Galleria mappe mentale 6Test microbiologici
Questa è una mappa mentale sulla microbiologia alimentare-6 test microbici, compresa la determinazione della quantità microbica, la raccolta e il trattamento dei campioni, Bioanalisi e tecnologie correlate, ecc.
Modificato alle 2024-01-20 17:23:40Questa è una mappa mentale su una breve storia del tempo. "Una breve storia del tempo" è un'opera scientifica popolare con un'influenza di vasta portata. Non solo introduce i concetti di base della cosmologia e della relatività, ma discute anche dei buchi neri e dell'espansione dell'universo. questioni scientifiche all’avanguardia come l’inflazione e la teoria delle stringhe.
Dopo aver letto "Il coraggio di essere antipatico", "Il coraggio di essere antipatico" è un libro filosofico che vale la pena leggere. Può aiutare le persone a comprendere meglio se stesse, a comprendere gli altri e a trovare modi per ottenere la vera felicità.
"Il coraggio di essere antipatico" non solo analizza le cause profonde di vari problemi nella vita, ma fornisce anche contromisure corrispondenti per aiutare i lettori a comprendere meglio se stessi e le relazioni interpersonali e come applicare la teoria psicologica di Adler nella vita quotidiana.
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Microrganismi negli alimenti e loro Rilevazione dei metaboliti
Determinazione della conta microbica
conteggio delle piastre standard SPC
processo di esperimento
campionamento
diluizione
dieci volte diluizione
Inoculo: 2-3 diluizioni seriali, controlli paralleli
metodo di colata
Metodo di rivestimento
Rileva i batteri sensibili al calore
Più adatto per batteri strettamente aerobi
La morfologia della colonia è evidente e si possono osservare le caratteristiche del gruppo.
Da non confondere con le particelle di cibo
Le colonie tendono a sovrapporsi e a mescolarsi
nutrire
mezzo, condizioni
Coltura invertita: perdita di peso media inferiore al 15%
Evitare che le gocce d'acqua gocciolino
Prevenire la crescita dei batteri
conteggio delle colonie
Scegliere una piastra con una conta batterica adeguata, da 30 a 300 CFU per i batteri e da 10 a 150 CFU per muffe/lieviti.
Metodi: osservazione ad occhio nudo, contacolonie
Identificare le colonie: le colonie sono troppo piccole o simili alle particelle del campione: metodo di riduzione del colorante, TTC (tetrazolio rosso, terreno cromogenico), caratteristiche batteriche
calcolare
Rapporto, due cifre significative, il controllo bianco presenta risultati del test delle colonie non validi
significato
Determinare il grado di contaminazione microbica e la qualità dell'igiene
Prevedere la durata di conservazione degli alimenti
riflettono la freschezza
Monitorare le dinamiche di crescita e riproduzione
Test sui prodotti biologici: contaminazione, probiotici
Altri metodi
Mezzo di coltura con metodo a film secco idratato
Principio: sistema di terreno di coltura prefabbricato, film secco a idratazione rinnovabile, terreno di coltura, gel solubile in acqua fredda, indicatore, griglia stampata
Fasi operative: diluizione, inoculazione, coltura, conteggio, refertazione
vantaggio
elevata produttività
Piccolo errore
Internazionalizzazione: Approvazione da parte di organismi ufficiali
Veloce: 6-14 ore possono stimare risultati accurati entro 24 ore 3-5 giorni per confermare la conta di muffe e lieviti
mezzo di identificazione
metodo di inoculazione a rotazione
Secondo la spirale di Archimede come traiettoria di inoculazione, inoculare il campione a una velocità decrescente
Inoculazione automatica a spirale, sistema di conteggio
Metodo di conteggio: ci sono più colonie al centro e meno attorno ad esse. Calcolare il numero di colonie per unità di area.
vantaggio
I risultati della misurazione sono altamente correlati con l'SPC
discordanza
Metodo di determinazione del numero più vicino MPN
Sfruttare le speciali funzioni fisiologiche dei microrganismi da testare e utilizzare terreni di coltura selettivi (per ridurre le interferenze) per determinare la presenza e l'abbondanza dei microrganismi.
Rilevazione di microrganismi con proprietà nutrizionali e metaboliche come i coliformi
facile da usare
È possibile misurare i microrganismi che non sono dominanti nella comunità microbica
coliformi
Batteri intestinali, legati alla contaminazione fecale
Batteri non-saccharomyces negativi aerobici e anaerobici facoltativi che fermentano il lattosio per produrre acido e gas in determinate condizioni di coltura.
Fermentazione primaria: LST, fermentazione secondaria BGLB per produttori di gas
L'importanza di rilevare E. coli
Batteri indicatori di contaminazione fecale per valutare la qualità dell'igiene alimentare
Valutare il potenziale di contaminazione da batteri patogeni enterici, come Salmonella, Shiga
Vantaggi come batteri indicatori
Molte fonti, grandi quantità, alto tasso di rilevamento
Il tempo di sopravvivenza esterno è sostanzialmente lo stesso
La resistenza ai fungicidi è sostanzialmente la stessa
Facile da usare, non sono necessarie attrezzature complicate
alta sensibilità
Metodo di conteggio della riduzione del colorante (metodo di stima)
Principio: le cellule viventi contengono enzimi reduttasi che possono ridurre combustibili specifici da un colore all'altro.
Reagenti di uso comune
Blu di metilene
blu al bianco
Resazurina
Il blu scuro vira al rosa, al bianco
Tetrazolo
Da incolore a rosso
Il tempo di riduzione è inversamente proporzionale alla concentrazione microbica e viene spesso utilizzato per l’igiene del latte e l’attività degli spermatozoi.
vantaggio
Facile, veloce ed economico
discordanza
La capacità riducente dei microrganismi è diversa e difficile da stimare. Non è adatto per alimenti contenenti reduttasi.
Metodo di conteggio microscopico diretto DMC
conteggio diretto della scheda di conteggio
Camera per conteggio cellule Petrovholzer (batteri generici), emocitometro (spore di lieviti/muffe)
Conta il numero di microrganismi in un certo volume, ma non riesce a distinguere i batteri vari
vantaggio
Analisi della morfologia cellulare rapida e pratica, vetrini facili da salvare
discordanza
Adatto solo per campioni con elevato contenuto batterico, scarsa precisione e facili da affaticare.
Altri metodi
Metodo dello striscio con tampone di cotone, metodo di campionamento
Rilevazione di microrganismi superficiali
Applicato su alimenti, superfici di attrezzature, luoghi pubblici
Metodo di filtrazione su membrana, concentrazione del campione
I campioni contenenti pochissimi batteri possono arricchire i batteri e migliorare il tasso di rilevamento.
Non limitato dal volume del campione
Metodo di rilevamento: SPC, conteggio al microscopio, combinato con il metodo di colorazione
Metodi fisici, chimici, molecolari e immunologici
fisica
Misurazione dell'impedenza
impedenza
Nei materiali biologici dotati di resistenza, induttanza e capacità, l'impedenza che ostacola la misurazione della corrente è chiamata impedenza.
Principio: i microrganismi modificano le proprietà elettriche del terreno di coltura e il substrato elettricamente inerte si decompone in molecole e ioni elettroattivi. La conduttività del terreno di coltura aumenta e l'impedenza diminuisce.
Cambiamenti di conduttività nel tempo
Tempo di rilevazione: il tempo che intercorre tra la coltura e la variazione improvvisa del valore di impedenza, inversamente proporzionale alla conta batterica originale
Dedotto il conteggio batterico originale dei microrganismi
I microrganismi hanno curve di impedenza diverse
Identificazione microbica
metodo dell'impedenza diretta
Il terreno di coltura viene inserito in uno speciale tubo di misurazione Dopo l'inoculazione con i microrganismi, gli elettrodi vengono inseriti nel terreno di coltura per misurare direttamente i cambiamenti nelle proprietà elettriche del terreno di coltura.
fattori chiave, mezzo di coltura
I batteri testati producono cambiamenti di impedenza monitorabili
metodo dell'impedenza indiretta
Il metabolismo microbico produce anidride carbonica, ecc., per riflettere l'attività metabolica dei microrganismi
L'anidride carbonica entra nella provetta e reagisce con l'idrossido di potassio per produrre carbonato, che ne riduce la conduttività e registra il cambiamento di conduttività.
vantaggio
Non è necessario ottimizzare il terreno di coltura (può reagire senza elettricità)
Può misurare materiali contenenti un elevato contenuto di sale
Microrganismi misurabili che producono cambiamenti minimi o nulli nella conduttività, come il lievito
Il cibo stesso misurabile potrebbe interferire con la misurazione dell'impedenza o addirittura danneggiare gli elettrodi.
Microcalorimetria
Chimico
Determinazione dell'ATP
Fonte di energia per le cellule viventi, scompare due ore dopo la morte cellulare
L'ATP cellulare è costante e la sua quantità totale è proporzionale al numero di batteri, che può essere calcolato
Il contenuto di ATP delle cellule procariotiche a crescita esponenziale è solitamente pari a 2-6 nmol/mg di peso secco.
Misurazione accurata dell'ATP in cellule della stessa specie
Metodi comuni —Misurazione dell'ATP mediante sistema luciferasi
L'ATP partecipa al sistema luciferina-luciferasi, facendo sì che la luciferina emetta luce e la quantità di luce emessa è proporzionale all'ATP
Calcolare il numero di cellule in base all'intensità della luminescenza
Può misurare e rilevare automaticamente e rapidamente. I risultati sono coerenti con il metodo SPC, risparmiando tempo.
applicazione
Determinazione della carica batterica nel brodo di fermentazione
Analisi del campione di urina
Saggio microbiologico di superficie
Radiometria
Principio: i batteri producono anidride carbonica quando metabolizzano i carboidrati, etichettano gli oligoelementi in glucosio o altre molecole di zucchero e rilevano l'anidride carbonica rilasciata
La quantità di radiazioni è proporzionale al numero di batteri
Il tempo di rilevamento è inversamente proporzionale al numero di microrganismi
contatore di energia radioattiva
applicazione
Controlla eventuali problemi di stomaco soffiando aria
Test di microbiologia alimentare
Fingerprinting e identificazione dei microrganismi alimentari
Impronta digitale: componenti chimici caratteristici, strutture, differenze di prestazioni e metaboliti specifici
Modello caratteristico: identificabile, unico
Riconoscimento degli acidi nucleici
Sequenza di basi 16srRNA
L'rRNA rappresenta l'80% dell'RNA totale
Molti segmenti sono altamente conservati
timer dell'evoluzione biologica
mappa filogenetica
PCR
Reazione a catena della polimerasi, clonazione senza cellule, una tecnica di biologia molecolare che amplifica specifici frammenti di DNA all'esterno delle cellule
Individuazione di batteri patogeni: frammenti specifici, conservazione
Principio: sotto la catalisi della DNA polimerasi, il filamento genitore del DNA viene utilizzato come modello e primer specifici vengono utilizzati come punto di partenza per l'estensione. Attraverso fasi come la denaturazione, la ricottura e l'estensione, il processo di copia in vitro della figlia viene realizzato il filamento di DNA complementare al DNA modello.
componenti della reazione
DNA modello: gene bersaglio - un gene unico del microrganismo
Coppia di primer: punto iniziale e punto finale della replicazione, specificità della replicazione
dNTP:A,T,G,C
DNA polimerasi
Tampone di reazione, soluzione di sale di magnesio
vantaggio
Amplificazione in vitro di frammenti specifici di acido nucleico
Veloce, sensibile e specifico
Sistema automatico di analisi microbica
Analisi microbica completamente automatizzata
Principio: Lo strumento fissa sulla scheda il terreno di coltura della reazione biochimica necessario per l'identificazione dei batteri. Dopo la coltura, lo strumento valuta la reazione visualizzata e utilizza il metodo numerico per effettuare la determinazione.
Scheda batteri Gram-negativi, scheda batteri Gram-positivi, scheda lieviti
Sistema di identificazione batterica API
metodi immunologici
Antigene (Ag): una sostanza che può indurre il sistema immunitario a produrre una risposta immunitaria e a reagire specificamente con gli anticorpi o le cellule effettrici che produce in vivo o in vitro.
Determinanti antigenici: gruppi attivi sulla superficie di un antigene
Proprietà antigeniche
Antigenicità: immunogenicità e reattogenicità
Eterogeneità: proteine, zucchero, acido nucleico (composizione chimica), scarso effetto immunitario 5-10ku (peso molecolare)
Anticorpo (Ab): un tipo di sostanza attiva che può reagire in modo specifico con l'antigene sintetizzato e secreto dalle cellule B quando l'antigene entra nell'organismo. Si trova principalmente nel siero.
Metodi di rilevamento di antigeni e anticorpi: rilevamento di batteri o tossine
reazione di agglutinazione
Gli anticorpi conosciuti identificano gli antigeni
L'antigene granulare si lega al corrispondente anticorpo e dopo un certo periodo di tempo in presenza di un dielettrico compaiono ad occhio nudo piccoli pezzetti agglutinati.
reazione di precipitazione
Reazione di neutralizzazione
Tecnologia dell'anticorpo o dell'antigene marcato
Esperimento Salmonella 1-2
Principio: eseguito in due contenitori speciali, uno contenente un terreno liquido selettivo e l'altro un terreno semisolido non selettivo
Antigene e anticorpo si combinano per formare una banda immunitaria visibile ad occhio nudo
Saggio di immunoassorbimento enzimatico ELISA
Antigene particellare: come batteri, virus, ecc.
Antigeni solubili: enterotossine, micotossine, ecc.
qualitativo o quantitativo
Funzionamento semplice e veloce
Principio sperimentale
Gli enzimi si legano agli anticorpi o agli antigeni
reazione specifica tra antigene e anticorpo
Sviluppo del colore del substrato catalizzato da enzimi, analisi qualitativa o quantitativa a occhio nudo o con strumenti
Specificità➕Amplificazione del segnale enzimatico
Materiali richiesti
solido supporto
Antigene o anticorpo marcato con enzima
Perossidasi di rafano, buona stabilità
fosfatasi alcalina
substrato per l’azione enzimatica
O-fenilendiammina (giallo)
Tetrametilbenzidina (blu)
tipo
Metodo diretto, metodo indiretto, ELISA sandwich: determinazione dell'antigene particellare
Metodo di competizione: determinazione di antigeni di piccole molecole come le micotossine
ELISA a sandwich (ELISA a sandwich)
①Rivestimento: anticorpo 1 ② Lavaggio: rimuovere i reagenti in eccesso e quelli debolmente legati ③Aggiungere campioni da ispezionare; ④ Lavaggio; ⑤Aggiungere l'anticorpo 2 marcato con enzima; ⑥ Lavaggio; ⑦Aggiungi substrato; ⑧ Reazione di terminazione
vantaggio
Può rilevare più campioni contemporaneamente, può essere automatizzato, semplice da utilizzare e commercializzato
cromatografia su oro colloidale
principio
Saggio del reagente Limulus (hou).
Metodo sensibile per la determinazione delle endotossine nelle pareti cellulari dei batteri negativi
Principio: Reazione tra endotossina e lisati disciolti nel granchio a ferro di cavallo per formare un gel, qualitativo o semiquantitativo
Bioanalisi e tecnologie correlate
Selezione di animali da esperimento
Sensibilità alla sostanza da testare, sesso, età, peso
Metodo di somministrazione della sostanza in esame
alimentazione; dieta, acqua potabile
Somministrazione orale, capsula
Iniezione: intraperitoneale, sottocutanea
Chirurgia
Test della tossina botulinica
Procedure chirurgiche negli esperimenti sugli animali
tecnologia degli anelli di legatura
Raccolta ed elaborazione dei campioni
Principi di campionamento da seguire
Determinare il piano di campionamento: livello orecchio due, livello tre
Rappresentatività: condotta in modo casuale, rappresentativa di tutti gli alimenti
Operazione asettica per prevenire la contaminazione
Mantenere lo stato originale: volatilizzazione, temperatura
Just-in-time: campionatura e invio per ispezione
Piano di campionamento
tipo
campionamento
n: Il numero di campioni che dovrebbero essere raccolti per lo stesso lotto di prodotti
Giudizio di risultato
c: Il valore massimo consentito del campione che supera il valore m
m: valore limite del livello accettabile di indicatori microbici
MValore limite massimo di sicurezza degli indicatori microbiologici
Livello 2
Livello tre
pericolo alimentare
Pericoli di categoria I, alimenti per anziani, neonati e bambini piccoli e alimenti che possono aumentare i rischi prima del consumo
Pericoli di categoria II, alimenti che vengono consumati immediatamente, i pericoli rimangono sostanzialmente invariati prima del consumo
Pericoli di categoria III, alimenti che sono stati riscaldati prima del consumo per ridurre i pericoli
Importanza degli indicatori di ispezione sugli alimenti: generale, medio, severo