Rastrear, prever toxicidade, explorar mecanismos

Avaliação da toxicidade: animais → humanos

Verificação dos resultados de experimentos com animais

1. Os efeitos em animais experimentais podem ser extrapolados para humanos

2. Animais experimentais devem ser expostos a altas doses

3. Os sujeitos experimentais são animais adultos saudáveis.

4. A via de envenenamento é a possível via de exposição do ser humano.

A extrapolação de experimentos com animais para humanos é incerta

Há incerteza em extrapolar doses altas para doses baixas

A extrapolação de um pequeno número de animais para um grande número de pessoas é incerta

Geralmente são utilizados animais adultos saudáveis ​​e a reação é relativamente simples.

Princípio "3R"

Questões éticas na experimentação animal

Princípios Éticos da Experimentação Humana

Observe os efeitos tóxicos e propriedades da substância de teste

Estudos de relação dose-resposta (efeito)

Determinar órgãos-alvo de toxicidade

Determinar a reversibilidade do dano

Indicadores sensíveis de detecção de efeitos tóxicos

marcadores biológicos

mecanismo de envenenamento

Toxicocinética das substâncias de teste

Metabolismo da substância teste e medidas de resgate de envenenamento

Os animais que foram criados artificialmente e os microrganismos que eles carregam são controlados, com antecedentes genéticos claros e origem clara. É usado principalmente para pesquisa científica, avaliação de eficácia e segurança de medicamentos e produtos biológicos e ensino.

Geralmente escolha duas espécies: roedores e não roedores

O princípio básico

Seleção de linhagens animais experimentais

Animais experimentais classificados por controle genético

Parâmetros de controle microbiológico para animais experimentais

Padrões de classificação microbiana para animais de laboratório

Seleção individual de animais experimentais

Estrutura das instalações para animais de laboratório

Tipos de instalações para animais experimentais

princípio de randomização

Princípio de contraste

Princípio de repetição

Agrupamento de doses para testes toxicológicos in vivo

Número de animais em cada grupo

Período de teste

Após a compra dos animais experimentais, os machos e as fêmeas devem ser mantidos separadamente.

Geralmente, a quarentena é realizada por 5 a 7 dias.

Identificação de gênero de animais experimentais comumente usados

Agrupamento de animais

Preparação da substância teste

Escolha da via de exposição

Preparações venenosas

Ao preparar, não aqueça o objeto de teste a uma temperatura que possa alterar suas propriedades físicas e químicas.

Para avaliar a toxicidade cutânea de substâncias de teste sólidas, a sua forma e tamanho de partícula devem ser mantidos

Preparar a substância de teste multicomponente de acordo com a fórmula para que a preparação reflita com precisão a mistura original

As preparações devem manter a estabilidade química e a consistência com a substância em estudo

A preparação deve reduzir o volume total do teste e não utilizar muito solvente ou excipiente.

Os preparativos devem ser fáceis de preparar para a exposição

O pH da preparação é melhor entre 5 e 9

Não use ácidos ou bases para dissociar a substância de teste

Para intoxicação parenteral, a solução final deve ser o mais isotônica possível

Exposição oral (gastrointestinal)

Infecção via trato respiratório

exposição da pele

Exposição via injeção

Coleta de urina e fezes

Coleta de amostras de órgãos

Coleta biliar

coleta de sangue

Anestesia geral (pentobarbital sódico) e local (procaína, etc.)

O processo de matar animais usando métodos humanos e publicamente reconhecidos para que morram silenciosamente e sem dor, sem medo ou ansiedade.

O exame patológico é uma parte importante dos testes toxicológicos, e os estudos patológicos podem ajudar a determinar os efeitos nocivos e os órgãos-alvo. O exame patológico inclui anatomia macroscópica e exame histopatológico.

Meia hora após o sacrifício dos animais experimentais, eles foram dissecados pelo método de extração combinada de órgãos torácicos e abdominais.

Observe a forma, condição da superfície, cor, borda, tamanho, textura e seção dos órgãos relevantes.

Pese os órgãos designados e calcule os coeficientes dos órgãos.

1. Fixe o animal na tábua de dissecação e disseque o pescoço (glândula parótida, gânglios linfáticos, etc.)

2. Pegue um lado da pele do peito e da cintura, abra o abdômen e expanda a incisão (órgãos abdominais internos)

3. Abertura do tórax (órgãos internos do tórax, língua e garganta, traquéia, tireóide, etc.)

4. Retire o membro posterior esquerdo (músculos, etc.), couro cabeludo e orelhas, abra o crânio e exponha a medula espinhal.

Use uma faca afiada para cortar o órgão ou tecido designado e unificar as partes.

Os blocos de tecido são geralmente fixados em 10 vezes o volume de uma solução de formaldeído a 10% e depois preparados rotineiramente (inclusão de tecido em parafina, seccionamento e coloração HE).

Observe e registre sob um microscópio para fazer o diagnóstico patológico.

Comparação em pares entre cada grupo de tratamento e o grupo de controle negativo e comparação entre vários grupos de tratamento e o grupo de controle negativo

relação dose-resposta e relação dose-resposta

gráfico de controle de qualidade

É estatisticamente significativo?

É biologicamente significativo?

Se tem significado toxicológico, ou seja, se tem efeitos nocivos

Comparação longitudinal: se existe relação dose-resposta para alterações neste parâmetro.

Comparação horizontal: se as alterações neste parâmetro são acompanhadas por alterações em outros indicadores relacionados.

A diferença entre as médias do grupo de tratamento e do grupo de controle é mais que o dobro do erro de detecção.

Comparação com controles históricos: O valor normal de referência para animais experimentais é composto pelos resultados do controle negativo de pelo menos 10 experimentos independentes recentemente conduzidos neste laboratório usando a mesma linhagem de animais experimentais e o mesmo solvente, e sua média ±1,96 × padrão o erro é usado como intervalo de valores de referência. Os controles negativos devem estar dentro de ±3× o erro padrão da média dos controles históricos.

①O valor excede a faixa de valor de referência normal

②O valor está dentro da faixa de valor de referência normal, mas a diferença continua por um período de tempo após o contato ser interrompido.

③O valor está dentro da faixa de valor de referência normal, mas se o corpo estiver em estado de estresse funcional ou bioquímico, a diferença será mais óbvia.

É um regulamento de gestão formulado para avaliação de toxicidade de medicamentos, aditivos alimentares, pesticidas, cosméticos e outros itens médicos.

É um documento normativo que regulamenta um sistema completo de gestão organizacional para pesquisas de segurança não clínicas relacionadas à saúde humana e ao meio ambiente, incluindo planejamento experimental, implementação, supervisão, registros e gerenciamento de arquivos.

A história do desenvolvimento do GLP no país e no exterior

Objetivo e significado

Conteúdos fundamentais

O objetivo é garantir a reprodutibilidade operacional e a credibilidade do resultado

Quando o pessoal que recebeu educação e treinamento realiza testes de acordo com o POP, a reprodutibilidade de suas operações de teste e resultados operacionais é melhor.

Na mesma instituição de pesquisa ou laboratório, se diferentes pessoas realizarem operações e testes de acordo com o SOP, poderão garantir resultados mais consistentes.

sistema organizacional

Pontos-chave na concepção de experimentos de toxicologia in vivo

Projeto de teste de toxicologia in vitro

Procedimentos operacionais e gerenciamento do laboratório

Gerenciamento de reagentes

Gerenciamento de instrumentos

gestão ambiental

Manejo de animais de laboratório

Gestão cega

gráfico de controle de qualidade

Análise estatística de dados experimentais

Avaliação de resultados experimentais

Como os testes de toxicidade crônica têm um ciclo longo, consomem muitos animais e exigem muita mão de obra e recursos materiais, como garantir a confiabilidade dos testes crônicos em animais?