1. Tous les processus de préparation des échantillons doivent suivre des procédures opératoires stériles. 2. Le diluant doit être entièrement préchauffé à 36 ℃ ± 1 ℃ pendant 15 min à 30 min avant le test. 3. Les échantillons congelés peuvent être décongelés entre 2°C et 5°C pendant 18 heures maximum, ou à une température ne dépassant pas 45°C pendant 15 minutes maximum. 4. Échantillons solides et semi-solides : pesez 25 g de l'échantillon en utilisant des procédures aseptiques, placez-le dans un flacon stérile contenant 225 ml de diluant (5 à 10 billes de verre stériles sont préréglées dans le flacon) et agitez 2 fois avec un oscillateur. , 30 secondes à chaque fois, pour préparer un échantillon de solution homogène au 1:10. 5. Échantillons liquides : Pour les échantillons liquides, agitez-les soigneusement, puis utilisez une paille stérile pour prélever 25 mL de l'échantillon et mettez-le dans un flacon stérile contenant 225 mL de diluant (5 à 10 billes de verre stériles sont préréglées dans le flacon). . Utilisez un oscillateur pour agiter deux fois, 30 secondes à chaque fois, pour préparer un échantillon de solution homogène au 1:10.

1. Utilisez une pipette ou une micropipette stérile de 1 ml pour absorber 1 ml de la solution homogène d'échantillon 1:10 et injectez-la lentement le long de la paroi du tube dans un tube à essai stérile contenant 9 ml de diluant (notez que la pointe de la pipette ou de la micropipette n'est pas Toucher le diluant), utilisez un oscillateur pour agiter le tube à essai trois fois, 10 secondes à chaque fois, pour préparer un échantillon de solution homogène au 1:100. 2. Prenez une autre pipette stérile ou un embout de micropipette de 1 ml et effectuez des incréments de 10 fois d'homogénéisation de l'échantillon selon la séquence d'opération ci-dessus. Pour chaque dilution incrémentielle, utilisez une pipette ou un embout de pipette stérile de 1 ml.

Nombre total de bactéries lactiques

Nombre de bifidobactéries

Nombre de Streptococcus thermophilus

Nombre de lactobacilles

Comprend uniquement les décomptes de Bifidobacterium spp.

Exemples d'espèces de Lactobacillus et de milieux de culture utilisés pour la détection de différents éléments

1. Sélectionnez une plaque avec un nombre de colonies compris entre 30 CFU et 300 CFU et aucune colonie en expansion pour compter le nombre total de colonies. Pour les plaques contenant moins de 30 CFU, enregistrez le nombre spécifique de colonies, et pour les plaques contenant plus de 300 CFU, enregistrez le nombre de colonies comme étant trop important pour être compté. Le nombre de colonies pour chaque dilution doit être la moyenne de deux boîtes. 2. Lorsque l'une des plaques présente des colonies squameuses plus grandes, elle ne doit pas être utilisée. La plaque sans colonies squameuses doit être utilisée comme nombre de colonies à cette dilution si les colonies squameuses représentent moins de la moitié de la plaque. et la moitié restante est La répartition des colonies est très uniforme, vous pouvez donc compter la moitié de la plaque et multiplier par 2 pour représenter le nombre de colonies sur une plaque. 3. Lorsqu’une croissance en chaîne sans limites évidentes entre les colonies apparaît sur la plaque, comptez chaque chaîne comme une colonie.

1. Si le nombre de colonies sur une seule plaque de dilution se situe dans la plage de comptage appropriée, calculez le nombre moyen de colonies sur les deux plaques, puis multipliez la valeur moyenne par le facteur de dilution correspondant pour obtenir le résultat du nombre total de colonies par gramme ou par millilitre. 2. Si le nombre de colonies sur deux plaques de dilution en série se situe dans la plage de comptage appropriée, calculez selon la formule (1) : N=∑C/(n1 n2)*d Dans la formule : N——Nombre de colonies dans l'échantillon ; ∑C——La somme du nombre de colonies sur une plaque (une plaque contenant une plage appropriée de nombres de colonies) ; n1——Le nombre de plaques de la première dilution (faible facteur de dilution) ; n2——Le nombre de plaques de la deuxième dilution (taux de dilution élevé) ; d——facteur de dilution (première dilution). 3. Si le nombre de colonies sur les plaques de toutes les dilutions est supérieur à 300 CFU, comptez la plaque avec la dilution la plus élevée. Les autres plaques peuvent être enregistrées comme étant trop nombreuses pour être comptées. Le résultat est calculé en multipliant le nombre moyen de colonies par le nombre moyen de colonies. facteur de dilution le plus élevé. 4. Si le nombre de colonies sur la plaque à toutes les dilutions est inférieur à 30 UFC, le calcul doit être basé sur le nombre moyen de colonies à la dilution la plus basse multiplié par le facteur de dilution. 5. S'il n'y a aucune croissance de colonies sur les plaques de toutes les dilutions (y compris les solutions originales d'échantillons liquides), le calcul doit être inférieur à 1 multiplié par le facteur de dilution le plus bas. 6. Si le nombre de colonies en plaques à toutes les dilutions n'est pas compris entre 30 CFU et 300 CFU, et que certaines d'entre elles sont inférieures à 30 CFU ou supérieures à 300 CFU, le nombre moyen de colonies les plus proches de 30 CFU ou 300 CFU sera multiplié par le facteur de dilution pour le calcul. .

1. Lorsque le nombre de colonies est inférieur à 100 UFC, il est arrondi selon le principe de « l'arrondi » et rapporté sous forme d'un nombre entier. 2. Lorsque le nombre de colonies est supérieur ou égal à 100CFU, le troisième chiffre est arrondi selon le principe de « l'arrondi », et les deux premiers chiffres sont pris, et les chiffres suivants sont remplacés par 0, il peut également être exprimé en ; sous la forme d'un exposant de 10, selon le principe de "l'arrondi". Après arrondi, utilisez deux chiffres significatifs. 3. L'échantillonnage par pesée est indiqué en UFC/g et l'échantillonnage volumétrique est indiqué en UFC/mL.

Un rapport est émis sur la base des résultats du décompte des colonies et l'unité de déclaration est exprimée en UFC/g (mL).

Milieu de culture MRS : la peptone, la poudre d'extrait de bœuf et la poudre d'extrait de levure fournissent des sources d'azote, des sources de carbone, des vitamines, des minéraux et d'autres nutriments nécessaires à la croissance bactérienne. Le glucose sert de source de carbone fermentescible, d'ions magnésium, etc. ; 80, le citrate de triammonium et l'acétate de sodium peuvent favoriser la croissance des bactéries lactiques et neutraliser les substances cytotoxiques ; le phosphate sert de tampon ;

Milieu de culture MC : la peptone de soja, la poudre d'extrait de bœuf et la poudre d'extrait de levure fournissent des sources d'azote, des sources de carbone, des vitamines, des minéraux et d'autres nutriments nécessaires à la croissance bactérienne. Le glucose et le lactose servent de glucides pour favoriser la croissance des bactéries lactiques et du calcium ; carbonate Neutralise l'acide produit par le métabolisme bactérien pour atténuer sa toxicité acide pour les cellules. Le rouge neutre sert d'indicateur acido-basique ; le milieu de culture contient 10 g/L de carbonate de calcium, qui est une substance insoluble et doit le faire. bien mélanger. Une fois homogène, verser sur l'assiette. Dans le même temps, il est normal que la plaque présente un précipité blanc.

Milieu MRS modifié de sel de lithium de mupirocine et de chlorhydrate de cystéine : la peptone, la poudre d'extrait de bœuf et la poudre d'extrait de levure fournissent des sources d'azote, des sources de carbone, des vitamines, des minéraux et d'autres nutriments nécessaires à la croissance bactérienne en tant qu'éléments de carbone fermentescibles ; les ions manganèse, les ions magnésium, le Tween 80, le citrate de triammonium et l'acétate de sodium peuvent favoriser la croissance des bactéries lactiques et neutraliser les substances cytotoxiques ; le phosphate sert de tampon et de coagulant ; Le sel de lithium de mupirocine inhibe d'autres bactéries lactiques, à l'exception du chlorhydrate de cystéine qui agit comme agent réducteur.