne
méthode d'impédance directe
Le milieu de culture est placé dans un tube de mesure spécial. Après inoculation de micro-organismes, des électrodes sont insérées dans le milieu de culture pour mesurer directement les modifications des propriétés électriques du milieu de culture.
facteurs clés, milieu de culture
Les bactéries testées➕produisent des changements d'impédance mesurables
méthode d'impédance indirecte
Le métabolisme microbien produit du dioxyde de carbone, etc., pour refléter l'activité métabolique des micro-organismes
Le dioxyde de carbone pénètre dans le tube à essai et réagit avec l'hydroxyde de potassium pour produire du carbonate, ce qui réduit sa conductivité et enregistre le changement de conductivité.
avantage
Pas besoin d'optimiser le milieu de culture (peut réagir sans électricité)
Peut mesurer des milieux contenant une teneur élevée en sel
Micro-organismes mesurables qui produisent très peu ou pas de changement mesurable de conductivité, comme la levure
L'aliment mesurable lui-même peut interférer avec la mesure d'impédance ou même endommager les électrodes.
Microcalorimétrie
Chimique
Détermination de l'ATP
Source d'énergie pour les cellules vivantes, disparaît deux heures après la mort cellulaire
L'ATP cellulaire est constante et sa quantité totale est proportionnelle au nombre de bactéries, qui peut être calculé
La teneur en ATP des cellules procaryotes à croissance exponentielle est généralement de 2 à 6 nmol/mg de poids sec.
Mesure précise de l'ATP dans les cellules de la même espèce
Méthodes courantes —Mesure de l'ATP par le système luciférase
L'ATP participe au système luciférine-luciférase, provoquant l'émission de lumière par la luciférine, et la quantité de lumière émise est proportionnelle à l'ATP.
Calculer le nombre de cellules en fonction de l'intensité de la luminescence
Il peut automatiquement mesurer et détecter rapidement. Les résultats sont conformes à la méthode SPC, ce qui permet de gagner du temps.
application
Détermination du nombre de bactéries dans un bouillon de fermentation
Analyse d'échantillons d'urine
Test de microbiologie de surface
Radiométrie
Principe : les bactéries produisent du dioxyde de carbone lorsqu'elles métabolisent les glucides, marquent les oligo-éléments en glucose ou en d'autres molécules de sucre et détectent le dioxyde de carbone libéré.
La quantité de rayonnement est proportionnelle au nombre de bactéries
Le temps de détection est inversement proportionnel au nombre de micro-organismes
compteur d'énergie radioactive
application
Vérifiez les problèmes d'estomac en soufflant de l'air
Tests de microbiologie alimentaire
Prise d'empreintes digitales et identification des micro-organismes alimentaires
Empreinte digitale : composants chimiques caractéristiques, structures, différences de performances et métabolites spécifiques
Modèle caractéristique : identifiable, unique
Reconnaissance des acides nucléiques
Séquence de bases 16srRNA
L'ARNr représente 80 % de l'ARN total
De nombreux segments sont hautement conservés
minuterie d'évolution biologique
carte phylogénétique
RAP
Réaction en chaîne par polymérase, clonage acellulaire, technique de biologie moléculaire qui amplifie des fragments d'ADN spécifiques à l'extérieur des cellules
Détection de bactéries pathogènes : fragments spécifiques, conservation
Principe : sous la catalyse de l'ADN polymérase, l'ADN du brin parent est utilisé comme matrice et des amorces spécifiques sont utilisées comme point de départ pour l'extension par la dénaturation, l'hybridation, l'extension et d'autres étapes, le processus de copie in vitro du brin fille. Un ADN complémentaire à l'ADN matrice est réalisé.
composants de réaction
ADN modèle : gène cible - un gène unique au micro-organisme
Paire d'amorces : point de départ et point final de la réplication, spécificité de la réplication
dNTP : A, T, G, C
ADN polymérase
Tampon de réaction, solution de sel de magnésium
avantage
Amplification in vitro de fragments d'acide nucléique spécifiques
Rapide, sensible et spécifique
Système d'analyse microbienne automatique
Analyse microbienne entièrement automatisée
Principe : L'instrument fixe sur la carte le milieu de culture de réaction biochimique nécessaire à l'identification bactérienne. Après la culture, l'instrument juge la réaction affichée et utilise la méthode numérique pour effectuer la détermination.
Carte bactéries Gram négatif, carte bactéries Gram positif, carte levure
Système d'identification bactérienne API
méthodes immunologiques
Antigène (Ag) : Substance qui peut inciter le système immunitaire à produire une réponse immunitaire et à réagir spécifiquement avec les anticorps ou les cellules effectrices qu'il produit in vivo ou in vitro.
Déterminants antigéniques : groupes actifs à la surface d'un antigène
Propriétés antigéniques
Antigénicité : immunogénicité et réactogénicité
Hétérogénéité : protéines, sucres, acides nucléiques (composition chimique), faible effet immunitaire de 5 à 10 ku (poids moléculaire)
Anticorps (Ab) : Type de substance active qui peut réagir spécifiquement avec l'antigène synthétisé et sécrété par les cellules B lorsque l'antigène pénètre dans l'organisme. On le trouve principalement dans le sérum.
Méthodes de détection d'antigènes et d'anticorps : détection de bactéries ou de toxines
réaction d'agglutination
Les anticorps connus identifient les antigènes
L'antigène granulaire se lie à l'anticorps correspondant, et après un certain temps en présence d'un diélectrique, de petits morceaux agglutinés apparaissent à l'œil nu.
réaction de précipitation
Réaction de neutralisation
Technologie d’anticorps marqués ou d’antigènes
Expérience Salmonella 1-2
Principe : Réalisé dans deux conteneurs spéciaux, l'un contenant un milieu liquide sélectif et l'autre un milieu semi-solide non sélectif
L'antigène et l'anticorps se combinent pour former une bande immunitaire visible à l'œil nu
Test immuno-enzymatique ELISA
Antigène de particules : comme les bactéries, les virus, etc.
Antigènes solubles : entérotoxines, mycotoxines, etc.
qualitatif ou quantitatif
Fonctionnement simple et rapide
Principe expérimental
Les enzymes se lient aux anticorps ou aux antigènes
réaction spécifique entre l'antigène et l'anticorps
Développement de la couleur du substrat catalysé par des enzymes, analyse qualitative ou quantitative à l'œil nu ou avec des instruments
Spécificité ➕ Amplification du signal enzymatique
Matériaux nécessaires
soutien solide
Antigène ou anticorps marqué par une enzyme
Peroxydase de raifort, bonne stabilité
phosphatase alcaline
substrat pour l'action enzymatique
O-phénylènediamine (jaune)
Tétraméthylbenzidine (bleu)
taper
Méthode directe, méthode indirecte, ELISA sandwich : détermination de l'antigène des particules
Méthode de compétition : dosage d'antigènes à petites molécules tels que les mycotoxines
sandwich ELISA (sandwich ELISA)
①Revêtement : Anticorps 1 ② Lavage : éliminer les réactifs en excès et faiblement liés ③Ajouter des échantillons à tester ; ④ Lavage ; ⑤Ajoutez l'anticorps 2 marqué par une enzyme ; ⑥ Lavage ; ⑦Ajouter un substrat ; ⑧ Réaction de terminaison
avantage
Peut détecter plusieurs échantillons en même temps, peut être automatisé, simple à utiliser et commercialisé
chromatographie sur or colloïdal
principe
Dosage du réactif Limulus (hou)
Méthode sensible pour la détermination des endotoxines dans les parois cellulaires des bactéries négatives
Principe : Réaction entre une endotoxine et des lysats dissous dans le limule pour former un gel, qualitatif ou semi-quantitatif
Bioanalyse et technologies associées
Sélection d'animaux de laboratoire
Sensibilité à la substance testée, sexe, âge, poids
Méthode d’administration de la substance d’essai
alimentation; régime alimentaire, eau potable
Administration orale, capsule
Injection : intrapéritonéale, sous-cutanée
Chirurgie
Test de toxine botulique
Procédures chirurgicales dans les expérimentations animales
technologie des anneaux de ligature
Collecte et traitement des échantillons
Principes d'échantillonnage à suivre
Déterminer le plan d'échantillonnage : niveau d'oreille deux, niveau trois
Représentativité : menée de manière aléatoire, représentative de tous les aliments
Opération aseptique pour éviter la contamination
Maintenir l'état d'origine : volatilisation, température
Juste à temps : échantillonnage et envoi pour contrôle
Plan d'échantillonnage
taper
échantillonnage
n : Le nombre d'échantillons qui doivent être collectés pour le même lot de produits
Jugement de résultat
c : la valeur d'échantillon maximale autorisée dépassant la valeur m
m : Valeur limite du niveau acceptable d'indicateurs microbiens
MLa valeur limite maximale de sécurité des indicateurs microbiologiques
Niveau 2
Niveau trois
danger alimentaire
Dangers de catégorie I, aliments pour personnes âgées, nourrissons et jeunes enfants et aliments susceptibles d'augmenter les dangers avant consommation
Dangers de catégorie II, aliments qui sont consommés immédiatement, les dangers restent pratiquement inchangés avant la consommation
Dangers de catégorie III, aliments qui ont été chauffés avant consommation pour réduire les dangers
Importance des indicateurs d'inspection pour les aliments : générale, moyenne, sévère