心智圖資源庫 6微生物檢驗
這是一篇關於食品微生物-6微生物檢驗心智圖,包含微生物數量測定、樣本的採集與處理、 生物分析及相關技術等。
編輯於2024-01-20 17:23:40Microbiologia medica, Infezioni batteriche e immunità riassume e organizza i punti di conoscenza per aiutare gli studenti a comprendere e ricordare. Studia in modo più efficiente!
La teoria cinetica dei gas rivela la natura microscopica dei fenomeni termici macroscopici e le leggi dei gas trovando la relazione tra quantità macroscopiche e quantità microscopiche. Dal punto di vista del movimento molecolare, vengono utilizzati metodi statistici per studiare le proprietà macroscopiche e modificare i modelli di movimento termico delle molecole di gas.
Este é um mapa mental sobre uma breve história do tempo. "Uma Breve História do Tempo" é um trabalho científico popular com influência de longo alcance. Ele não apenas introduz os conceitos básicos da cosmologia e da relatividade, mas também discute os buracos negros e a expansão. Do universo. questões científicas de ponta, como inflação e teoria das cordas.
Microbiologia medica, Infezioni batteriche e immunità riassume e organizza i punti di conoscenza per aiutare gli studenti a comprendere e ricordare. Studia in modo più efficiente!
La teoria cinetica dei gas rivela la natura microscopica dei fenomeni termici macroscopici e le leggi dei gas trovando la relazione tra quantità macroscopiche e quantità microscopiche. Dal punto di vista del movimento molecolare, vengono utilizzati metodi statistici per studiare le proprietà macroscopiche e modificare i modelli di movimento termico delle molecole di gas.
Este é um mapa mental sobre uma breve história do tempo. "Uma Breve História do Tempo" é um trabalho científico popular com influência de longo alcance. Ele não apenas introduz os conceitos básicos da cosmologia e da relatividade, mas também discute os buracos negros e a expansão. Do universo. questões científicas de ponta, como inflação e teoria das cordas.
食品中微生物及其 代謝產物的檢測
微生物數量測定
標準平板計數法 SPC
實驗流程
取樣
稀釋
十倍稀釋
接種:2-3個連續稀釋度,平行對照
傾注法
塗佈法
可檢測熱敏性菌體
更適合嚴格好氧菌
菌落形態明顯,觀察群體特徵
不會與食品顆粒混淆
菌落易重疊混雜
培養
培養基,條件
倒置培養:培養基失重小於15%
防止水滴滴落
防生長雜菌
菌落計數
選取菌落數合適的平板,細菌30~300CFU,黴菌/酵母菌10~150CFU
方法:肉眼觀察,菌落計數器
辨識菌落:菌落太小或與樣品顆粒相似—染色還原法,TTC(紅色四氮唑,顯色培養基),細菌特性
計算
報告,兩位有效數字,空白對照有菌落檢測結果無效
意義
判定微生物污染程度及衛生品質
預測食品存放期
反映新鮮度
監測生長繁殖動態
生物製品檢驗:污染、益生菌
其他方法
水化乾膜法-培養基
原理:預製培養基系統,可再生水化乾膜,培養基、冷水可溶性凝膠、指示劑、印有方格
操作步驟:稀釋,接種,培養,計數,報告
優點
生產效率高
誤差小
國際化:官方機構的批准
快速:6-14小時可估計24小時準確結果 3-5天確認黴菌和酵母菌數
鑑別培養基
旋轉接種法
依據阿基米德螺旋為接種軌跡,以遞減的比率接種樣品
自動螺旋儀接種,計數系統
數法:長出菌落中間多,四周少,計算單位面積菌落數
優點
測定結果與SPC相關性高
缺點
最近似數測定法MPN
利用待測微生物的特殊生理功能,用選擇性培養基(減少干擾),判斷微生物的存在與豐度
檢測具有營養與代謝特性的微生物如大腸菌群
操作簡單
可測定微生物群落中不佔優勢的微生物
大腸菌群
腸道菌,與糞便污染有關
在一定培養條件下發酵乳糖產酸產氣的需氧及兼性厭氧的陰性無芽孢桿菌
初發酵:LST,產氣者復發酵BGLB
檢測大腸桿菌的意義
糞便污染指示菌,評估食品衛生品質
評估腸道致病菌污染的可能,如沙門,志賀
作為指示菌的優點
來源多,數量多,檢出率高
外界存活時間基本一致
對殺菌劑的抵抗力基本上一致
操作簡單,無需複雜設備
靈敏度高
染色還原計數法(估算法)
原理:活細胞內含有還原酶,可把特定的燃料從一種顏色還原成另一種顏色。
常用試劑
亞甲基藍
藍色變白色
刃天青
暗藍色變成粉紅色,白色
四氮唑
無色變紅色
還原時間與微生物濃度成反比,常用於乳品衛生,精子活性
優點
簡便,快速和經濟
缺點
微生物還原能力不同,估算困難,不適合含還原酵素的食品
顯微直接計數法DMC
計數板直接計數
彼得羅夫霍澤細胞計數板(一般細菌),血球計數板(酵母/黴菌孢子)
計一定容積中微生物數量,但無法區分雜菌
優點
快捷,方便,分析細胞形態,載玻片易保存
缺點
僅適於含菌量多的樣品,準確度差,易疲勞
其他方法
棉拭子塗抹法,採樣法
表面微生物的檢測
應用於食品,器械表面,公共場所
薄膜過濾法,樣本濃縮
含菌量很少的樣品,富集菌體,提高檢出率
不受樣品體積限制
檢測方法:SPC,顯微計數,與染色法結合
物理,化學,分子和免疫方法
物理
阻抗測定法
阻抗
在具有電阻,電感和電容的生物材料中對測定電流起阻礙作用的叫阻抗
原理:微生物使培養基電特性改變,電惰性底物分解成電活性分子,離子,培養基的電導性增加,阻抗降低
電導率隨時間的變化
檢測時間:從培養到阻抗值發生急劇變化的時間,與原始菌數成反比
推演出微生物的原始菌量
微生物的阻抗曲線各不相同
微生物鑑定
直接阻抗法
培養基裝入特製的測量管,接種微生物後在培養基中插入電極,直接測量培養基的電特性變化
關鍵因素,培養基
被測菌➕產生可監測的阻抗變化
間接阻抗法
微生物代謝產生如二氧化碳等,反映微生物的代謝活性
二氧化碳進入測試管與氫氧化鉀反映產生碳酸鹽,其導電性降低,並記錄導電性變化
優點
無需優化培養基(可以沒有電反應)
可以測量含高鹽的培養基
可測微生物產生非常小或完全不產生可測的導電性變化,如酵母
可測食品本身幹擾阻抗測量甚至損害電極
微量熱法
化學
ATP的測定
活細胞的能量來源,細胞死亡兩小時後消失
細胞ATP恆定,其總量與細菌數量成正比,可推算
原核生物指數增長細胞的ATP含量通常2-6nmol/mg乾重
同種屬細胞準確測量ATP
常用方法 —螢光酶系統測定ATP
ATP參與螢光素-螢光素酶系統,使螢光素發光,發光量與ATP成正比
以發光強度推算出細胞數
可自動測定,快速檢測,結果與SPC法一致,省時
應用
發酵液的菌數測定
尿液檢體檢測
表面微生物測定
輻射量測法
原理:細菌代謝碳水化合物時產生二氧化碳,把微量元素標記到葡萄糖或其他醣類分子中,檢測釋放的二氧化碳
放射量與菌數成正比
檢測時間與微生物數量成反比
放射能計數器
應用
吹氣查胃病
食品微生物檢測
食品微生物的指紋辨識與鑑定
指紋:特徵性的化學組成,結構,表現差異及特異性代謝物
特徵性的圖譜:可識別,唯一
核酸識別
16srRNA鹼基序列
rRNA佔RNA總量的80%
許多區段高度保守
生物進化計時器
系統發育圖譜
PCR
聚合酶鍊式反應,無細胞克隆,即細胞外對特定的DNA片段進行擴增的分子生物學技術
檢測病原菌:特異性片段,保守性
原理:在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引子為延伸起點,經由變性,退火,延伸等步驟,體外複製出與模板DNA互補的子鏈DNA的過程
反應組分
模板DNA:目標基因-微生物特有的一段基因
引子一對:複製的起點和終點,複製的特異性
dNTP:A、T、G、C
DNA聚合酶
反應緩衝液,鎂鹽溶液
優點
體外擴增特異核酸片段
快速,靈敏,特異
自動微生物分析系統
全自動微生物分析
原理:儀器把對細菌鑑定必須的生化反應培養基固定到卡片上,培養後儀器對顯示反應進行判斷,利用數值法進行判定
革蘭氏陰性菌卡,革蘭氏陽性菌卡,酵母菌卡
API細菌鑑定係統
免疫學方法
抗原(Ag):可誘導免疫系統產生免疫反應,並與其產生的抗體或效應細胞在體內或體外發生特異性反應的物質
抗原決定簇:抗原表面的活性基團
抗原特性
抗原性:免疫原性和反應原性
異源性:蛋白質,糖,核酸(化學組成),5-10ku免疫效果不佳(分子量)
抗體(Ab):抗原進入機體刺激B細胞合成並分泌的一類能與抗原發生特異性反應的活性物質,主要存在於血清內
抗原抗體的檢測方法:檢測菌體或毒素
凝集反應
已知抗體鑑定抗原
顆粒型抗原與對應抗體結合,在有電介質存在的條件下,經過一定的時間,出現肉眼可見的凝集小塊
沉澱反應
中和反應
標記抗體或抗原技術
沙門氏菌1-2實驗
原理:在兩個特殊容器中進行,一個裝有選擇性液體培養基,另一個中有非選擇性半固體培養基
抗原抗體結合形成肉眼可見的免疫帶
酵素連結免疫吸附試驗ELISA
顆粒抗原:如細菌,病毒等
可溶性抗原:腸毒素,真菌毒素等
定性或定量
操作簡單,快速
實驗原理
酵素與抗體或抗原結合
抗原與抗體的特異性反應
酵素催化底物顯色,肉眼或儀器進行定性或定量
特異性➕酶的訊號放大
必需材料
固相支持物
酵素標記的抗原或抗體
辣根過氧化物酶,穩定性好
鹼性磷酸酶
酵素作用的底物
鄰苯二胺(黃色)
四甲基聯苯胺(藍色)
類型
直接法,間接法,夾心ELISA:測定顆粒抗原
競爭法:測定小分子抗原,如真菌毒素
夾心ELISA(sandwich ELISA)
①包被:抗體1 ②洗滌:去除過量、結合弱的試劑 ③加待檢樣品; ④洗滌; ⑤加酶標記抗體2; ⑥洗滌; ⑦加底物; ⑧終止反應
優點
可同時檢測多個樣品,可自動化操作,操作簡單,商業化
膠體金層析法
原理
鱟(hou)試劑測定法
靈敏的測定陰性菌細胞壁中內毒素方法
原理:內毒素與鱟溶解物之間發生反應,形成一種膠狀物,定性或半定量
生物分析及相關技術
實驗動物的選擇
對受試物的敏感性,性別,年齡,體重
受試物給予方式
飼餵;飲食,飲水
灌胃,膠囊
注射:腹腔,皮下
外科手術
肉毒毒素檢驗
動物實驗中的外科手術處理
綁紮環技術
樣本的採集與處理
採樣遵循的原則
確定採樣方案:耳二級、三級
代表性:隨機進行,代表全部食品
無菌操作,防止污染
保持原有的狀態:揮發、溫度
及時型:採樣、送檢
採樣方案
類型
取樣
n:同一批次產品應採集的樣本件數
結果判定
c:最大可允許超出m值的樣品值
m:微生物指標可接受水準的限量值
M微生物指標的最高安全限量值
二級
三級
食品危害度
I類危害,老人和嬰幼兒食品及在食用前可能會增加危害的食品
Ⅱ類危害,立即食用的食品,食用前危害基本不變
Ⅲ類危害,食用前經加熱處理,危害減小的食品
檢驗指標對食品重要程度:一般,中等,嚴重