Galerie de cartes mentales Détection des bactéries lactiques GB 4789.35-2023
La nouvelle version de la norme nationale pour le test des bactéries lactiques comprend des documents de référence normatifs, Termes et définitions, équipements et matériels, Milieux et réactifs de culture, procédures de test, etc.
Modifié à 2024-02-06 18:57:14Cent ans de solitude est le chef-d'œuvre de Gabriel Garcia Marquez. La lecture de ce livre commence par l'analyse des relations entre les personnages, qui se concentre sur la famille Buendía et raconte l'histoire de la prospérité et du déclin de la famille, de ses relations internes et de ses luttes politiques, de son métissage et de sa renaissance au cours d'une centaine d'années.
Cent ans de solitude est le chef-d'œuvre de Gabriel Garcia Marquez. La lecture de ce livre commence par l'analyse des relations entre les personnages, qui se concentre sur la famille Buendía et raconte l'histoire de la prospérité et du déclin de la famille, de ses relations internes et de ses luttes politiques, de son métissage et de sa renaissance au cours d'une centaine d'années.
La gestion de projet est le processus qui consiste à appliquer des connaissances, des compétences, des outils et des méthodologies spécialisés aux activités du projet afin que celui-ci puisse atteindre ou dépasser les exigences et les attentes fixées dans le cadre de ressources limitées. Ce diagramme fournit une vue d'ensemble des 8 composantes du processus de gestion de projet et peut être utilisé comme modèle générique.
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La gestion de projet est le processus qui consiste à appliquer des connaissances, des compétences, des outils et des méthodologies spécialisés aux activités du projet afin que celui-ci puisse atteindre ou dépasser les exigences et les attentes fixées dans le cadre de ressources limitées. Ce diagramme fournit une vue d'ensemble des 8 composantes du processus de gestion de projet et peut être utilisé comme modèle générique.
Test de bactéries lactiques SOP
Pas
La préparation des échantillons
1. Tous les processus de préparation des échantillons doivent suivre des procédures opératoires stériles. 2. Le diluant doit être entièrement préchauffé à 36 ℃ ± 1 ℃ pendant 15 min à 30 min avant le test. 3. Les échantillons congelés peuvent être décongelés entre 2°C et 5°C pendant 18 heures maximum, ou à une température ne dépassant pas 45°C pendant 15 minutes maximum. 4. Échantillons solides et semi-solides : pesez 25 g de l'échantillon en utilisant des procédures aseptiques, placez-le dans un flacon stérile contenant 225 ml de diluant (5 à 10 billes de verre stériles sont préréglées dans le flacon) et agitez 2 fois avec un oscillateur. , 30 secondes à chaque fois, pour préparer un échantillon de solution homogène au 1:10. 5. Échantillons liquides : Pour les échantillons liquides, agitez-les soigneusement, puis utilisez une paille stérile pour prélever 25 mL de l'échantillon et mettez-le dans un flacon stérile contenant 225 mL de diluant (5 à 10 billes de verre stériles sont préréglées dans le flacon). . Utilisez un oscillateur pour agiter deux fois, 30 secondes à chaque fois, pour préparer un échantillon de solution homogène au 1:10.
Remarque : Pour les échantillons solides ou semi-solides (viscosité de l'échantillon > lait cru), la méthode de pesée est requise pour la préparation et la dilution des échantillons. Lors de la pesée, évitez de répandre l'échantillon à l'extérieur du flacon et sur l'embouchure et la paroi interne du flacon pour éviter la perte d'échantillon due à l'incapacité de dissoudre une partie de l'échantillon.
Dilution et culture
1. Utilisez une pipette ou une micropipette stérile de 1 ml pour absorber 1 ml de la solution homogène d'échantillon 1:10 et injectez-la lentement le long de la paroi du tube dans un tube à essai stérile contenant 9 ml de diluant (notez que la pointe de la pipette ou de la micropipette n'est pas Toucher le diluant), utilisez un oscillateur pour agiter le tube à essai trois fois, 10 secondes à chaque fois, pour préparer un échantillon de solution homogène au 1:100. 2. Prenez une autre pipette stérile ou un embout de micropipette de 1 ml et effectuez des incréments de 10 fois d'homogénéisation de l'échantillon selon la séquence d'opération ci-dessus. Pour chaque dilution incrémentielle, utilisez une pipette ou un embout de pipette stérile de 1 ml.
Nombre de bactéries lactiques
Nombre total de bactéries lactiques
Nombre de bifidobactéries
Sur la base de l'estimation de la teneur en bifidobactéries de l'échantillon à tester, sélectionnez 2 à 3 dilutions appropriées consécutives. Pour chaque dilution, prélevez 1 ml de solution homogène d'échantillon dans une plaque stérilisée et réalisez deux plaques pour chaque dilution. Une fois le diluant transféré dans la plaque, versez 15 ml à 20 ml de milieu gélose MRS modifié avec du sel de lithium de mupirocine et du chlorhydrate de cystéine refroidi entre 48°C et 50°C dans la plaque, et faites tourner la plaque pour mélanger uniformément. . Une fois le milieu de culture solidifié, placez-le à l'envers pour une culture anaérobie à 36°C ± 1°C. Selon les caractéristiques de croissance de Bifidobacterium, choisissez généralement une culture pendant 48 heures. Si les colonies ne se développent pas ou deviennent petites, vous pouvez. choisir de cultiver à 72 heures. Après culture, compter toutes les colonies sur la plaque. Le processus depuis la dilution de l’échantillon jusqu’au versement sur plaque doit être terminé dans les 15 minutes.
Nombre de Streptococcus thermophilus
Sur la base de l'estimation du nombre de bactéries Streptococcus thermophilus viables dans l'échantillon à tester, sélectionnez 2 à 3 dilutions appropriées consécutives. Pour chaque dilution, prélevez 1 ml de solution homogène d'échantillon dans une plaque stérilisée et préparez deux plaques pour chaque dilution. . Une fois le diluant transféré dans la plaque, versez en temps opportun 15 ml à 20 ml de milieu de culture agar MC refroidi entre 48 °C et 50 °C dans la plaque et faites tourner la plaque pour mélanger uniformément. Une fois le milieu de culture solidifié, placez-le à l'envers pour une culture aérobie à 36°C ± 1°C. Selon les caractéristiques de croissance de Streptococcus thermophilus, la culture est généralement sélectionnée pendant 48 heures si la colonie ne se développe pas ou devient petite. , il peut être cultivé pendant 72 heures. Les caractéristiques des colonies de Streptococcus thermophilus sur plaques de gélose MC sont : des colonies moyennes à petites, des colonies rouges aux bords nets et lisses, de 2 mm ± 1 mm de diamètre, et des colonies roses au dos.
Nombre de lactobacilles
Sur la base de l'estimation du nombre total de bactéries viables dans l'échantillon à tester, sélectionnez 2 à 3 dilutions appropriées consécutives. Pour chaque dilution, prélevez 1 ml de solution homogène d'échantillon dans une plaque stérilisée et préparez deux plaques pour chaque dilution. Une fois le diluant transféré dans la plaque, versez 15 ml à 20 ml de milieu gélose MRS refroidi entre 48 °C et 50 °C dans la plaque et faites tourner la plaque pour mélanger uniformément. Une fois le milieu de culture solidifié, placez-le à l'envers pour une culture anaérobie à 36°C ± 1°C. Selon les caractéristiques de croissance de Bifidobacterium, choisissez généralement une culture pendant 48 heures. Si les colonies ne se développent pas ou deviennent petites, vous pouvez. choisir de cultiver à 72 heures. Après culture, compter toutes les colonies sur la plaque. Le processus depuis la dilution de l’échantillon jusqu’au versement sur plaque doit être terminé dans les 15 minutes.
Comprend uniquement les décomptes de Bifidobacterium spp.
Sur la base de l'estimation du nombre de bifidobactéries dans l'échantillon à tester, sélectionnez 2 à 3 échantillons de solutions homogènes avec des dilutions appropriées. Lors d'une dilution incrémentielle de 10 fois, prélevez 1,0 ml de la solution homogène d'échantillon dans une plaque stérile. plats plats. En même temps, ajoutez 1,0 mL de diluant à blanc dans deux plaques stériles comme contrôles à blanc. Versez immédiatement 15 ml à 20 ml de milieu gélose MRS refroidi à 46°C (qui peut être placé dans un bain-marie à température constante à 46°C ± 1°C pour l'isolation) dans la plaque, et faites tourner la plaque pour mélanger uniformément. Le processus depuis la dilution de l’échantillon jusqu’au versement sur plaque doit être terminé dans les 15 minutes. Une fois la gélose solidifiée, retourner la plaque et incuber en anaérobie à 36°C±1°C pendant 48h±2h, qui peut être prolongée jusqu'à 72h±2h. Après incubation, comptez toutes les colonies sur la plaque.
Remarque : 1. Si l'élément de test requis dans la norme de qualité est le nombre total de bactéries lactiques, le rapport d'inspection, le dossier d'inspection original, etc. doivent être basés sur GB 4789.35 si l'élément de test requis dans la norme de qualité est le ; le nombre de bifidobactéries, le rapport d'inspection, le dossier d'inspection original, etc. La base d'inspection pour etc. doit être GB 4789.34. 2. Le milieu de culture doit être placé dans un bain-marie à température constante. N'utilisez pas le dos de votre main pour détecter la température. Une température trop élevée brûlera à mort la bactérie. Si la température est trop basse, la culture. le milieu sera difficile à mélanger après solidification. Dans le même temps, la température du bain-marie doit être surveillée. Vous pouvez écrire dans la colonne des résultats d'étalonnage/vérification du « Dossier d'utilisation de l'équipement ».
Exemples d'espèces de Lactobacillus et de milieux de culture utilisés pour la détection de différents éléments
Remarque : Les exemples d'éléments du tableau sont uniquement à titre de référence. Le milieu de culture spécifique sélectionné doit être sélectionné en fonction des types réels de bactéries lactiques incluses dans le produit.
Nombre de colonies
1. Sélectionnez une plaque avec un nombre de colonies compris entre 30 CFU et 300 CFU et aucune colonie en expansion pour compter le nombre total de colonies. Pour les plaques contenant moins de 30 CFU, enregistrez le nombre spécifique de colonies, et pour les plaques contenant plus de 300 CFU, enregistrez le nombre de colonies comme étant trop important pour être compté. Le nombre de colonies pour chaque dilution doit être la moyenne de deux boîtes. 2. Lorsque l'une des plaques présente des colonies squameuses plus grandes, elle ne doit pas être utilisée. La plaque sans colonies squameuses doit être utilisée comme nombre de colonies à cette dilution si les colonies squameuses représentent moins de la moitié de la plaque. et la moitié restante est La répartition des colonies est très uniforme, vous pouvez donc compter la moitié de la plaque et multiplier par 2 pour représenter le nombre de colonies sur une plaque. 3. Lorsqu’une croissance en chaîne sans limites évidentes entre les colonies apparaît sur la plaque, comptez chaque chaîne comme une colonie.
Remarque : 1. Il peut être observé à l'œil nu et, si nécessaire, utiliser une loupe ou un compteur de colonies pour enregistrer le facteur de dilution et le nombre de colonies correspondant. Le nombre de colonies est exprimé en unités formant colonies (UFC). 2. Comptez toutes les colonies sur la plaque MRS. 3. Comptage typique des colonies MC : rose, rose avec un anneau transparent autour, toutes les colonies sous les deux formes sont comptées.
expression des résultats
1. Si le nombre de colonies sur une seule plaque de dilution se situe dans la plage de comptage appropriée, calculez le nombre moyen de colonies sur les deux plaques, puis multipliez la valeur moyenne par le facteur de dilution correspondant pour obtenir le résultat du nombre total de colonies par gramme ou par millilitre. 2. Si le nombre de colonies sur deux plaques de dilution en série se situe dans la plage de comptage appropriée, calculez selon la formule (1) : N=∑C/(n1 n2)*d Dans la formule : N——Nombre de colonies dans l'échantillon ; ∑C——La somme du nombre de colonies sur une plaque (une plaque contenant une plage appropriée de nombres de colonies) ; n1——Le nombre de plaques de la première dilution (faible facteur de dilution) ; n2——Le nombre de plaques de la deuxième dilution (taux de dilution élevé) ; d——facteur de dilution (première dilution). 3. Si le nombre de colonies sur les plaques de toutes les dilutions est supérieur à 300 CFU, comptez la plaque avec la dilution la plus élevée. Les autres plaques peuvent être enregistrées comme étant trop nombreuses pour être comptées. Le résultat est calculé en multipliant le nombre moyen de colonies par le nombre moyen de colonies. facteur de dilution le plus élevé. 4. Si le nombre de colonies sur la plaque à toutes les dilutions est inférieur à 30 UFC, le calcul doit être basé sur le nombre moyen de colonies à la dilution la plus basse multiplié par le facteur de dilution. 5. S'il n'y a aucune croissance de colonies sur les plaques de toutes les dilutions (y compris les solutions originales d'échantillons liquides), le calcul doit être inférieur à 1 multiplié par le facteur de dilution le plus bas. 6. Si le nombre de colonies en plaques à toutes les dilutions n'est pas compris entre 30 CFU et 300 CFU, et que certaines d'entre elles sont inférieures à 30 CFU ou supérieures à 300 CFU, le nombre moyen de colonies les plus proches de 30 CFU ou 300 CFU sera multiplié par le facteur de dilution pour le calcul. .
Rapport du décompte des colonies
1. Lorsque le nombre de colonies est inférieur à 100 UFC, il est arrondi selon le principe de « l'arrondi » et rapporté sous forme d'un nombre entier. 2. Lorsque le nombre de colonies est supérieur ou égal à 100CFU, le troisième chiffre est arrondi selon le principe de « l'arrondi », et les deux premiers chiffres sont pris, et les chiffres suivants sont remplacés par 0, il peut également être exprimé en ; sous la forme d'un exposant de 10, selon le principe de "l'arrondi". Après arrondi, utilisez deux chiffres significatifs. 3. L'échantillonnage par pesée est indiqué en UFC/g et l'échantillonnage volumétrique est indiqué en UFC/mL.
Remarque : 1. Si une seule colonie se développe sur deux plaques : si la solution originale est testée, les résultats seront rapportés à 1 CFU/mL (g) ; si elle est diluée 10 fois, les résultats seront rapportés à 5 CFU/mL (g) ; mL (g); 2. Si le nombre de colonies sur la plaque est de 2 et 3 après dilution 10 fois, le rapport de résultat doit être de 25 et non de 30 ; 3. Dans le rapport des résultats de l'échantillon solide, si la mantisse est 5 ou 0, ou si la mantisse est un autre nombre, tous les résultats seront faux ; 4. Si le nombre de colonies à haute dilution est supérieur au nombre de colonies à faible dilution, le résultat ne peut pas être rapporté ; 5. Si les trois dilutions se situent dans la plage de comptage, les résultats ne peuvent pas être rapportés ; 6. Si toutes les dilutions sont trop nombreuses pour être comptées, les résultats ne peuvent pas être rapportés ; 7. Si les résultats des tests de deux dilutions ne se situent pas dans la plage de 30 à 300, les résultats doivent être unifiés en une dilution puis comparés pour déterminer la valeur la plus proche de la plage. Par exemple : la dilution élevée est de 27 et la dilution faible est de 320. Vous devez multiplier 27 par 10, comparer 270 avec 320 et calculer le résultat du test sur la base de 320 ; 8. Si la dilution élevée est de 28 et la dilution faible est de 320, indiquez-la comme valeur minimale et indiquez 28 fois le facteur de dilution.
Résultats et rapports
Un rapport est émis sur la base des résultats du décompte des colonies et l'unité de déclaration est exprimée en UFC/g (mL).
Procédures de contrôle
Milieux de culture et réactifs
Diluant : réactif du commerce.
Milieu gélose MRS (Man Rogosa Sharpe) : milieu commercial.
Milieu de culture MRS : la peptone, la poudre d'extrait de bœuf et la poudre d'extrait de levure fournissent des sources d'azote, des sources de carbone, des vitamines, des minéraux et d'autres nutriments nécessaires à la croissance bactérienne. Le glucose sert de source de carbone fermentescible, d'ions magnésium, etc. ; 80, le citrate de triammonium et l'acétate de sodium peuvent favoriser la croissance des bactéries lactiques et neutraliser les substances cytotoxiques ; le phosphate sert de tampon ;
Milieu gélose MC (Modified Chalmers) : milieu commercial.
Milieu de culture MC : la peptone de soja, la poudre d'extrait de bœuf et la poudre d'extrait de levure fournissent des sources d'azote, des sources de carbone, des vitamines, des minéraux et d'autres nutriments nécessaires à la croissance bactérienne. Le glucose et le lactose servent de glucides pour favoriser la croissance des bactéries lactiques et du calcium ; carbonate Neutralise l'acide produit par le métabolisme bactérien pour atténuer sa toxicité acide pour les cellules. Le rouge neutre sert d'indicateur acido-basique ; le milieu de culture contient 10 g/L de carbonate de calcium, qui est une substance insoluble et doit le faire. bien mélanger. Une fois homogène, verser sur l'assiette. Dans le même temps, il est normal que la plaque présente un précipité blanc.
Milieu gélose MRS modifié Li-Mupirocine et chlorhydrate de cystéine : milieu de culture commercial.
Milieu MRS modifié de sel de lithium de mupirocine et de chlorhydrate de cystéine : la peptone, la poudre d'extrait de bœuf et la poudre d'extrait de levure fournissent des sources d'azote, des sources de carbone, des vitamines, des minéraux et d'autres nutriments nécessaires à la croissance bactérienne en tant qu'éléments de carbone fermentescibles ; les ions manganèse, les ions magnésium, le Tween 80, le citrate de triammonium et l'acétate de sodium peuvent favoriser la croissance des bactéries lactiques et neutraliser les substances cytotoxiques ; le phosphate sert de tampon et de coagulant ; Le sel de lithium de mupirocine inhibe d'autres bactéries lactiques, à l'exception du chlorhydrate de cystéine qui agit comme agent réducteur.
Équipements et matériaux
En plus des équipements de stérilisation et de culture de routine dans les laboratoires de microbiologie, les autres équipements et matériels sont les suivants : 1. Incubateur à température constante : 36 ℃ ± 1 ℃. 2. Réfrigérateur : 2℃~8℃. 3. Oscillateur. 4. Balance : sensibilité 0,01 g. 5. Tube à essai stérile : 18 mm × 180 mm. 6. Pipette stérile : 1 ml (avec échelle de 0,01 ml), 10 ml (avec échelle de 0,1 ml). 7. Micropipette et embout stérile : 1000μL. 8. Flacons stériles : 500 ml, 300 ml, 250 ml, 150 ml.
Termes et définitions
bactéries lactiques Nom général désignant un groupe de bactéries capables de fermenter les sucres et de produire principalement de grandes quantités d'acide lactique. Elles ne peuvent pas liquéfier la gélatine, ne produisent pas d'indole, sont à Gram positif, non mobiles, non sporulées, catalase négatives. bactéries négatives à la nitrate réductase et à la cytochrome oxydase. Les bactéries lactiques de cette norme comprennent principalement Lactobacillus, Bifidobacterium et Streptococcus thermophilus.
Documents normatifs de référence
GB 4789.35-2023 "Norme nationale de sécurité alimentaire - Test de microbiologie alimentaire - Test de bactéries lactiques" et GB 4789.34-2016 "Norme nationale de sécurité alimentaire - Tests microbiologiques alimentaires - Tests de bifidobactéries".