Unità strutturale di base: amminoacido

Il campione viene riscaldato e digerito con acido solforico concentrato e un catalizzatore per decomporre la proteina, in cui il carbonio e l'idrogeno vengono ossidati in anidride carbonica e fuoriesce acqua, mentre l'azoto organico nel campione viene convertito in ammoniaca e combinato con acido solforico per formare solfato d'ammonio. Quindi aggiungere l'alcali per la distillazione per far evaporare l'ammoniaca, assorbirla con acido borico e quindi titolare con acido standard. Il contenuto proteico nel campione può essere calcolato in base al consumo di acido standard.

Digestione: dopo il pretrattamento del campione, aggiungere acido solforico concentrato, solfato di potassio (aumento del punto di ebollizione), solfato di rame (catalizzatore, indicatore del punto finale)

Distillazione e assorbimento: aggiungere alcali (NaOH, 400 g/L), eliminare l'ammoniaca e assorbirla con acido borico (20 g/L)

Titolazione: 0,05 mol/L di acido standard o acido solforico (la soluzione vira dal blu al rossastro)

Elaborazione dati (proteina grezza)

Il risultato è la proteina grezza

Adatto per valore F

L'acido solforico in eccesso dovrebbe essere utilizzato per prevenire l'eccesso di ammoniaca

Due parti di urea vengono condensate in biureto a 180°C e reagiscono con il solfato di rame in ambiente alcalino per formare un complesso rosso porpora.

Soluzione proteica standard

Coomassie G-520 si lega alle proteine ​​per formare un complesso colorato con un picco massimo di assorbimento a 595 nm.

Soluzione standard: soluzione standard di albumina di siero bovino

Gli amminoacidi contengono -COOH acido e -NH2 basico, che interagiscono per rendere l'amminoacido un sale interno neutro. Quando viene aggiunta formaldeide, -NH2 si combina con la formaldeide e la sua alcalinità scompare, facendo sì che il gruppo -COOH possa essere acido utilizzato Titolazione di soluzioni standard.

Secondo l'effetto anfotero degli amminoacidi, viene aggiunta formaldeide per fissare l'alcalinità del gruppo amminico e far sì che il gruppo carbossilico mostri acidità. Inserire contemporaneamente l'elettrodo di vetro e l'elettrodo di calomelano dell'acidometro nel liquido da misurare una batteria. Utilizzare la soluzione standard di NaOH per titolare secondo le istruzioni dell'acidometro. Il valore del pH determina il punto finale.

Ninidrina → Ninidrina idrato → Ninidrina idrato → Ninidrina idrato → Composto blu-viola