même

différent

Objet expérimental : Activateur Gal4 des cellules eucaryotes, capable d'activer la transcription du gène galactose de Saccharomyces cerevisiae

① Expérience d'échange de domaine : La protéine obtenue en exprimant le fragment du gène Gal4 (N-terminal 1/3) peut se lier normalement à l'ADN, mais ne peut pas activer le processus de transcription. Une telle protéine contient un domaine de liaison à l'ADN mais ne dispose pas d'un domaine d'activation, de sorte que les domaines de liaison à l'ADN et d'activation transcriptionnelle de Gal4 peuvent fonctionner séparément.

② Expérience à deux hybrides de levure : construire un gène hybride qui fusionne la séquence C-terminale 2/3 codant pour la protéine Gal4 avec le domaine de liaison à l'ADN de la protéine inhibitrice bactérienne LexA. La protéine résultante est exprimée dans la levure avec le même plasmide rapporteur. Il existe un site de liaison LexA en amont du promoteur du plasmide Gal4, et la protéine de fusion peut activer la transcription de ce rapporteur. Les expériences montrent que l'activation n'est pas uniquement médiée par la liaison à l'ADN, mais au contraire. consiste uniquement à lier le domaine d'activation associé au promoteur.

① Protéines de domaine homotype : un type de protéine avec un domaine de liaison à l'ADN à motif hélice-hélice qui se lie à l'ADN de la même manière que les protéines régulatrices bactériennes

② Domaine de liaison à l'ADN contenant du zinc

③Domaine de fermeture éclair de leucine : cette protéine contient à la fois une surface de dimérisation et une surface de liaison à l'ADN. Dimérisation : interaction avec la surface hydrophobe (leucine) de l'hélice alpha. Liaison de l'ADN : interaction avec le site de reconnaissance symétrique de l'ADN, se fixant finalement sur l'ADN comme une pince ;

④ Domaine hélice-boucle-hélice (HLH) : la région hélicoïdale α étendue de chaque monomère est intégrée dans le sillon principal de l'ADN. Elle est similaire à la structure de la fermeture à glissière de leucine et peut également former des dimères et est appelée fermeture à glissière/base de base. protéine HLH sexuelle

⑤ Protéine de motilité à grande vitesse (HMG) : les crochets AY de la chaîne peptidique hautement conservée peuvent interagir avec le petit sillon de l'hélice de l'ADN et modifier de manière significative la conformation de la double hélice de l'ADN.

avec incertitude

Classification : ①Zone d'activation acide (la plus courante, Gal4) ②Zone riche en glutamine (SP1) ③Zone riche en proline (CTF1)

Pas d'activation allostérique chez les eucaryotes

Recrutement

agir à distance

synergie

Contrôle combiné

Compétition : Compétition avec l'activateur pour le site de liaison. En se liant à des sites superposés qui lient les activateurs, les répresseurs inhibent la liaison des activateurs aux gènes, bloquant ainsi l'activation des gènes.

Inhibition : inhibe la fonction activateur. L'inhibiteur se lie à un site proche de l'activateur et interagit avec l'activateur, bloquant stériquement sa région d'activation.

Inhibition directe : rivalise avec l'activateur pour la liaison à la polymérase. Le facteur inhibiteur se lie au site en amont du gène et inhibe l'initiation de la transcription en agissant de manière particulière avec l'appareil de transcription.

Inhibition indirecte : recrutement de modificateurs nucléosomiques. Réprime la transcription en recrutant des enzymes modifiant les histones pour modifier les nucléosomes. Tels que la modification de la méthylation et l'action de la désacétylase.

Exemples de voies de signalisation

Voie de signalisation : Le signal/ligand initial se lie au domaine extracellulaire du récepteur spécifique à la surface cellulaire → le signal est transmis au domaine intracellulaire du récepteur (par allostérie ou dimérisation du récepteur) → le signal est ensuite transmis de manière relais vers le régulateur transcriptionnel concerné → le régulateur transcriptionnel contrôle l'expression du gène cible

Mécanismes par lesquels les signaux contrôlent l'activité des régulateurs transcriptionnels dans les cellules eucaryotes