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心智圖資源庫 臨床免疫學
- 10
臨床免疫學
醫學檢驗中級職稱考試知識點，包含單株抗體、凝集反應、自體免疫疾病、免疫增殖性疾病、沉澱反應等。
編輯於2024-01-14 00:56:14
- bacteria
This is a mind map about bacteria, and its main contents include: overview, morphology, types, structure, reproduction, distribution, application, and expansion. The summary is comprehensive and meticulous, suitable as review materials.
- Plant asexual reproduction
This is a mind map about plant asexual reproduction, and its main contents include: concept, spore reproduction, vegetative reproduction, tissue culture, and buds. The summary is comprehensive and meticulous, suitable as review materials.
- Reproductive development of animals
This is a mind map about the reproductive development of animals, and its main contents include: insects, frogs, birds, sexual reproduction, and asexual reproduction. The summary is comprehensive and meticulous, suitable as review materials.
臨床免疫學
- bacteria
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- 大綱
臨床免疫學
概論
簡介
免疫功能
防禦
清除病原微生物
增強
超敏反應
減弱
免疫缺陷症
對外
自穩
清除損傷細胞或衰老細胞
增強
自體免疫疾病
對自己、不能用的
監視
清除突變或畸變的惡性細胞
減弱
惡性腫瘤
防腫瘤
細胞
來源於淋巴樣前驅細胞的細胞
NK細胞
在急性發炎中起關鍵作用的細胞
嗜中性球
能夠引起急性變態反應的細胞
嗜鹼性球
具有協同清除血液循環中免疫複合物功能的細胞
紅血球
免疫應答
接受抗原刺激發生的一系列反應
排出或分解該抗原的目的
特徵
辨識自身和非己
特異性
記憶性
多樣性、耐受性、自我調節性
分類
固有免疫
又稱先天性免疫、非特異性免疫
第一道防線
組織屏障
皮膚黏膜
特點
早期
快速
先天
非特異性
適應性免疫
又稱後天免疫、特異性免疫
流程
識別
抗原提呈細胞（APC）
進行辨識、攝取、降解
識別
攝取
吞進肚子裡
降解
分解成抗原勝肽
提呈
分解後釋放
提呈抗原訊息
給輔助性T細胞及相關淋巴球
活化
T、B細胞
接受抗原刺激訊號後活化、增殖、分化的過程
直接刺激
APC提呈現後刺激
B細胞
漿細胞
體液免疫
在吞噬細胞的幫助下完成體液免疫
T細胞
效應細胞（殺傷性T細胞）
細胞免疫
效應階段
漿細胞
分泌抗體
胸腺依賴性細胞
在活化B細胞時
需要輔助T細胞幫助
T細胞
輔助性T細胞（Th細胞）
分泌細胞因子
殺傷性T細胞(CTL)
執行細胞毒性效應
目標細胞
腫瘤細胞
被細菌感染的細胞
移植的器官
記憶細胞
少量T細胞和B細胞在增值分化後
不直接執行效應功能
作用於
再次免疫應答
不用活化階段
直接產生抗體
初次免疫應答
產生抗體的特點
低親和力抗體
人工主動免疫和人工被動免疫
人工主動免疫
用疫苗（抗原）接種
人工被動免疫
免疫血清（抗體）、淋巴因子
如打破傷風
不用刺激
立刻有免疫
免疫組織和器官
系統
免疫器官
免疫細胞
免疫分子
免疫器官
中樞免疫器官
免疫細胞產生、分化、成熟的場所
骨髓
重要的造血器官
血球和淋巴球（T、B）的發源地
B細胞
發育成熟的地方
體液也是從骨髓出來的
胸腺
T細胞
發育成熟的地方
週邊免疫器官
免疫反應的場所
識別、活化的場所
淋巴球再循環
起點、中途站、歸巢的終點
週邊免疫器官
血液
週邊免疫器官
器官
淋巴結
數量最多
脾臟
最大
黏膜相關淋巴組織
扁桃體、小腸淋巴結、闌尾
免疫細胞
分類
淋巴球
T、B細胞
NK細胞
單核-吞噬細胞
輔助作用
體液免疫後期
細胞免疫前期
抗原提呈細胞
單核細胞進入組織
就是吞噬細胞
淋巴球
T細胞
功能
細胞免疫
佔週邊血淋巴球總數的
60%-80%
表面標記
CD28
表達在
T細胞表面
能與B細胞表面的CD80相互作用
刺激T細胞的活化
CD45RO
記憶性T細胞表面特異性CD抗原
亞群
Th
功能
促進和增強免疫應答
Th1
分泌IL-2、IFN-r（幹擾素-r）、TNF-β（腫瘤壞死因子β）
促進細胞免疫
Th2
分泌IL-4、5、6、10
促進體液免疫
對細胞免疫反應起負調節作用
TCF-β
負調節細胞免疫
CTL
特異性識別
內源性抗原勝肽-MHC-I類分子複合物
腫瘤細胞被殺死的條件
表達MHC-I類因子
特異性殺傷性標靶細胞
B細胞
功能
體液免疫
佔週邊血淋巴球總數的
8%-15%
表面標記
mIgM=u鏈Ig
CD80
表達在
活化的B細胞表面
與T細胞表面的CD28相互作用
刺激T細胞活化
CD21
成熟B細胞表面的CD分子
能與EB病毒結合
B2細胞
週邊血液中主要的B細胞
執行體液免疫的主要細胞
B1細胞
參與身體免疫調節、自體免疫疾病及B細胞源性腫瘤密切相關
辨識的抗原種類
多醣
自然殺手細胞（NK細胞）
特點
非特異性
無需抗原刺激
不用激活
直接殺傷目標細胞
不受MHC分子限制
胞質中含有嗜天青顆粒
表面標記
CD56、CD16
CD56 CD3-CD16
兩個老六不用刺激直接幹
測定活性的標靶細胞
人類NK細胞活性
K562細胞株
小鼠NK細胞活性
YAC細胞株
抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用
細胞介導：NK細胞
ADCC
NK細胞的殺傷功能也需要抗體的幫助
所需的抗體
IgG
流程
IgG與標靶細胞相應抗原決定簇結合
NK細胞結合IgG的Fc段
活化NK細胞
釋放穿孔素、顆粒酶等殺傷性目標細胞
目標細胞凋亡
偵測
NK細胞的殺傷活性
細胞毒試驗
免疫輔助細胞
名詞解釋
淋巴球
尤其是T細胞
活化需要非淋巴球的參與
分類
單核-吞噬細胞
樹突狀細胞
單核-吞噬細胞
大吞噬細胞
血液中的單核細胞
組織中的巨噬細胞
表面含有清道夫受體、TcrR、TLR、補體受體
沒有抗原辨識受體
因為巨噬細胞是非特異性的
小吞噬細胞
嗜中性球
表面標誌
單核-吞噬細胞
CD14
嗜中性球
CD33
樹突狀細胞
不具有吞噬能力
有很強的抗原提呈能力
抗原提呈細胞（APC）
重要的表面標誌
MHC Ⅱ類抗原
巨噬細胞活化後出現高水準的
巨噬細胞靜止時表現量低
專職
單核-吞噬細胞
樹突狀細胞
初次免疫反應主要的提呈細胞
B細胞
不需要活化
再次免疫應答主要的提呈細胞
非專職
內皮細胞
上皮細胞
活化的T細胞
必須是啟動的
免疫細胞的分離、保存
分離
單一核細胞分離
Ficoll分離液
單次密度梯度離心法
只有一個密度，離心後只在一層（中間層）
單一核心也在這裡
分離單一核細胞
淋巴球
單核
分層
血小板、血漿層
單一核細胞層（Ficoll分離液）
粒細胞、紅血球層
比重範圍
單一核細胞
1.075-1.090
多核球
1.092左右
血小板
1.030-1.035
淋巴球的分離
黏附貼壁法、吸附柱過濾法
原理
單核細胞能主動黏附在玻璃、塑膠、尼龍毛、棉花纖維、葡聚醣凝膠
懸浮液中去除單核細胞
獲得純淋巴細胞群
磁鐵吸引法
單核能吞噬鐵顆粒
Percoll分離法
連續密度梯度離心法
分層
死細胞、血小板、血漿
單核細胞（上層）
淋巴球（下層）
粒細胞、紅血球層
T、B細胞的分離
E花環沉降法
T細胞有綿羊紅血球受體（E受體/CD2受體）
T細胞
EA花環沉降法
B細胞有IgG Fc受體
能與免疫球蛋白IgG的Fc段結合
B細胞
T細胞亞群的分離
原理
根據相應細胞的特性和不同表面標誌
Th
CD4
CTL
CD8
親和板結合分離法
磁性微球分離法
螢光活化細胞分離儀分離法
儲存
長期保存
液態氮深低溫
-196
保護劑
二甲亞砜
分離細胞的活性測定
看看有沒有功能
儲存前要看功能
台盼藍染色法
包括看精子的死活
台盼藍
不能透過活細胞的完整的細胞膜
活細胞不著色
死細胞著色
藍色
表面標誌的偵測
抗體致敏細胞花環法
E花環
EA花環
免疫細胞化學法
以酵素標抗體與細胞上特異性受體結合
普通顯微鏡觀察著色細胞的百分比
免疫螢光法
螢光素標記抗體與細胞上特異性受體結合
螢光顯微鏡觀察發出螢光細胞的百分比
流式細胞分析法
淋巴球的功能檢測
T細胞的功能檢測
T淋巴球增生試驗/淋巴母細胞轉殖（體外試驗）（PHA淋巴球轉殖試驗）
原理
T細胞在體外受到有絲分裂原或抗原刺激後
胞內蛋白質和核酸合成增加
體積增大、核內DNA及胞漿內RNA合成增加
胞質增多
出現空泡
核染色質疏鬆
核仁明顯
變回淋巴母細胞
母細胞化
又變回母的，為了增殖
刺激物
非特異性絲裂原
植物血凝素（PHA）
刀豆素A（ConA）
美洲商陸（PWM）
特異性抗原
結核分枝桿菌的純化蛋白衍生物（PPD）
破傷風類毒素
刺激T細胞增殖
腫瘤抗原
同種異體細胞
植物血凝素（PHA）
刺激B細胞增殖
EB病毒
同時刺激T和B細胞增殖
結核分支桿菌的純化蛋白衍生物（PPD）
檢測方法
形態學檢查法
3H-TdR摻入法（放射性核種法)
活化的淋巴球攝取DNA合成的前體
3H標記的胸腺嘧啶核苷
根據摻入量的多少
T細胞介導的細胞毒試驗
原理
致敏的T細胞再次遇到對應標靶細胞抗原時
表現出破壞和溶解靶細胞
臨床應用
評估身體細胞的免疫水平
特別是測定腫瘤患者CTL殺傷腫瘤細胞的能力
判斷預後與觀察療效
體內試驗
原理
正常機體對某種特殊抗原建立了細胞免疫後
用相同的抗原做皮膚試驗
陽性的遲發性超敏反應
方法
結核菌素試驗（OT/PPD）
皮下接種
2-3天后
紅腫、水泡
＞20mm
證明感染結核
如果病人確定結核
PPD陰性
證明細胞免疫功能降低
臨床應用
是否對某種抗原具有特異性細胞免疫反應能力
細胞免疫狀態
診斷某些病原微生物感染（結核、麻風）
診斷細胞免疫缺陷性疾病
判斷疾病預後
B細胞的功能檢測
B細胞增生試驗
原理
與T細胞增生試驗相同
刺激物
小鼠B細胞
細菌脂多醣（LPS）
人類B細胞
含SPA的金黃色葡萄球菌及抗IgM抗體
SPA
葡萄球菌A蛋白
溶血空斑試驗
B細胞產生抗體的能力
原理
用綿羊紅血球（SRBC）
免疫小鼠
取鼠的脾臟
製備脾臟細胞懸浮液
裡面是漿細胞
製備含SRBC的瓊脂平板
在平板上加入脾臟細胞懸浮液
若產生抗SRBC抗體，周圍致敏
在補體參與下
將SRBC溶解
形成肉眼可見的溶血空斑
流程
臨床意義
每個空斑中央含一個抗體形成細胞
空斑數目
抗體形成細胞數
空斑大小
每個細胞產生抗體的多少
反向溶血空斑試驗
測定抗體生成細胞數
酵素連結免疫斑點試驗（ELISPOT）
POT
斑點的意思
應用
體外檢測
特異性抗體的B細胞
抗體分泌量
分泌細胞激素的T細胞
既能檢測抗體分泌細胞
又能檢測抗體分泌量
吞噬細胞功能檢測
嗜中性球功能檢測
趨化功能偵測
濾膜滲透法（Boyden小室法）
皮膚窗試驗
胞內殺菌能力
硝基四氮唑藍（NBT）還原試驗
正常人陽性率
5%-10%
陽性率明顯升高
全身性細菌感染
吞噬功能和代謝活性
化學發光法
可以增強發光效率的物質
魯米諾
巨噬細胞功能檢測
炭粒廓清試驗
吞噬細胞能吞炭粒
免疫分子
免疫活性細胞或相關細胞
分泌參與身體免疫反應或免疫調節
蛋白質及多肽物質
分類
免疫球蛋白
抗體
補體
細胞因子
細胞黏附分子
人類白血球分化抗原
免疫球蛋白
免疫球蛋白（Ig）
與抗體分子具有相似的化學結構的球蛋白
Y字型
抗體（Ab）
B細胞接受抗原刺激後增生分化為漿細胞所產生的球蛋白
發揮體液免疫功能
副作用最小的抗體
小分子抗體
最為治療藥物載體的
單株抗體
所有的抗體都是免疫球蛋白
並非所有免疫球蛋白都是抗體
如多發性骨髓瘤
分類
分泌型（sIg）
主要存在體液中
具有抗體的各種功能
模型（mIg)
作為抗原受體表達於B細胞表面
膜表面免疫球蛋白
化學結構
Ig分子由4條勝肽鏈組成
2條相同的重鏈（H）
γ、α、μ、δ、ε鏈
重鏈不同，免疫球蛋白的種類不一樣
2條相同的輕鏈（L）
K、L鏈
K：L約2：1
二重二輕、上變下恆、重恆分類、輕恆分型、輕重可變結抗原
免疫球蛋白分類
重鏈恆定區
免疫球蛋白分型
輕鏈恆定區
重鏈恆定區抗原性（CH）
IgG（γ）＞IgA（α）＞IgM（μ）＞IgD（δ）＞IgE（ε）
Fc段
恆定區（VH區）
免疫球蛋白同種型抗原決定簇
恆定區（CH，CL）
免疫球蛋白的抗原結合位點
重鏈（H）和輕鏈（L）的可變性（V區）
超變區（HVR）
在抗體可變區內（V區）
結合表位的部位
又稱互補決定區（CDR）
真正與抗原結合的是6個位點
分類
IgG
主力軍
含量最高
唯一能通過胎盤的抗體
自體抗體、超敏II型抗體、免疫學檢測中第二抗體（二抗）
IgG1、IgG2、IgG3、IgG4
IgG1含量最高
IgG4不能活化補體
對流免疫電泳中
IgG1和IgG2
由於電滲
向陰極移動
IgG3和IgG4
由於電流
向陽性移動
潛伏期長
親和力高
再次免疫應答的主要抗體
作用
IgM
先行軍
五聚體
分子量量大
又稱巨球蛋白
個體發育過程中最早合成分泌的抗體
新生兒臍血IgM增高
子宮內感染
抗原刺激後最早產生的抗體
感染過程中血清IgM濃度升高
近期感染
能再鹽水介質中引起紅血球聚集
血型鑑定（玻片法）
親和力低
活化補體能力最強
天然凝集素
冷凝集素
冷凝集素症候群
IgM類免疫球蛋白引起的自體免疫疾病
IgA
邊防軍
分泌型（sIgA）
二聚體結構
含一個J鏈和一個分泌片
參與黏膜局部免疫
主要抗體
存在胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液
母乳中sIgA提高嬰兒出生後4-6個月內的局部免疫屏障
局部抗體
IgE
含量最少
親細胞抗體
肥大細胞和嗜鹼性球親和
I型超敏反應
增多
I型超敏反應
支氣管氣喘、過敏性鼻炎
非變態反應性疾病
IgE型骨髓瘤
寄生蟲感染
免疫球蛋白片段的製備
酵素法
木瓜蛋白敏
IgG裂解成2個Fab片段及一個Fc片段
製作免疫球蛋白Fc片段所用的酶
胃蛋白酶
IgG裂解成F（ab）2及數個小片段
子主題
體液免疫球蛋白測定
測定IgG、IgA、IgM測定
含量g/L水平
單向環狀免疫擴散法
免疫比濁法
最常用
酵素連結免疫吸附試驗
測定IgG亞類
靈敏度最低
補體
概述
補體（C）
一組血清中具有酵素樣活性、不耐熱的糖蛋白（多屬於β-球蛋白）
但不是酶
由肝細胞和巨噬細胞合成
抗原刺激機體
不會產生
補體系統
組成成分
固有成分
C1、C2、C3、C4、C5
補體調節蛋白
補體受體組成
C3
含量最高
C2
含量最低
D因子（沒有C2）
含量最低
分子量最小
C1q
分子量最大
C1的一個片段
化學性質
冷凍乾燥
保持其活性
補體滅活
56℃
30min
強酸強鹼
強烈震盪
某些添加物
乙醚
乙醇
蛋白酶
紫外線照射
活化途徑
C9是N個
識別階段
需要免疫球蛋白的參與
IgM或IgG與抗原結合
激活C1q及C1s
活化階段
C1s裂解C4、C2
C3轉化酶（C4b2b）形成
C3轉化酶裂解C3
C5轉化酶（C4bC2bC3b）形成
MAC膜攻擊階段
C5轉化酶裂解C5
C5b67複合物形成
C5b678嵌入細胞膜
N個C9進入
形成跨膜孔道
外界水就可以進入細胞
造成細胞溶解
補體在活化過程中裂解成多個片段
較小的片段
a
較大的片段
b
C2例外
較大片段
C2a
較小片段
C2b
在經典途徑中唯一的小片段
作用
輔助抗體發揮溶細胞作用
參與機體的防禦效應與自身穩定
引起免疫病理反應
C3a和C5a
作用到肥大細胞核嗜鹼性球的細胞膜上
使細胞脫核釋放組織胺和白三烯
類過敏反應的病歷變化
過敏毒素
Raji細胞
表面有大量的C3b、C1q和C3d受體
沒有Smig
利用這些受體與結合補體的循環免疫複合物結合
再加入放射性核種標記的抗人IgG
可檢測循環免疫複合物
補體總活性測定
補體50%溶血試驗（CH50測定）
原理
SRBC（綿羊紅血球）抗體與SRBC表面抗原結合
活化補體（經典途徑）
50%溶血時的最小血清量
反映補體總活性
比100%溶血
更敏感、更易觀察
溶血反應對補體計量的依賴
特殊的S形曲線
溶血素大多使用
2個單位（2U）
單位
U/ml
影響
溶血活性下降
PH
緩衝液和離子強度
增高
離子
緩衝液鈣、鎂離子
過量
抑制溶血活性
臨床意義
增高
惡性腫瘤
C3、C4也增高
補體結合試驗
原理
抗原抗體複合物可結合補體
遊離的抗原或抗體不能結合補體
稀釋緩衝液
適量的氯化鈉
少量的鈣離子和鎂離子
具有一定的pH值
偵測
抗原或抗體
指示系統
溶血素
溶解紅血球的抗體
指綿羊紅血球
抗原抗體系統
作用
指示補體是否被結合
檢測待測抗原或抗體是否存在
分類
反應系統
補體系統
是試劑
一般用
新鮮豚鼠血清
不是被測試的
指示系統
溶血素
綿羊紅血球
流程
加試劑1
已知抗原/已知抗體
加血清（看抗體/看抗原）
加試劑2
加入補體
加試劑3
加入指示系統
如果血清有抗體那麼補體已經和第一步結合，試劑3無法再結合
不溶血
不溶血
陽性
存在待測抗原/抗體
用量單位
實用單位
最少量的完全溶血
用量
抗原、抗體、溶血素、羊紅血球
各0.1ml
補體
0.2ml
總共0.6ml
正式試驗的補體用量
公式
最少的完全溶血量
1：60稀釋
Y
Y*2：60=0.2：X
X：稀釋倍數
2：2個補體單位
0.2：補體用量
臨床意義
降低
消耗增多
RA（類風濕）、SLE（系統性紅斑狼瘡）、自體免疫溶血活動期（II型超敏）、移植排斥反應
細菌感染
特別是革蘭陰性細胞感染
最敏感的微生物
常因補體旁路途徑的活化而引起血清補體濃度降低
脂多醣（LPS）刺激
合成不足
嚴重肝病
營養不良
大量喪失
大面積燒傷
大出血
腎病症候群
臨床意義
補體缺乏的遺傳性疾病
C1抑制分子缺陷
不是缺C1
遺傳性血管神經性水腫
C3缺陷
嚴重感染
細胞因子
活化的免疫細胞及某些基質細胞
分泌的活性物質
化學本質
蛋白質或小分子多肽
大多數為糖蛋白
大多是低分子量蛋白質
多以單體形式存在
不受MHC限制
生物學功能
介導及調節免疫反應與發炎反應
調節多種細胞生理功能
不能單獨刺激B細胞產生抗體
B細胞活化、增殖
需要雙訊號、雙識別以及細胞因子
偵測
最常用的方法
免疫學測定法
ELISA
首選方法
只測免疫反應性
不測免疫活性
流式細胞分析法
酵素連結免疫斑點試驗（ELISAPOT）
不能測定細胞因子的前驅分子的方法
生物活性測定
包括
白細胞介素（IL）
IL-2
T細胞產生
促進和維持T細胞長期培養
故稱T細胞生長因子
移植排斥反應
活化後分泌IL-2促進效應T細胞（CTL）進入移植物，促進B細胞產生抗體
在遲發性超敏反應（DTH）
不僅引起抗原活化的T細胞增殖
還能使「旁觀者」T細胞增殖
可激活NK細胞
偵測
促進細胞增殖測定法
減低
慢性B肝
慢性B肝
單一核細胞用LPS刺激後
IL-1、IL-2分泌能力明顯低於正常人
IL-4
Th2細胞產生
促進免疫球蛋白類別的轉換
結核患者周邊血單核細胞經分枝桿菌抗原刺激後
明顯增加
啟動休止期的B細胞進入DNA合成期
I型超敏反應
刺激特異性B細胞增生分化成漿細胞
產生特徵IgE
增加
活動性肺結核
IL-3、IL-5
I型超敏反應
與嗜酸性粒細胞表面受體結合後
刺激其活化
釋放嗜酸性顆粒和生物活性物質
IL-5
促進嗜酸性粒細胞增生、分化、趨化
IL-6
多發性骨髓瘤、骨髓瘤患者
使破骨細胞數量增多的重要因子
促進漿細胞增生分化的關鍵因子
刺激B細胞雜交瘤細胞增生最常使用的
器官移植後，發生慢性排斥反應
的患者體內細胞激素水平
明顯升高
IL-6
IL-6、IL-1
刺激肝細胞分泌急性期蛋白
IL-8
對嗜中性球有趨化作用
IL-10
負免疫調節因子
可抑制IL-2、IL-1合成
IL-18
具有趨化活性
方法
趨化活性測定法
幹擾素（IFN）
I型乾擾素
α幹擾素
人類白血球產生
β幹擾素
人類纖維母細胞產生
抗病毒作用較強
II型乾擾素
r幹擾素
T細胞產生
Th1細胞產生
作用
免疫調節作用
最強
抗病毒作用
抑制Th0細胞向Th2細胞轉化
因為這個是Th1產生的，當然向著自己媽媽
也就是抑制Th2細胞的活化與增殖
可激活NK細胞
IFN-α和IFN-r作用於不同的受體
在受抗原刺激後產生
檢測方法
抗病毒活性測定法
生長因子
轉化生長因子（TGF）
TCF-β
負調節細胞免疫
趨化因子家族
腫瘤壞死因子（TNF）
TNF-α
又稱惡病質素
引起惡病質的主要細胞因子
刺激標靶細胞產生
IL-1、IL-6
可激活NK細胞
偵測
具有細胞毒活性
可用細胞毒活性測定法
TNF-β
由T細胞
Th1細胞產生
集落刺激因子（CSF）
可活化NK細胞功能的因子
IL-2、IFN-r、TNF-α
細胞黏附因子（CAM）
接到細胞間或細胞與細胞外基質間相互結合與黏附作用的
小分子多肽或糖蛋白
發揮作用的形式
以受體配體的結合
作用
參與免疫反應、發炎發生、凝血、創傷癒合和腫瘤轉移等
分子基礎
分類
鈣離子依賴性家族/黏鈣蛋白家族
整合素家族
免疫球蛋白超家族
黏蛋白樣家族
選擇素家族
不包括發炎因子家族
主要測定方法
ELISA法
特點
表現
多效性
重疊性
結抗效應
綜效
需與標靶細胞上的高親和力受體特異結合後
才發揮生物效應
和胰島素一樣
具有極強的生物效應
只需要微量的細胞因子
可以透過旁分泌、自分泌或內分泌的方式發揮作用
與荷爾蒙一樣
臨床作用
身體免疫狀態及細胞免疫功能的評估
最常用
特定疾病的輔助診斷
特定的
只是輔助
疾病治療效果的檢測與指導用藥
疾病的預防
疾病的治療
現在很多細胞激素已經做成藥了
其他
關於T細胞產生的細胞因子
可影響B細胞產生抗體的類別
抗原抗體反應
原理
抗原決定簇（表位）和抗體超變異區間的結構互補性與親和性
抗原結合力
非共價結合
不形成共價鍵
靜電引力
范德華力
最弱
氫鍵結合力
疏水作用力
最強
因為要把抗原抗體水化膜的排開，好暴露結合位點
所以是最強的
親和性
抗體分子上一個抗原結合點與一個響應抗原表位之間的結合強度
取決於
空間構型互補的程度
反映的是
抗原抗體互補關係
表示
平衡常數K
K值越大，親和性越強
與抗原結合也越強
親和力
抗體分子上一個抗原結合位點與對應的抗原決定簇之間相適應而存在的結合強度
抗原抗體間固有的結合力
反映的是
抗原抗體間結合強度
特點
特異性
可逆性
比例性
階段性
特異性
抗原決定簇與抗體超變異區之間的互補性
交叉反應
兩種不同的抗原分子
具有部分相同或類似結構的抗原表位
可與彼此對應的抗血清發生交叉反應
外斐反應
變性桿菌與克立次體具有相同的抗原表位
用變性桿菌代替克立次體
診斷斑疹傷寒（克立次體病）
外邊下班，立刻回
外：外斐 邊：變形 班：斑疹 立刻：立克次體
可逆性
在一定條件下可發生解離
親和層析法
改變溶液的pH和離子強度促使抗原抗體複合體解離
從而純化抗原或抗體
解離後仍保持生物活性
比例性
生成結合物的量與反應物的濃度有關
最適比（等價點）
最迅速出現可見反應的抗原抗體的濃度比
等價帶
抗原抗體分子比例適當的範圍
最大沉澱反應也發生在
帶現象
抗原抗體過剩而無沉澱現象
前帶
抗體過量
後帶
抗原過量
前平後原
抗體比較平
階段性
第一階段
抗原與抗體特異性結合
快，不可見
幾秒鐘至幾分鐘
第二階段
凝集、沉澱、細胞溶解
反應慢、可見
數分鐘至數小時
影響因素
電解質
使抗原抗體失去一部分的電荷
易出現凝集或沉澱
0.85%氯化鈉
使免疫複合物的形成速度
由慢到快
SCN-、CLO4-、NO3-、SO4-、H2PO4-
最快的是
CL-
酸鹼度
抗原抗體反應必須在適當的pH環境中進行
最適pH6-9
因為人pH7.35-7.45
溫度
溫度升高
可加速分子運動
抗原抗體碰撞機會增多
反應加速
溫度：37℃
免疫原和抗血清的製備
免疫原的製備
免疫原
能誘導身體產生抗體或致敏淋巴球
發生特異性反應的物質
特性
免疫原性
發生免疫應答
誘導發生抗體或致敏淋巴細胞的能力
免疫反應性（抗原性）
特異性結合能力的特性
分類
完全抗原
有免疫反應性
有免疫原性
半抗原
有免疫反應性
無免疫原性
不產生免疫反應
不產生抗體或致敏淋巴細胞
多勝肽、類固醇激素、核苷、某種藥物（青黴素）
無免疫原性
只有與載體結合（牛血清白蛋白最常使用）
才具有免疫原性
胸腺依賴性抗原
I-工人-不能依賴
製備
新鮮或-40℃保存
顆粒性抗原
大的
細胞抗原、細菌抗原、寄生蟲抗原
靜脈注射免疫法
可溶性抗原
小分子
蛋白質、糖蛋白、脂蛋白、酵素、補體、細菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸
粗提
單一細胞的獲取
機械搗碎
酵素處理法
細胞破碎方法
反覆凍融法
超音波破碎法
自溶法
酵素處理法
界面活性劑處理法
萃取和純化
鹽析法
硫酸銨鹽析法
辛酸硫酸銨萃取法
硫酸鈉鹽析法
中性鹽（33-50%飽和的硫酸銨）
可以破壞水化膜
中和電荷
使蛋白質聚集沉澱
最經典
最粗糙
分離純化蛋白質技術
不影響活性
聚合物沉澱法（CIC）
循環免疫複合物檢測
PEG沉澱法
不能反映小分子循環免疫複合物狀況
測定抗原非特異性的免疫複合物
特點
簡便
特異性差
易受溫度影響
聚乙二醇（PEG）
分子量
6000
蛋白質分子量越大
被沉澱時所需的PEG濃度越低
3%-4%PEG
可沉澱免疫複合物
＞5%
選擇沉澱CIC的特性消失
8%-12%
可沉澱IgG
補體參與技術檢測CIC
方法
C1q固相法
抗體C3-CIC-ELISA法
不能檢測IgA類抗體形成的循環免疫複合物
因為IgA不能結合補體
醛化紅血球
特點
可耐60℃加熱
可反覆凍融不易破碎
血凝反應效果較新鮮紅血球強
保存時間長
可以同時純化多種病毒
對病毒適用性強
免疫佐劑
幫助產生免疫應答的
先於抗原或與抗原同時注射體內
可非特異
增強免疫應答
改變免疫反應類型
種類
具有免疫原性
細胞激素、脂多醣、百日咳桿菌、卡介苗
細胞和細菌
無免疫原性
氫氧化鋁、液體石蠟、羊毛脂、明礬
免疫動物的佐劑
弗氏佐劑
弗氏完全佐劑
液體石蠟、羊毛脂、卡介苗
多了一個卡介苗
弗氏不完全佐劑
液體石蠟、羊毛脂
作用機制
改變抗原的物理性狀
增強免疫原性
延緩抗原降解與排除
有效刺激免疫系統
刺激單核-吞噬細胞系統
增強其處理和提呈抗原的能力
刺激淋巴球的增生和分化
提高身體免疫反應抗體滴度
改變抗體類型
多產生IgG
誘發遲髮型超敏反應
四型
不能改變抗原特異性
改了特異性就不是這個疫苗了
抗血清的製備（抗體的製備）
抗血清：含有抗體的血清
體內多個B細胞活化並產生針對某一抗原的抗體
多克隆抗體
每一個B細胞就會產生一個抗體
多個B細胞就是多克隆抗體
類型
R型
家兔等小型動物
親和力強，不易解離
適合範圍寬
用於診斷試劑
H型
馬等大動物
親和力弱，易解離
適合範圍較窄
用於免疫治療
破傷風疫苗
選擇
程式
時間
第1次與第2次
10-20天
第3次及以後
7-10天
免疫後採血
5-7天
5.7.10.20
採血部位
頸動脈採血
大中型動物
摘除眼球或斷尾
小鼠
抗血清的純化
除去雜抗體的吸附物
不含特異性抗原的抗原液
親和層析法
特異性親和性（專一性）
純化抗體、酵素和受體蛋白
最好、最有效
如提取高純度特異性IgG
親和結合 夠專一
凝膠過濾法
依照蛋白質分子量大小進行分離
大分子先透過
凝膠過孔 看大小
鹽析法
最經典、粗糙
不影響蛋白質活性
辛酸提取法
鹽析粗提 很經典
離子交換層析法
按照蛋白質所帶電荷不同
離子帶電不同
親和層析法
流程
抗血清通過層析管柱時
固相載體對分離物質的特異親和性
IgG被層析柱吸附
再改變流動相使目標物質的特異性吸附消失
IgG從層析管柱上解離
達到純化的目的
凝膠過濾法
凝膠層析/分子篩過濾
依蛋白質分子量大小
大的蛋白質
直接通過凝膠之間的縫隙
首先被洗脫下來
小的蛋白
會進入凝膠內部
後被洗脫
鹽析法
硫酸銨鹽析法
辛酸硫酸銨萃取法
硫酸鈉鹽析法
中性鹽（33-50%飽和的硫酸銨）
可以破壞水化膜
中和電荷
使蛋白質聚集沉澱
最經典
最粗糙
分離純化蛋白質技術
不影響活性
離子交換層析法
所帶電荷不同
帶有正電荷的
陰離子交換樹脂
因為想交換出來的是陰離子
帶有負電荷的
陽離子交換樹脂
因為想交換出來的是陽離子
抗血清的鑑定與保存
鑑定
抗體特異性
雙向免疫擴散法
抗體效價的測定
棋盤滴定（方陣滴定法）
雙向免疫擴散
最適工作濃度
判斷標準
抗原抗體
強陽性
最高稀釋度
最低濃度
儲存
短期保存
2-8℃
保存5年
常用方法
避免反覆凍融
冷凍保存
保存5-10年
真空乾燥
單株抗體
雜交瘤技術的基本原理
做單株抗體的
保護劑
二甲亞砜
單株抗體
單一B細胞分離出來
增殖後形成的一個克隆群落
單一表位
結構相同
功能均一的抗體
將融合細胞稀釋
每個培養孔
實際為
0-數個細胞
理論為
1個細胞
雜交瘤細胞產生的針對抗原分子上
某一單一抗原決定簇
的抗體
特異性
取決於
克隆細胞的篩選
陽性雜交瘤細胞的克隆化培養
有限稀釋法
最常用
顯微鏡操作法
直覺可靠
操作時間長、容易污染
螢光活化細胞分選儀
效率高、貴
軟瓊脂平板法
難以掌握
基本原理
脾臟細胞
致敏B細胞
抗體分泌功能
骨髓瘤細胞
非分泌型
不產生免疫球蛋白
可無限分裂，具有永生性
防止返租
8-氮鳥嘌呤
能選育出缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉化酶（HGPRT）的骨髓瘤細胞株的藥物
儲存
-196℃液態氮
細胞融合劑
聚乙二醇（PEG）
HAT培養基
次黃嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T）
氨基蝶呤（A）
阻斷細胞合成DNA主要途徑的葉酸拮抗物質
未融合的細胞死亡
雜交瘤細胞存活
種類
B淋巴球雜交瘤技術
製備單株抗體
T淋巴球雜交瘤技術
製備多種淋巴因子
製備
體內誘生法
取BALB/c小鼠
腹腔注射0.5ml液體石蠟後降植烷
誘導劑
誘導產生腹水
1週後
腹腔內接種雜交瘤細胞
在小鼠腹腔內增殖
產生和分泌單株抗體
接種10-14天后
抽取腹水
腹腔細胞
飼養細胞
獲得大量單株抗體
特性
高度特異性
只和相應的一個抗原決定簇結合
只針對一個表位
高度的均一性
可重複性
弱凝集反應
不沉澱
沉澱了以後就沒有辦法做免疫比濁法了
對環境高度敏感性
純化方法
鹽析法
辛酸提取法
凝膠過濾法
離子交換層析法
親和層析法
最有效
與抗血清的純化一樣
儲存
真空乾燥
基因工程
原理
DNA重組及蛋白工程技術
對編碼抗體基因依不同需求進行改造與組裝
導入適當的受體細胞
重新表達的抗體
優點
降低甚至消除人體對抗體的排斥反應
人源化抗體
保留親代抗體的親和力和特異性
減少抗體的異源性
有利於應用在人體
種類
嵌合抗體
功能性可變區基因 人類Ig核定去基因
鼠-人類嵌合抗體
特點
減少異源性
保留親代抗體的特異性和親和力
減少排斥
改形抗體
人類抗體可變區中互補決定簇（CDR）（超變異區）
改成鼠源序列
特點
具有鼠源性單抗的特異性
保持抗體親和力
人源抗體
完全人源抗體
治療抗體的最理想的形式
雙特異性抗體/雙功能抗體
兩個抗原結合位點具有不同的特異性
結合兩種不同的抗原分子
組合抗體庫技術
輕、重鏈可變區
隨機組合
產生新的輕重鏈配對法技術
凝集反應
概述
顆粒性抗原
細菌、紅血球
或表面覆蓋可溶性抗原或抗體的
顆粒型物質
可溶性抗原必須覆蓋在顆粒物質上
要不看不見
與對應的抗體或抗原結合
肉眼可見的凝塊
分類
直接凝集反應
顆粒型抗原
間接凝集反應
可溶性抗原
需要有載體幫助
特點
定性
半定量
倍比稀釋後
以最高稀釋倍數作為效價或滴度
方便簡單
不需要特殊儀器
兩個階段
抗原抗體的特異性結合
出現可見的顆粒凝集
影響
促進凝集現象
增加電解質或蛋白質
增加試驗溶液的黏滯度
胱氨酸酶處理
神經氨酸酶處理
直接凝集反應
顆粒型抗原
凝集原
抗原（顆粒性的）
凝集素
抗體
方法
玻片法
已知抗體
測抗原
血型鑑定中，血是抗原，所以用的是已知抗體
既能檢測抗原又能檢測抗體
應用
菌種鑑定
既能測抗原
也能測抗體
血清學分型
ABO血型鑑定
試管法
半定量
已知抗原
測抗體
外斐試驗、交叉配血、肥達試驗
口訣：外交官肥的直流血
外斐試驗
用變形桿菌與克立次體的相同抗原表位
測斑疹傷寒
肥達試驗
傷寒菌凝集試驗
太肥了好傷心
測定抗體
嗜異性凝集試驗
EB病毒
出現IgM抗體
能非特異性的凝集綿羊紅血球和馬紅血球
成為嗜異性抗體
表面受體
C3d受體
診斷傳染性單核球增多症
間接凝集試驗
可溶性抗原或抗體
不能檢測
AFP抗原
正向間接凝集試驗
已知抗原
測抗體
凝集為陽性
正向，先有抗原所以是已知抗原
抗原致敏載體
反向間接凝集試驗
已知抗體
測抗原
凝集為陽性
抗體致敏載體
應用
乳膠妊娠診斷
口訣：正平反原
抗體比較平
區別：抗原或抗體致敏載體
正向間接抑制凝集試驗
反過來
已知抗體
測抗原
凝集為陰性
結果判讀也是反過來
但已知抗體不致敏載體
多一個致敏的試劑2
流程
應用
炭疽病的Ascoli試驗
反向間接抑制凝集試驗
反過來
已知抗原
測抗體
凝集為陰性
結果判讀也是反過來
但已知抗原不致敏載體
多一個致敏的試劑2
協同凝集試驗
金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）為載體
非特異性結合IgG的Fc段（致敏的顆粒載體）
測抗原（未知）
用於可溶性抗原
細菌病毒的直接檢測
間接血凝試驗
載體
紅血球
常用
綿羊、家兔、雞
O型人類紅血球
因為O型表面沒有抗原
將抗原或抗體包覆於紅血球
形成致敏載體
單純的紅血球不是致敏載體
看紅血球是否被動的凝集在一起
結果
陽性
凝集
在孔底周圍
陰性
沉澱孔底
呈一個小點
像梅毒的TPPA試驗
膠乳凝集試驗
間接凝集試驗
膠乳顆粒
可吸附蛋白質
原理
吸附抗原
檢測抗體
抗原
變性IgG
類風濕因子（RF）
又稱rheumatoid factor
溶血素“O”
抗溶血素“O”（ASO）
所用載體
聚苯乙烯膠乳
直徑
0.8um
特點
試管法
玻片法
結合牢固性
差
靈敏度低於凝血試驗
明膠凝集試驗
間接凝集試驗
抗原吸附在粉紅色明膠上
檢測抗體
可測病毒
抗球蛋白試驗（Coombs試驗）
Coombs試驗
檢測自體免疫溶血
檢測紅血球不完全抗體的方法
抗體分類
完全抗體
IgM
因為是五聚體
可使紅血球黏連後交聯在一起
肉眼可見
不完全抗體
特點
可以與抗原結合（致敏）
不能出現可見凝集反應
IgG類抗體的某一片段
免疫抗體多為不完全抗體
類型
直接抗人類球蛋白試驗
測定表面結合的
對新生兒Rh溶血病有確診價值
因為這是檢測細胞是否致敏的
間接抗人類球蛋白試驗
測定遊離的
母體Rh（D）抗體（抗D抗體）的檢測
應用
配血試驗
抗D抗體
診斷新生兒溶血性貧血性疾病
細菌的不完全抗體的檢測
冷凝集試驗
冷凝集素症候群
檢測自體免疫溶血
IgM/巨球蛋白/冷凝集素引起的
分為
單株型
混合型
流程
較低的溫度下
抗體與自身紅血球凝集
手足紫紺症狀
溫度升到20-25℃
補體激活，發生溶血
溫度上升37℃
完全可逆分離
症狀消失
冷凝集試驗
體外
最適溫度0-4℃
37℃解離
結果判斷
陰性
冷凝集素效價＜1：32
陽性
冷凝集素效價＞1：64
診斷
原發性非典型性肺炎
沉澱反應
循環免疫複合物
最佳沉澱溫度
4℃
液體內的沉澱反應
免疫濁度測定
定義
緩衝液
磷酸鹽溶液
增濁劑
聚乙二醇（PEG）
可迅速形成免疫複合物（IC）微粒
在抗體稍微過量且固定的情況下
IC與待測抗原量呈正比
原理
光學測量儀器與自動分析系統結合
免疫濁度分類
免疫透射比濁法
透射光
沒有打到複合物（IC）的光
打到複合物（IC）的光都被吸收了
吸光度值（光線吸收的量）與IC量
正相關
IC越多，吸光度越高
免疫散射比濁法
散射光
打到複合物（IC）後發生折射的光
當顆粒直徑遠小於入射光波長時
散射光分佈比較均勻
成為Rayleigh散射
檢測散射光強度
正相關
IC越多，散射光越強
分類
終點散射比濁法
抗原抗體達到平衡後
測定複合物的量
速率散射比濁法
免疫球蛋白測定
最靈敏
最宜採用的方法
用於酵素活性測定
較準確
動力學測定方法
應用
出現第二峰值訊號
第一峰值訊號是由全部待測抗原產生
不出現第二峰值訊號
被測抗原量過高
前提
抗體過量
抗體過量檢測系統
為了確保抗體過量而出現的檢測系統
防止鉤狀效應
防止抗原過量（後帶現象）
對抗原過量進行閾值限定
影響因素
抗體的質量
特異性強、效價高、親和力強
使用R型抗體
檢測試劑的
臨床應用
檢測Ig含量
最常用的方法
檢測血清載脂蛋白
最常用的方法
檢測免疫球蛋白
IgG、IgA、IgM
含量高的
檢測免疫球蛋白亞類
補體C3、C4
尿微量蛋白
治療性藥物濃度
凝膠內沉澱試驗
單向瓊脂擴散試驗
可用手法
只能測抗原
原理
將定量的抗體混入瓊脂凝膠
瓊脂板
在膠板上打孔
孔內註入血清（抗原）
平板法
0.9%瓊脂凝膠內
37℃，自由擴算
環狀擴散
試管f法
0.7%瓊脂糖溶液
50℃擴散
形成可見的沉澱環
正相關
抗原含量越高
沉澱環越大
必須製作標準曲線
同時加入5-7個不同濃度的抗原標準品
測定沉澱環直徑
橫座標
抗原標準品濃度
縱座標
沉澱環直徑
應用單株抗體測量多態性抗原
測定值
偏低
單多低
應用多克隆抗體測量M蛋白
測定值
偏高
多M高
方法
試管法
平板法
計算方法
Mancini曲線
適用大分子抗原及長時間擴散（＞48小時）
沉澱環直徑的平方d2與抗原濃度c呈線性關係
c/d2=k
k：常數
Fahey曲線
適用小分子抗原和較短時間擴散
logc/d=k
c：抗原濃度
d：沉澱環直徑
k：常數
臨床意義
基層醫院使用
測定IgG、IgA、IgM和補體C3、C4含量
用多克隆抗體測定M蛋白時
沉澱圈擴大
方法學評價
敏感度不高
檢測時間
48-72小時
2-3天
必須同時製作標準曲線
用於定量測定
雙向瓊脂擴散試驗
形式
試管法
先在試管中加入含有抗體的瓊脂
凝固後在中間加一層普通瓊脂
冷卻後再將抗原溶液加到上層
放置後抗原抗體向中間瓊脂層自由擴散
平板法
兩個孔
一個抗原
Ag
一個抗體
Ab
結果判斷
靠近抗原孔
抗體含量多
靠近抗體孔
抗原含量多
遠離誰，誰多
出現弧形
因為分子量小的
擴散快
由於慢著擴散圈小，局部濃度大
沉澱線會彎向分子量大的一方
頭頂誰，誰小
抗體效價測定
棋盤滴定（方形滴定法）
屬於雙相免疫擴散試驗
目的
選擇最適工作濃度
呈強陽性的最高稀釋度
呈強陽性的最低濃度
免疫電泳技術
原理
直流電場
電泳分析和凝膠擴散（沉澱反應）的結合產物
最常用的凝膠
瓊脂糖
濃度
0.8%-1.0%
通常蛋白質分子在凝膠中進行電泳與自由電泳的幾乎相同
因為凝膠中緩衝液的比例
99%
原理
抗原、抗體都帶負電
因為抗原帶負電多
放在陰極
向陽極泳動
因為抗體帶負電少
放在陽極
在電滲力的作用下
電滲力：水是從陽極向陰極泳動的
向陰極泳動
對流免疫電泳中
IgG1和IgG2
由於電滲
向陰極移動
IgG3和IgG4
由於帶負電多
向陽性移動
分類
對流免疫電泳（CIEP）
雙相免疫擴散與電泳結合
抗原放陰極
抗體放陽極
IgG抗體
由於電滲作用
在抗原抗體最適比處形成乳白色沉澱線
現象稱為反向負極倒退
影響
電滲力
抗體電泳力低於電滲力
所以向陰極泳動
pH
分子帶電荷的多少
取決於緩衝液pH值
緩衝液pH值離等電點越遠
帶電越多
泳動越快
等電點
蛋白質解離成正電荷和負電荷相等時溶液的PH值
火箭免疫電泳（RIE）
測定範圍
ug/ml以上
單相免疫擴散與電泳結合
峰的高低與抗原量呈正比
峰頂部呈不清晰的雲霧狀
電泳未到終點
如結合放射自顯影技術
靈敏度提高
1000倍
免疫電泳（IEP）
雙相免疫擴散與區帶電泳結合
流程
先用區帶技術
測出不用的區帶
電泳停止後
再向平行抗體槽內，放入血清（抗體）
只打一個孔，放血清
看弧形沉澱線
結果
可測定
M蛋白
臨床意義
定性試驗
多發性骨髓瘤、巨球蛋白血症的血清蛋白分析
M蛋白
γ和β之間
抗原組分鑑定
單株丙種抗體鑑定
可以大致反應免疫球蛋白型
只能大致反映
不能精確
IgG
α至慢γ之間
IgA
β和γ1
IgM
β2或γ
IgD
β或γ
IgE
β至慢γ
免疫固定電泳（IFE）
第一個報道的人
Alfonso
免疫化學方法（抗原抗體結合反應）與區帶電泳結合
原理
先用區帶技術
測出不同的區帶
再覆蓋k和λ輕鏈的抗體（抗κ和λ輕鏈）或重鏈抗血清（抗重鏈的抗體）
形成複合物沉澱
經過漂洗、染色
呈現著色區帶
臨床意義
M蛋白
最常用的方法
單株抗體
定性和分型（輕鍊和重鏈的類型）鑑定
首選方法
鑑定免疫球蛋白輕鍊及尿液中本週蛋白的檢測及κ、λ分型
結果圖
G、A、M、κ和λ鏈
SP為全血清蛋白
聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）
原理
區帶電泳
凝膠為網狀結構
具有分子篩效應
分子量越少
移動越快
可以分離出數個條帶
缺點
分子量相近的蛋白質不能分離
流程
分離的數條帶
分離效果肉眼不可見
只有在染色後才顯出電泳區帶
凝膠上層加濃縮膠提高分離效果
把蛋白壓實促進泳動
分離血清蛋白質可以得到
20種以上的組分
等電聚焦電泳
原理
特殊的緩衝液在凝膠中製造一個pH梯度
常用凝膠
聚丙烯醯胺凝膠
與SDS的一樣
特點
分離分子量相近
等電點不同的蛋白
放射免疫分析
放射免疫技術
常用放射性核種
125 I（碘125）
125 I（碘125）標記法
直接標記法
用於勝肽、蛋白質和酵素的碘化標記
方法
氯胺T（ch-T）法
乳過氧化物酶標記法
間接標記法
適用於
缺乏碘標記基的小分子化合物
方法
連接標記法（Bolton-Hunter法）
要求
放射化學純度
＞95%
免疫活性要求
＞80%
核素標記物的洗脫液加入的穩定劑
等量1%的蛋白
比放射性
單位化學量標記物中所含的放射性強度
放射化學純度
測定方法
利用三氯醋酸將待測樣品中所有蛋白質沉澱
胰島素標準品
使125I胰島素與抗血清的最大結合量下降50%
用量X
胰島素原用量Y
交叉反應速率=X/Y
滴度
將一株抗血清做成系列稀釋後
再與標記抗原反應
方法學
靈敏度高
樣本和試劑
用量少
特異性強
重複性好
操作簡單
易於標準化
缺點
有放射性污染
臨床應用
荷爾蒙（如hCG、胰島素等）、藥物（地高辛、嗎啡、巴比妥）、腫瘤標記（AFP、CEA）、微量蛋白質
都是微量的物質
放射免疫分析（RIA）
RIA
原理
競爭抑制反應
有競爭
所以速度就變慢
只能測
抗原
單位
cpm或cps
呈反比
待測抗原越多
放射性物質越少
流程
標記抗原和已知抗體
都是限量的
將標記抗原抗體複合物（B）和未結合標記抗原（F）分離
方法
第二抗體沉澱法
聚乙二醇（PEG）沉澱法
PEG能非特異的沉澱抗原抗體複合物等大分子蛋白質
不沉澱小分子抗原
缺點
非特異性沉澱較多
溫度高於30℃，沉澱物易復溶
PR試劑法
保留了第二個抗體與PEG的優點
節約用量、分離迅速、簡單
活性碳吸附法
免疫放射分析（IRMA）
IRMA
原理
非競爭結合反應
可以測抗原
也可以測抗體
單位點IRMA
反應體系
標記抗體
待測抗原或抗體
包被於固相的抗原
差別
原理
先用過量的標記抗體與待測抗原反應
形成複合物
在上清液中
測上清液的放射量
再用固相抗原結合未結合的標記抗體
並將其分離
可以測抗原
也可以測抗體
雙位點IRMA
雙抗體夾心法
反應體系
標記抗體
待測抗原
包被於固相的抗體
差別
原理
雙抗體夾心法
需要洗掉剩餘的標記抗體
測固相的放射性
只能測抗原
對比
應用
Raji細胞
表面有大量的C3b、C1q和C3d受體
沒有Smig
利用這些受體與結合補體的循環免疫複合物結合
再加入放射性核種標記的抗人IgG
可檢測循環免疫複合物
螢光免疫技術
概述
最早建立的標記技術
不能用於定量測定
概念
螢光素
直接參與發光的標記物
螢光
基態分子（穩定、能量低）
吸收一定波長光後
激發單重態（能量變高）
再迅速返回基態時
發射出比激發光廠的光
螢光效率
螢光素將吸收的光能轉換成螢光的百分比
螢光的淬滅
在某些理化因素下，螢光可減弱甚至消失
紫外線照射
高溫
利用螢光淬滅劑消除非特異性的螢光
亞甲基藍
依文思藍
鹼性品紅
碘溶液
螢光物質
螢光色素
異硫氰酸螢光素（FITC）
黃綠色
分子量
389.4kDa
最大吸收光（激發波長）
490-495nm
最大發射光
520-530nm
應用最廣泛
優點
人眼對黃綠色敏感
通常切片標本中的綠色螢光少於紅色螢光
四乙基羅丹明（RB200）
橘紅色
最大吸收光（激發波長）
570nm
最大發射光
595-600nm
不溶於水
溶於乙醇和丙酮
可長期保存
四甲基異硫氰酸羅丹明
橘紅色
最大吸收光（激發波長）
550nm
最大發射光
620nm
可與FITC雙重標記
藻紅蛋白（R-RE）/（PE）
橘色
最大吸收（激發波長）
565nm
488nm
最大發射光
620nm
575nm
不溶於水
溶於乙醇和丙酮
可與FITC雙重標記
廣泛應用
共用488nm激發光
其他螢光物質
鑭系螯合物
銪（Eu3 ）
應用最廣泛
適用於
時間分辨螢光免疫
酶作用後產生螢光的
本身無螢光效應
在酵素作用下可產生螢光
螢光抗體的製備
抗體的螢光素標記
方法
攪拌法
透析法
標記抗體的純化
方法
透析法
層析分離法
抗體的鑑定
抗體效價
雙相免疫擴散試驗
抗原含量為1g/L時
效價＞1：16
影響因素
溫度
溫度越低
效率越高、強度越高
pH
根據螢光色素情況而定
如FITC在酸性中降低
鑭系螯合物在酸性中增強
濃度
濃度過高
自熄滅現象
因為太高，應該分子碰撞劇烈
失去能量
溶劑
乙醇溶液中的螢光雜質
需處理
增強劑
加速染色速度
對著色效果沒有影響
螢光顯微鏡
光源
激發光源
高壓汞燈
氙燈
鹵素燈
濾光片
隔熱濾光片
燈室的聚光燈前面
阻斷紅外線的通過而隔熱
激發濾光片
光源與物鏡之間
選擇性地透過紫外線可見波長的光域
分類
紫外光濾片（UG）
275-400nm的紫外光透過
最大透光度
365nm
藍紫外光濾片（BG）
325-500nm藍紫外光透過
最大透光度
410nm
吸收濾光片
物鏡與目鏡之間
阻斷激發光而使發射的螢光透過
暗的背景下
呈現螢光
易於觀察
眼睛免受強激發光刺激
透光範圍
410-650nm
分類
OG
橙黃色
GG
淡綠黃色
其他
觀察FITC
激發濾光片
BG12
吸收濾光片
OG4或GG9
觀察RB200
激發濾光片
BG12
吸收濾光片
OG5
螢光抗體技術
又名
螢光免疫組織化學技術
需要組織或細胞反應
螢光顯微鏡技術
需要在顯微鏡下看
流程
標記抗體
只能標記抗體
與切片中的組織或細胞抗原反應
洗分離後
在顯微鏡下觀察複合物及部位
臨床意義
對組織細胞抗原進行定性或定位
定位
哪部分發光（核、胞質、包膜等）
可以做抗原定位的試驗
螢光抗體技術
酵素組織免疫化學技術
標本的製作
必須是有細胞的
血清、血漿不行
來源
組織切片、組織印片、細胞抹片、微生物塗片、脫落細胞抹片、體液濃縮檢體（胸水、腹水的沉澱物）
分型
直接法
直接與抗原反應
標記在抗體上
只能查抗原
特點
特異性最高
非特異性染色最低的方法
直接特異高
敏感度差
非特異性螢光染色因子少
間接法
以已知抗原測未知抗體
第一抗體
人類Ig
第二抗體
螢火或酵素標記的羊/兔Ig
ELISA測抗體也是這樣
有二抗
標記在二抗體上
用螢光素標記的二抗與第一抗體結合
可以測抗原
也可以測抗體
與直接法相比的優點
檢測不同的抗原
只需製備一種螢光抗體
因為螢光素標記在二抗體上
偵測
抗核抗體
最有效
雙標記法
用FITC和羅丹明分別標記不同的抗體
對同一標本進行染色
臨床應用
不能取代其他常規檢測
自體抗體檢測
血清中的抗核抗體（ANA）
病原體檢測
鑑定病原體
血清中特異性抗體水平
免疫病理檢測
表面抗原和受體檢測
淋巴球及亞群的鑑定
流式細胞儀
螢光免疫分析類型
時間分辨螢光免疫測定（TRFIA）
原理
用鑭系元素
標記抗原或抗體
用時間分辨技術測定
時間分辨
非特異性螢光
螢光壽命較短
鑭系螯合物
螢光壽命較長
在非特異性螢光衰變後
再檢測螢光訊號
Stokes位移
激發光譜和發射光譜的波長差
如果Stokes位移小
激發光譜和發射光譜常有重疊
互相干擾
鑭系螯合物位移較大
容易消除激發光的散射幹擾
訊號強度
在酸性增強液中可使螢光增強
臨床應用
與放射免疫相似
檢測微量物質
多一個檢測蛋白質
螢光偏振免疫檢測（FPIA）
原理
利用抗原抗體競爭反應
標記抗原與複合物的螢光偏振程度的差異
應用
血液或尿液中
小分子的測定
藥物濃度
首先方法
螢光酵素免疫測定
原理
利用抗原抗體的反應，借助酵素反應螢光底物
前面為雙抗體夾心法
再加入底物
流程
底物4-MUP沒有螢光
在ALP的刺激下發出螢光
流式細胞分析儀（FCM）
概述
利用綜合光學、流體力學、電子電腦技術、螢光素產生螢光的特點
對每個細胞進行多參數定量測定和分選的技術
常用光源
射出去的光
螢光素吸收的光
雷射
結構
液流系統
光學與訊號轉換測試系統
訊號處理及放大的電腦系統
原理
標示了特異性螢光燃料的單細胞懸浮液與鞘液
進入流動室
形成鞘液包裹細胞懸浮液的單細胞液柱
液柱與水平方向的雷射光束（激發光源）
垂直相交
數據
前向散射光（FS）
顆粒的大小
側向散射光（SS）
顆粒內部的複雜程度
表面的光滑程度
與五分類是一樣的
螢光（FL）
顆粒被染上螢光部分數量的多少
PI染色
細胞週期
常用的DNA標記物
PI（碘化丙錠）
常用激發波長
488nm
常用發射波長
620nm
分選的收穫率
收穫率與純度之間有對應關係
分選細胞純度高
收穫率相對低
鞘液
作用
包裹在樣本流的周圍
使樣本流處於噴嘴中心位置
保證準確性
防止細胞靠近噴孔壁而堵孔
應用
T細胞亞群
檢測敏感度最高
B細胞經抗Ig螢光抗體染色
表面呈現螢光隨時間變化規律
環狀、斑點狀、帽狀、消失
酵素免疫技術
酵素免疫技術
利用酵素高效、專一的催化活性
酵素結合物
酵素標記抗原或抗體
催化底物的生物放大作用
少量的酵素可以反映大量的物質
標記技術
對抗原或抗體
定位、定性、定量
特點
酵素和底物
酶的要求
活性強
純度高
易與抗原抗體偶聯
標記後活性穩定
不影響抗原抗體的免疫反應性
專一性
受檢樣本中不存在與標記酵素相同的內源性酵素或抑制物
酵素催化產生的產物
易判斷或測量
常用的酶
辣根過氧化物酶（HRP）
底物
四甲基聯苯胺（TMB）
最常用的
藍色
穩定性好
不需要避光、無致突變作用
缺點
水溶性差
鄰苯二胺（OPD）
最敏感的色原底物之一
橙黃色
不穩定
以片劑或粉末供應
臨用時復溶
概念
源自於蔬菜
一種糖蛋白
含糖量18%
組成
無色的醣蛋白
主酵素
與酵素活性無關
最大吸收峰
275nm
亞鐵血紅色
輔酶
酵素的活性基團
最大吸收峰
403nm
最常用的
鹼性磷酸酶（AP/ALP）
底物
對-硝基苯磷酸酯（p-NPP）
顏色
黃色
概念
從大腸桿菌或小牛腸黏膜萃取
分類
菌源性
腸黏膜
活性高
β-半乳糖苷酶（β-Gal）
底物
4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU）
特點
敏感性較HRP高
30-50倍
但測量時需要
螢光計
概念
大腸桿菌萃取
人血中缺乏此酶
測定時不受內源性酵素的干擾
酵素標記物
標記方法
戊二醛交聯法
改良過碘酸鈉法
HRP（辣根過氧化物酶）標記抗原抗體
最常用的方法
固相載體
ELISA最常用的固相載體
聚苯乙烯
包被
將抗原或抗體結合在固相載體上的過程
緩衝液
PH9.6
碳酸鹽緩衝液
封閉
1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清
再包被一次
消除非特異性顯色
防止血清中雜蛋白的進入，幹擾結果
分類
酵素免疫組織化學技術
病理中用的
組織切片或其他檢體中抗原的定位
只有抗原
只是定位
酵素免疫技術（EIA）
液體中抗原或抗體的定性或定量
均相酵素免疫分析
酵素放大免疫測定技術（EMIT）
克隆酶供體免疫分析（CEDIA）
標記在抗原上的酵素沒有活性 只有特異結合後才有活性
異相酵素免疫分析
固相酵素免疫分析
液相酵素免疫分析
根據是否需要將結合和遊離的酵素標記分離區分
分離為異相
離婚要分離
均相酵素免疫測定
均相不分離
不需要載體的
酵素免疫測定
多數為競爭法
原理
結合後的酵素就失去了活性
測酶的活性
少了的就是結合的酶
優點
用於小分子抗原（荷爾蒙）或半抗原（藥物）的測量
異相酵素免疫測定
異相分離
原理
結合後的酵素依舊保持活性
只要需要洗板
就是異相
分類
液相酵素免疫測定
測定極微量的短勝肽激素
藥物等小分子半抗原
靈敏度
ng至pg
固相酵素免疫測定
利用固相支持物做載體
常用的
酵素連結免疫吸附試驗（ELISA）
酵素連結免疫吸附試驗（ELISA）
檢測抗原的方法
雙抗體夾心法（兩步驟法）
流程
固相抗體
先將特異性抗體與固相載體連接
抗原抗體反應
加入待測抗原
形成固相抗體-抗原複合物
第一次洗滌
酵素標記抗體
加入酶標抗體
形成固相抗體-抗原-酶標抗體複合物（在待測抗原的兩個不同表位上）
第二次洗滌
顯色
加入底物顯色
有色產物的量與待測抗原呈正比
適用於
最常用的方法
至少有兩個抗原決定簇的多價抗原
大分子抗原
如乙型 肝炎表面抗原、甲型胎兒蛋白、hCG
細胞外可溶性黏附分子
可溶性抗原
雙位點（一步法）
流程
將待測抗原和酵素標抗體
同時加入反應
兩種抗體互不干擾
經過一次洗滌後
加入底物顯色
缺點
待測抗原濃度過高時
鉤狀效應（後帶現象）
顯色降低
假陰性
可將標本稀釋後重新檢測
競爭法
呈反比
待測抗原量越高
有色產物越少
流程
固相抗體
先將特異性抗體與固相載體連接（限量）
抗原抗體反應
加入待測抗原、酵素標抗原（限量）
競爭結合特異性抗體
洗滌
顯色
加入底物顯色
適用於
只有單一抗原決定簇的小分子抗原
藥物、荷爾蒙等
檢測抗體的方法
間接法
丙型肝炎病毒抗體
流程
固相抗原
將抗原包被在固相載體上
抗原抗體反應
加入待測抗體
形成固相抗原-待測抗體複合物
第一次洗滌
酶標二抗
加入酵素標二抗（羊抗人IgG）
形成固相抗原-待測抗體-酵素標二抗複合物
第二次洗滌
一種標記物檢測多種被測物
酶標二抗可以檢測任何的抗原抗體複合物
顯色
呈正比
競爭法
乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）
呈反比
待測抗體量越高
有色產物越少
流程
固相抗原
將抗原包被在固相載體上
限量
抗原抗體反應
加入待測抗體、酵素標抗體（限量）
競爭結合特異性抗體
洗滌
顯色
加入底物顯色
影響因素
標本離心不充分
存在纖維蛋白
酶標會黏連在纖維蛋白上
造成洗不掉
顏色深
假陰性
溶血
因為溶血顏色深
假陰性
雙抗原夾心法
靈敏度和特異性
高於間接法
應用
乙型肝炎表面抗體的檢測
捕獲法
又稱反向間接法
流程
針對IgM的第二個抗體包被於固相載體
加入待測標本
IgM可被固相載體捕獲
加入特異性抗原
加入酵素標記特異性抗原的抗體
形成固相二抗-IgM-抗原-酵素標記抗體複合物
應用
IgM型抗體
應用
細胞外可溶性黏附因子
ELISA
主要測定方法
化學發光免疫分析技術
原理
將發光分析的高靈敏度和抗原抗體的高特異性結合
檢測微量抗原或抗體的標記免疫技術
與放射免疫相同
標記方法
碳二亞胺縮合法
縮合劑
碳化二亞胺
過碘酸鈉氧化法
標記糖蛋白穩定性好
不易脫落
重氮鹽偶聯法
簡易、成本低、重複性好
N-羥基琥珀醯亞胺活化法
發光
基態
吸收光
跳躍到激發態
再返回基態
釋放光子的過程
與螢光原理相同
化學發光劑
類型
直接化學發光免疫分析
使用吖啶酯
鹼性環境下
直接標記抗原（抗體）
發生抗原抗體反應
化學發光酵素免疫分析
以催化反應或能量傳遞參與發光的酵素標記物
使用辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶
標記抗原或抗體
發生抗原抗體反應
微粒子化學發光免疫分析
標記物
鹼性磷酸酶
電化學發光免疫分析
以能量傳遞參與氧化反應
三聯吡啶釕標記抗體（抗原）
三丙胺
電子供體（電子受氫體）
在電場中電極表面因電子轉移而發生特異性的化學發光反應
包括電化學和化學發光兩個過程
優點
與放射免疫分析相似
但無污染
靈敏度高，特異性強
ng甚至pg
線性範圍寬
標記物穩定
試劑有效期長、無毒害
自動化程度高
應用
荷爾蒙、腫瘤標記、藥物濃度、心肌標記、病毒抗體及其他微量生物活性
偵測
微量的
生物素-親和素放大技術
活化生物素
利用生物素的羧基
以化學修飾製作各種活性基團的衍生物
活化後
容易與各種抗原、抗體、酵素及核酸分子中的對應集團偶聯
生物素化標誌物
結構
I環
咪唑銅環
親和素：色胺酸
II環
噻吩環
結合抗體和其他大分子
生物素（B）
親和素（A）
高度親和力
結合迅速、專一、穩定
親和素
十字形
生物素
三角形
親和素有四個位點，可以結合4個生物素
所以有放大反應
標記不同類型的活化生物素
活化生物素
不能標記羧基
因為是利用他做的化學修飾
生物素-親和素系統（BAS）的應用
B：生物素、A：親和素、S：放大
親和素標記的方法
過碘酸鈉法
ABC法
原理
C：酵素的意思
生物素上標記酶
生物素結合親和素
生物素化抗體結合親和素
標記酵素和抗體的
都是生物素
親和素只用來與生物素結合
與ELISA偶聯起來
大大提高ELISA的靈敏度
酶標記在
生物素上
固相膜免疫測定
常用的固相膜
硝酸纖維素膜（NC）
膠體金
抗原抗體複合物上標記了金顆粒
顯微鏡下
黑褐色顆粒
肉眼
紅色或粉紅色斑點
hCG
偵測hCG
單株抗體膠體金試驗
靈敏度最高
排卵期hCG檢測時
為避免交叉反應
單株二點酵素免疫法
8-10週
達高峰
血清中的hCG略高於尿液中
唯一不隨胎盤重量增加而分泌增加的荷爾蒙
葡萄胎與正常妊娠鑑別
hCG濃縮定量試驗
分類
斑點金免疫滲濾試驗
在NC膜上
液體垂直往下流動
像肺衣的膠體金
斑點金免疫層析試驗
在NC膜上
液體水平流動
像妊娠試驗的試紙條
酵素連結免疫斑點試驗（ELISPOT）
可測B細胞
分泌特異性抗體
也可測抗體分泌量
可測T細胞
分泌細胞激素的T細胞
免疫印跡法（Western-blot/wb）
流程
三個階段
SDS-聚丙醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）
區帶電泳
電轉移
轉移電泳條件下
轉移到硝酸纖維素膜（NC膜）上
將蛋白印跡到固相膜上
肉眼仍不可見
酵素反應檢測
印蹟的蛋白（相當包被抗原的固相載體）
與特異性抗體、酵素標二抗反應
加入底物顯色
綜合SDS-PAGE和ELISA
臨床應用
愛滋病毒（HIV）
確診試驗
檢測抗體組分
出現gp41/gp120/gp160
中的兩條帶
死了打120不能治要溜了
gp120與CD4結合
破壞CD4 T細胞
CD4 /CD8
比值下降
抗萃取性抗原抗體測定（ENA抗體）
DNA印跡法（Southern blot）
檢測核酸的印跡方法
免疫組織化學技術
概述
免疫組織化學技術
用標記的特異性抗體
對抗原進行定位、定量、定性的試驗
只能測抗原
標本來源
活體組織
組織切片
各種體液、穿刺液（血清、血漿不行，因為沒有細胞）
塗片和印片
培養細胞
活細胞爬片
標本固定的目的
凝固蛋白
終止細胞內酵素的作用
防止自溶
保持細胞形態和結構
維持細胞的抗原性
防止細胞層脫落
去除妨礙抗體結合的類脂
抑制細菌的繁殖
防腐
免疫組化的過程
抗原的萃取和純化
待測抗原
免疫動物和細胞融合
製備特異性抗體
雜交瘤技術
抗體的純化
將標記物與抗體結合
形成標記抗體
標本的處理與製備
首要試劑
抗體
單株抗體
因為只能測組織一定是抗原，所以只能測抗原
關鍵步驟
免疫染色
免疫螢光組織化學技術
螢光素標記抗體
只能測抗原
特點
可同時檢測檢體中的多種抗原
與酵素免疫組織化學技術相比的優點
螢光顯微鏡觀察時
注意事項
染色後標本立即觀察
不宜長時間觀察一個視野
宜用無螢光鏡油
暗室內觀察
錯誤
37℃觀察最好
酵素免疫組織化學技術
用酵素標抗體（抗原）
抗體抗原都能測
分類
酵素標記抗體免疫組織化學技術
與酵素免疫技術一樣
非標記抗體免疫酵素組化染色-酵素橋法
酵素沒有標記在抗體上
抗酵素抗體作為第三抗體
有一個橋抗體作為第二抗體
形成待測抗原-特異性抗體-橋抗體-抗酵素抗體複合物
非標記抗體酵素組化染色-PAP法（過氧化物酶-抗過氧化物酶法）
第三抗體不同
第三抗體（抗酵素抗體）與酵素組成可溶性複合物（PAP複合物）
該複合物有2個抗酵素抗體和3個過氧化物酶組成
五角形結構
非常穩定
移植免疫
分類
自體移植
移植物來源於宿主自身
不產生排斥反應
同系移植
基因完全相同的個體間移植
同卵雙生
一般不發生排斥反應
同種異體移植
同種不同基因型個體之間的移植
引起排斥反應的標靶抗原
主要組織相容性抗原（MHA）
第六號染色體上的主要組織相容性複合體（MHC）的主要組織相容性抗原（MHA）
又稱人類白血球抗原（HLA）
人類MHC=HLA
分類
HLA I
HLA-A、HLA-B、HLA-C
所有有核細胞表面
淋巴球最多
神經細胞
沒有細胞核
HLA-C
對移植免疫過程沒有明顯作用
HLA II
HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP
分佈在專職APC細胞、活化的T細胞及胸腺上皮細胞
免疫球蛋白樣區
α2和β2功能區
抗原多肽結合區
α1和β1功能區
與CD4結合的區域
β2功能區
HLA-DR
免疫原性最強
對移植排斥最為重要
CDC方法檢測HLA-DR抗原
所使用的待測細胞
純化的B細胞
因為II類進在B細胞和巨噬細胞（專職APC）表面
未排除HLA-I類的干擾
用純化的B細胞
生物學分型法
PCR-RFLP
PCR-SSO
Ⅱ類HLA分型應用最廣泛的方法
PCR/SSP
原理
設計一套HLA等位基因的序列特異性引子（SSP）
對待測DNA進行PCR擴增
獲得
等位基因特異性的擴增產物
PCR-SSCP
SBT
最精確、直覺的方法
必須
待測細胞的DNA分離
應用座位、組或等位基因特異性引子進行的PCR擴增
擴增產物的純化與定序
測出的基因序列與基因庫的DNA已知序列比較
HLA分型細胞學
陰性分型法
標準細胞
表面只有一種LD抗原的純合子分型細胞
陽性分型法
標準細胞
預致敏淋巴球
MHC分子的結構與功能
MHC
染色體上編碼主要組織相容性抗原的一組緊密連鎖的基因群
MHC-I
腫瘤細胞只有表達MHC-I，才會被Tc細胞殺死
血小板僅表達MHC-1
MHC-II
提呈細胞（APC）重要的表面標誌
B細胞可以表現MHC I類和II類
被輔助性CD4 T細胞識別
功能區
同種異型抗原決定簇（HLA II類分子多態性部分）
抗原勝肽結合區
辨識CD4和CD8分子
Ig樣區
免疫球蛋白樣區：β2結構域
將HLA分子錨定在細胞膜上
跨膜區
與細胞內訊號傳遞
胞內區（胞漿區）
HLA-II
抗原多肽結合區
α1和β1功能區
免疫球蛋白樣區
α2和β2功能區
與CD4結合的區域
β2功能區
決定MHC多態性的因素
MHC基因是複等位基因
均為共顯性
識別途徑
直接識別途徑
供者APC
將供者移植抗原（MHC）
呈給受者T細胞
間接識別途徑
受者APC
將供者移植抗原（MHC）
呈給受者T細胞
T細胞對供者MHC的識別
被辨識分子
是經處理的同種異型MHC分子來源的勝肽
供受者之間只要有一個胺基酸不同
就能發生排斥反應
種類
宿主抗移植物反應（HVGR）
受體對供體的排斥反應
移植物抗宿主反應（GVHR）
供體對受體的排斥反應
宿主抗移植物反應（HVGR）
分類
超急性排斥反應
數分鐘至1-2天內
發生不可逆轉的體液排斥反應
迅速、強烈、不可逆轉
體液免疫應答
介導的主要物質
細胞毒抗體（細胞毒T細胞/殺手性T細胞/Tc細胞）
原因
ABO等血型不符、Rh血型不符、多次懷孕、反覆輸血或接受器官移植者
被移植器官灌流不暢或缺血時間過長
移植物保存與處理不當
急性排斥反應
數週至數月
最常見的類型
診斷
sIL-2R和血清肌酸酐值同時升高
3H-TdR4小時摻入法
3H-TdR4小時細胞轉化試驗
檢測受者致敏T細胞的方法
預報急性排斥反應危象較滿意的試驗
急性排斥反應與病毒感染的鑑別
臨床症狀出現前1-5天
CD4/CD8比值升高
＞1.2
提示急性排斥即將發生
鉅細胞病毒感染
CD4/CD8下降
＜1.08
感染的可能性大
慢性排斥反應
數月甚至數年
病程進展緩慢
移植物抗宿主反應（GVHR）
骨髓移植
不接受免疫抑制劑治療話
要看HLA-DR
在接受之前，需要進行大劑量的放射、化療把骨髓中的所有細胞殺死
表現出免疫無能
表現出這個了
只要求ABO血型相配了
進入受體體內的骨髓有大量的免疫細胞
可對受者器官、組織進行免疫應答
HLA血清學分型
微量補體依賴的細胞毒試驗（CDC）/微量淋巴球毒試驗
HLA-I和HLA-II分型方法
屬於補體依賴的細胞毒試驗
具有遺傳傾向
不能鑑別的
HLA-DP
需用細胞學HLA分型法鑑別
預致敏細胞細胞分型法鑑別
已知抗HLA的特異性標準分型血清
已知抗體
如定性為抗HLA-DR或DQ
用血小板吸附除HLA-I的抗體
與待測淋巴球結合
待測抗原
再加入補體
細胞學HLA分型法
可鑑別HLA-DP
所使用的標準細胞
陰性分型法
表面只有一種LD抗原的純合子分型細胞
陽性分型法
預致敏淋巴球
雙向混合淋巴試驗/混合淋巴球試驗
測定供者和受者HLA抗原是否相容
如果滲入量和轉化細胞最多
表示MLC強陽性
說明D抗原完全錯配
不能判定HLA型別
預防與治療
HLA交叉配對
淋巴球交叉配合試驗（淋巴球交叉毒性試驗）
淋巴球交叉毒性試驗
目的
受者血清中有無抗供者淋巴球的抗體
供者淋巴球
受者血清中的抗體
受者的細胞和經撕裂菌素C處理的供者細胞之間的單相混合淋巴細胞反應
與交叉配血
主側一樣
治療
異源性抗CD3抗體治療
最主要的併發症
血清病
腫瘤免疫
巨噬細胞
腫瘤病灶中浸潤的巨噬細胞
與腫瘤的擴散及轉移
負相關
抗腫瘤作用機制
透過ADCC途徑殺傷腫瘤細胞
腫瘤抗原
腫瘤發生、發展過程中新出現的或過度表現的
抗原物質
特異性分類
腫瘤特異性抗原（TSA）
腫瘤細胞特有的新抗原
只表達於腫瘤細胞
不存在與正常組織細胞
黑色素瘤相關排斥抗原
MARA
攝護腺特異性抗原
PSA
腫瘤相關性抗原
非腫瘤細胞所特有
正常組織與細胞也會表達
癌症時
含量明顯增高
甲型胎兒蛋白
AFP
抗腫瘤效應機制
細胞免疫
最主要的作用
T細胞、NK細胞、巨噬細胞
體液免疫機制
補體的溶細胞效應
抗體作用
抗體依賴的細胞介導的細胞毒效應（ADCC）
抗體的免疫調理吞噬作用
抗體封閉腫瘤細胞表面的某些受體
抗體與受體結合封閉腫瘤細胞的訊號傳導
抗體幹擾腫瘤細胞黏附作用
常見的腫瘤標記
胚胎抗原類
甲胎蛋白（AFP）
原發性肝癌
AFP＞300ug/L
升高
懷孕婦女
新生兒
急性肝炎
原發性肝癌
AFP與ALT動態曲線
肝癌與良性肝病（活動性肝炎）鑑別
動態曲線相隨者
良性肝病
要高都高
動態曲線分離者
AFP升高
ALT降低
考慮肝癌
癌胚抗原（CEA）
具有多種異構型
CEA-A、CEA-P、CEA-M等
含有複雜的抗原決定簇和多種異構型糖蛋白
吸煙者
輕度增高
腸道腫瘤
大腸癌、直腸癌、胰臟癌
醣鏈抗原類
CA153
乳癌
要我摸
乳房來摸
CA125
卵巢癌
要兒我
兒子要生，所以在卵巢
人類附睪蛋白4（HE4）
新型腫瘤標記物
卵巢癌
CA199
胃腸道腫瘤
要99
不能消化了，要99
胰臟癌
9橫過來像胰腺
胰臟癌、膽囊癌、結腸癌、胃癌
鱗狀細胞癌抗原（SCCA）
鱗癌
食道鱗狀癌
子宮頸癌
酵素和同工酶類
前列腺特異性抗原（PSA）
攝護腺癌
器官特異性腫瘤標記物
f-PSA和f-PSA/t-PSA比值
前列腺癌與良性前列腺疾病鑑別
t-PSA和f-PSA都升高
f-PSA/t-PSA比值
＜10%
前列腺癌可能性大
前列腺酸性磷酸酶（PAP）
攝護腺癌
神經元特異性烯醇化酶（NSE）
小細胞肺癌（燕麥細胞癌）
a-L-岩藻糖苷酶（AFU）
原發性肝癌
與AFP無相關性
互補作用
AFP陰性也可見AFU升高
荷爾蒙類
香草扁桃酸（VMA）
嗜鉻細胞瘤
人類絨毛膜促性腺激素
滋養層腫瘤及生殖細胞腫瘤
葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、絨毛膜癌
降鈣素
甲狀腺髓樣癌
促腎上腺皮質激素（ACTH）
小細胞肺癌（燕麥細胞癌）
蛋白質類
β2-微球蛋白（β2-MG）
惡性腫瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、腎臟疾病
因為β2-微球蛋白
存在所有有核細胞表面
鐵蛋白
惡性腫瘤、炎症
本週蛋白（BJP）
多發性骨髓瘤
可表達ABO血型抗原
胃癌細胞
不可能是
單醣
免疫缺陷疾病
原發性免疫缺陷症
原發性B細胞缺陷
X性連鎖無丙種球蛋白血症
丙種球蛋白=免疫球蛋白
Bruton症候群
扁桃體缺如
常用的臨床表現
概念
B細胞先天性發育不全
B細胞減少或缺陷
抗體降低或缺陷
骨髓中很難找到
漿細胞
T細胞數量正常
患童出生6個月後（學齡前兒童）發生反覆感染
6個月內有目前的IgG和分泌型IgA抗性
選擇性IgA缺陷症
最常見的體液免疫缺陷症
血清IgA和sIgA均減少
常伴有消化道和呼吸道反覆感染
黏膜裡的
丙種球蛋白替代治療
無效
普通易變型免疫缺陷症
B細胞免疫缺陷症
由於B細胞功能缺陷和訊號傳導異常
體液免疫缺陷症
Bruton症候群
原發性T細胞缺陷
先天性胸腺發育不全症候群
細胞免疫缺陷症
DiGeorge症候群
常伴隨副甲狀腺功能不全
易感染病毒和真菌
因為細胞和體液免疫都不行
細胞免疫功能缺陷
體液免疫功能缺陷
因為需要CD4 T細胞（Th細胞）
胚胎胸腺移植有效
原發性吞噬細胞缺陷疾病
慢性肉芽腫
吞噬細胞的數量、移動或黏附功能、殺菌活性等異常
化膿性細菌或真菌反覆感染
G-6-PD缺乏症可引起
由於G-6-PD缺乏，導致巨噬細胞能量供應不足，吞噬和殺傷能力下降
嗜中性球
趨化能力顯著下降
Chediak-Higashi症候群
Lasy白血球症候群
慢性皮膚粘膜白假絲酵母菌感染
白假絲酵母菌皮膚試驗
糖尿病
燒傷
正常新生兒
吞噬能力明顯下降
補體或抗體缺陷症
酵素代謝能力降低
慢性肉芽腫
NBT試驗陽性率顯著增高
敗血症
補體缺陷
C1抑制分子缺陷
遺傳性血管神經性水腫
反覆細菌感染
不是病毒
伴隨系統性紅斑狼瘡和慢性腎炎
不是一定
重症聯合免疫缺陷（SCID）
患者出生6個月後既出現發展障礙
易發生嚴重感染而死亡
性聯重症聯合免疫缺陷症
X-SCID
屬X連鎖隱性遺傳
T細胞
缺乏或顯著減少
B細胞
正常但功能異常
導致Ig生產減少和類型轉換障礙
腺苷脫氨酶缺乏症
腺苷脫氨酶（ADA）缺乏
體染色體隱性遺傳
原理
因為酵素缺乏使腺苷和脫氧腺苷分解障礙
造成核苷酸代謝產物dATP和dGTP大量儲存
對早期T、B細胞有毒性作用
造成T細胞和B細胞缺陷
臨床意義
嬰兒接種卡介苗後
出現致死性、擴散性感染
繼發性免疫缺陷症
後天免疫缺乏症候群（AIDS）
愛滋病
感染
CD4 T細胞
主要
巨噬細胞
樹突狀細胞
B細胞
腦組織中的小膠質細胞
指標
HIV抗體陽性
易感染卡氏肺孢子菌肺炎
CD4 /CD8 比值倒置
易出現Kaposi肉瘤
B細胞、免疫球蛋白增多
初篩試驗
ELISA法
確認試驗
免疫印跡法
檢驗
體液免疫檢測
B細胞缺陷檢測
細胞免疫檢測
T細胞缺陷檢測
皮膚試驗
抗原
易於在自然環境中接觸而致敏的物質
結核菌素
白色念珠菌素
毛髮菌素
鏈激酶-鏈道酶（SK-SD）
腮腺炎病毒
試驗
幾種抗原同時試驗
陽性
3種以上抗原皮膚試陽性
2歲以內兒童
一種抗原陽性
陰性
少於2種抗原陽性
48小時反應直徑
＜10mm
提示
免疫缺陷或反應性降低
PHA刺激試驗
非特異性細胞免疫功能
PHA-L：植物血凝素
PHA刺激淋巴球增生、轉化試驗
判斷T細胞功能
淋巴球增生、轉化試驗
新生兒一週後
出現PHA刺激反應
排除嚴重細胞免疫缺陷的可能
AIDS
侵犯CD4細胞（輔助性T細胞Th）為主
gp120與CD4受體蛋白結合
CD4 /CD8 比例降低
細胞免疫功能缺陷
吞噬細胞缺陷病
嗜中性球胞內殺菌能力
硝基藍四氮唑（NBT）還原試驗
陽性顯著增高
敗血症
趨化功能偵測
Boyden小室法
在一個小房間裡趨化
巨噬細胞吞噬功能
炭粒廓清試驗
免疫增生性疾病
由於淋巴球異常增生所引起的疾病
漿細胞病
漿細胞或產生Ig的B淋巴細胞過度增殖引起的
血清或尿液中出現過量的
單株免疫球蛋白
或輕鍊或重鏈片斷
漿細胞瘤
IL-4合成減少、B細胞活化抑制、APC抗原提呈能力抑制
重鏈病
漿細胞發生突變和異常增殖
只能產生
免疫球蛋白的重鍊或有缺陷的重鏈
血清或尿液中出現大量的
遊離的無免疫功能的免疫球蛋白重鏈所致的疾病
惡性漿細胞疾病
輕鏈病
變異的漿細胞產生大量的異常輕鏈
過多的輕鏈在腎臟和其他內臟組織沉積
導致腎損害和澱粉樣變性
輕鏈蛋白類型分為λ型和k型
λ型腎毒性較強
k型M蛋白血症
血清中K/λ型比率
＞4：1
分類
惡性漿細胞疾病
多發性骨髓瘤（MM）
骨髓內單一漿細胞株異常增生的一種惡性腫瘤
成熟B細胞腫瘤
原發性巨球蛋白血症
重鏈病
良性漿細胞疾病
原發性良性單克隆Ig血症
繼發性單克隆高Ig血症
臨床表現
溢出性蛋白尿/腎前性蛋白尿
=免疫球蛋白輕鏈
=尿B-J蛋白/BJP/本週蛋白/凝血蛋白/免疫球蛋白輕鏈
單克隆漿細胞過度增生
單株免疫球蛋白（M蛋白）
高黏滯症候群
血沉上升
尿液本週蛋白
阻塞腎小管
導致腎功能不全
漿細胞侵害骨髓
引起骨髓破壞、骨骼疼痛（最常見）或骨折
高血鈣症
貧血、感染、出血、免疫功能異常
因為正常骨髓細胞無法生成
實驗室檢查
血清免疫球蛋白（M蛋白）定量檢測
M蛋白
漿細胞單克隆性增殖
類別、亞類、基因型和獨特型均一的
免疫球蛋白
無抗體活性
無其他的免疫活性
多見於
多發性骨髓瘤、高丙種球蛋白血症、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病
總蛋白濃度增高、M蛋白增高
以IgG最常見
IgA增高
初篩試驗
單向瓊脂免疫擴散法
免疫比濁法
尿液輕鏈蛋白的檢測
本週蛋白（BJP）
免疫球蛋白（M蛋白）的輕鏈
凝血溶蛋白
初篩試驗
熱沉澱-溶解法
在PH：4.9±0.1條件下
加熱至40-60℃
發生凝固
升高至90-100℃
再溶解
減低至56℃
重新凝固
血液中可呈陰性
因為本週蛋白分子量小
容易從腎臟排出
血清區帶電泳
採用
醋酸纖維素膜和瓊脂糖電泳
M蛋白帶
濃密狹窄的蛋白帶
在r區（有時在β或a區）
最基本、首選、初篩、定性的試驗方法
不能正確判斷免疫球蛋白的種類
免疫電泳
只能估計是Ig的哪一型
不能確認
免疫固定電泳
M蛋白的確證試驗
最常用的方法
單株抗體定性和分型鑑定的
首選方法
鑑定M蛋白輕鏈類型
最常用的方法
子主題
自體免疫疾病
基本概念
免疫耐受
對自身的組織細胞成分
不產生免疫反應
產生微量的免疫反應
有免疫穩定的作用
正常人血清中可存在微量的自身抗體及致敏淋巴球
自體免疫
免疫耐受遭到破壞
對自身成分產生免疫應答
出現自體抗體或致敏T淋巴細胞
自體免疫疾病
自體抗體或致敏T淋巴細胞能與對應的自身成分產生免疫反應
由免疫應答破壞組織器官或造成功能障礙
分類
器官特異性自體免疫疾病
局限於某一器官或組織
慢性甲狀腺炎、橋本甲狀腺炎
Addison艾迪生病（原發性慢性腎上腺皮質功能減退症）
重症肌無力、萎縮性胃炎
特發性血小板減少性紫斑症、自體免疫性溶血性貧血
特定的血小板和紅血球
非器官特異性自體免疫疾病
侵犯多種組織器官或系統的一組疾病
系統性紅斑狼瘡（SLE）、類風濕性關節炎（RA）、乾燥症（SS）
共同特徵
多數病因不清
無誘因多成為
自發性
特發性
女性居多
女性多於男性
老年多於青年
有遺傳傾向
有自體抗體或自體組織細胞的致敏T淋巴球
疾病可以重疊
不可治愈
發作與緩解交替出現
自體抗原
隱蔽抗原的釋放
精子、眼內容物、腦等
沒有和免疫系統接觸的，免疫系統不知道
交感性眼炎
一個眼球受傷，內容物釋放
機體也會攻擊另一個好眼
自身成分的改變
變性的IgG
刺激機體產生抗變性IgG抗體（類風濕因子RF）
類風濕性關節炎
共同抗原引發的交叉反應
風濕熱
A型溶血性鏈球菌中的M蛋白
與心內膜、關節及腎絲球基底膜抗原相同
引起交叉反應
急性腎絲球腎炎
風濕熱
常見的自體免疫疾病
I型超敏反應
II超敏反應
重症肌無力
自體抗原
乙醯膽鹼受體
機制
自體抗體與神經肌肉接頭的乙醯膽鹼受體結合
體內化並降解
導致肌肉細胞對運動神經元釋放的乙醯膽鹼反應性降低
導致骨骼肌運動無力
甲狀腺功能亢進（Graves病）
自體抗原
促甲狀腺激素受體（TSHR）
抗TSH受體的抗體
機制
瀰漫性毒性甲狀腺腫
III型超敏反應
系統性紅斑狼瘡（SLE）
自體抗原
核抗原
核酸、核蛋白、組蛋白
自體抗體
抗核抗體（ANA）
機制
免疫複合物沉積在
心血管結締組織、腎絲球基底膜、漿膜、關節滑膜及臟器的小血管壁
活化補體
吸引嗜中性球浸潤
特點
多發於青年女性
累計多器官、多重系統
臉部
蝶形紅斑
皮膚
環形紅斑
光過敏、發熱、皮疹
腎臟損害（腎絲球腎炎）、心血管病變
貧血、精神症狀
關節痛、漿膜炎
補體
活動期間
因為過度活化
水平下降
穩定後
反應性增高
自體抗體
抗核抗體（ANA）
大多數自體免疫疾病均為陽性
主要存在於未治療的SLE中
主要是IgG類型
無器官和種屬特異性
可與所有動物的細胞核發生反應
分類
抗DNA抗體
抗組蛋白抗體
抗非組蛋白抗體
抗核仁抗體
偵測
間接免疫螢光法
抗dsDNA抗體
抗雙股DNA抗體
屬於抗核抗體（ANA）
特異性、特徵性抗體
活動期間經常出現
方法
馬疫錐蟲或綠蠅短膜蟲
抗原基質
間接免疫螢光法
最特異、最敏感、最常用的方法
抗Sm抗體
標誌性自體抗體
類風濕性關節炎（RA）
自體抗體
種類
類風濕因子（RF）
以變性IgG的Fc段
為目標抗原的自身抗體
主要以IgM型為主
IgA、IgG、IgE
陰性不能排除RA
抗角蛋白抗體（AKA）
判斷預後的標誌
高滴度
病情較為嚴重
抗環瓜胺酸抗體（抗CCP抗體）
高度特異性
早期診斷可出現陽性
RF檢測方法
乳膠顆粒凝集試驗
間接法
只能查IgM
ELISA
不同Ig類型的RF
以兔IgG為抗原包被在固相載體
與待測樣品結合
分別加入酵素標記的抗人IgG、IgM、IgA、IgE
RF作為橋接抗原
乾燥症（SS）
又稱
Sjogren綜合症
特徵
分泌腺體功能異常
皮膚和黏膜的乾燥
淚腺與唾液腺最常被侵犯
眼乾、口乾
分為
原發性
累計外分泌腺體以外的組織
繼發性
標誌抗體
抗SSA/Ro抗體
抗SSB/La抗體
多發性肌炎（PM）及皮肌炎（DM）
多發性肌炎
肌肉損害為主
皮肌炎
肌肉損傷同時有皮膚損傷
標誌抗體
Jo-1
用腳踹到皮膚了
PM-1
硬皮症（Scl）
全身性病變
進行性系統性硬化症（PSS）
表現
皮膚變緊、變硬
標誌抗體
抗Scl-70抗體
對妻子（7）皮要硬
血清總抗核抗體（總ANA）檢測方法
間接螢光免疫法（IIF）
抗原
HEp2細胞
人頭癌細胞，有豐富的細胞核成分
與受檢血清反應
再加入FITC標記的抗人IgG（二抗體）
最有效
螢光圖形與臨床意義
均質型
高效價
見於系統性紅斑狼瘡（SLE）
週邊型/核膜型
高效價
僅見於SLE
特別是活動期SEL
提示病情活動
最常見
斑點型
混合結締組織疾病（MCTD）
混合斑點
核仁型
硬皮症（SCL）
宅心人硬
IV型超敏反應
T細胞對自身抗原反應所引起的
自身反應性T細胞接介導的
I型糖尿病
患者體內存在自身反應性T細胞
CD8 CTL
Th1細胞
常見的自身抗體檢測
抗ENA抗體譜
ENA
可提取合抗原的總稱
可用鹽水或磷酸鹽緩衝液
提取出來
ANA不可以
ENA抗體
主要是IgG
檢測方法
免疫印跡法
臨床意義
不包括抗雙股DNA（抗dsDNA抗體）
因為屬於ANA裡面的
其他自身抗體的檢測
抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）
血管炎
核週型（pANCA）抗體的標靶抗原
髓過氧化物酶（MPO）
髓系特有的
所以在核的周邊
胞漿型（cANCA）抗體的標靶抗原
蛋白酶-3（PR3）
抗線粒體抗體（AMA）
原發性膽汁性肝硬化（PBC）
抗磷脂抗體（APLA）
包括抗心磷脂抗體（ACLA）
血液出現高凝血狀態
血栓形成
ACLA
SLE的女性更易形成血栓
妊娠時易發生流產
抗平滑肌抗體（ASMA）
自體免疫性肝炎（AIH）
間接免疫螢光法（IIF）測定
作為基質
猴的肝細胞
大鼠的腎、胃或肝組織
抗甲狀腺球蛋白抗體（ATGA）
橋本甲狀腺炎（HT）
抗胃壁細胞抗體（PCA）、抗內因子抗體
萎縮性胃炎
惡性貧血
超敏反應性疾病
超敏反應
變態反應
在初次應答致敏後
再次應答
生理功能紊亂
組織細胞損失
異常免疫應答
免疫防禦
過高
I型超敏反應
IgE抗體介導
親細胞性
與肥大細胞結合
速髮型超敏反應/過敏反應
數分鐘
原理
初次應答後產生變應原特異性IgE
與肥大細胞上的IgE Fc受體結合
致敏
再次應答時致敏肥大細胞脫顆粒
釋放生物活性介質
組織胺、白三烯
造成
平滑肌痙攣
主要由白三烯造成
引起支氣管氣喘的主要物質
小血管通透性增加
黏膜腺體分泌增加
神經末梢敏感
嗜酸性粒細胞活化
參與反應的主要成分
變應原
某些藥物
青黴素
吸入性變應原
花粉、蟎
食物變應原
奶、蝦
需要血小板活化因子的參與
抗體
IgE抗體
也可出現IgG亞類
IgG4
因為這個不活化補體
I型超敏沒有補體參與
參與細胞
肥大細胞
嗜酸性球
寄生蟲感染
可增高
嗜鹼性球
臨床症狀
口訣
I型速發、I億酸鹼、I型休克氣喘及過敏
億：E：IgE
全身性
過敏性休克
用藥或註射異种血清引起
如破傷風抗毒素、白喉抗毒素
青黴素過敏性休克
血壓下降
因為血管活性物質所引起的
毛細血管擴張
寄生蟲感染
區域性
呼吸道過敏反應
過敏性鼻炎和過敏性氣喘
消化道過敏反應
過敏性胃腸炎
皮膚過敏反應
蕁麻疹、濕疹、血管神經性水腫
引起效應器官的功能損害
但無實質病理損害
引起I型超敏反應的
IL3/IL5、IL4
檢驗方法
特異性試驗
過敏原皮內試驗
挑刺、刮痕、皮內注射
皮內注射
如打青黴素做的皮膚試
陽性對照
鹽酸組織胺
假陽性
大量荷爾蒙類藥
假陰性
抗組織胺影響
流程
注射器將變應原萃取液注入皮內
抗原應適當稀釋
注入量
0.01-0.02ml
注射位置
前臂內側
不能出血和注射到皮下
同時多種變應原
間距
2.5-5.0cm
高度可疑敏感
5.0cm
20-30分鐘觀察結果
紅暈（挑刺試驗）
風團（皮內試驗）
特異性IgE（sigE）檢測
放射變應原吸附試驗（RAST）
流程
將純化的變應原吸附在固相載體上
加入待測血清
放入放射性標記的抗IgE抗體（二抗體）
定量檢測血清中的特異性IgE水平
如血清過敏者
需注射破傷風抗毒素
少量多次注射
II型超敏反應
細胞毒型或細胞溶解型
II型毒、23mygod
標靶細胞表面抗原與IgG或IgM類抗原結合
在補體、巨噬細胞、NK細胞參與下
主要成分
抗體
IgG或IgM
補體參與
溶解作用
參與細胞
巨噬細胞
調理吞噬作用
NK細胞
ADCC效應
臨床疾病
口訣
甲亢肌力熱破血
輸血反應
新生兒溶血
孕婦Rh（-）、第一胎Rh（ ）
防止再次妊娠胎兒溶血
產後72小時內
注射抗Rh抗體
不管速度是多塊
自體免疫性溶血性疾病（AIHA）
藥物過敏性血球減少症
特發性血小板減少性紫斑症（ITP）
肺出血腎炎症候群（Goodpasture症候群）
甲狀腺功能亢進
（Graves病）
重症肌無力
（MG）
急性風濕熱
（ARF）
偵測
抗血球抗體檢測
可以由ABO抗原引起
所以關於血的都在這
臨床意義
幫助自體免疫溶血性貧血的診斷
抗Rh抗體
幫助Rh血型不合導致新生兒溶血病
鏈球菌溶血素O（ASO）
鏈球菌細胞壁M蛋白
與心臟、腎絲球的一致
所以會連帶結合這些造成破壞
與鏈球菌有關的疾病
咽喉炎
扁桃體炎
中耳炎
猩紅熱
急性腎絲球腎炎
急性風濕熱
III型超敏反應
又稱免疫複合物
中等大小可溶性免疫複合物（IC：IgG、IgM）
沉積在局部或全身多處微血管基底膜
活化補體
補體對血管壁造成損害
進而誘發血小板、嗜鹼性球、嗜中性球的參與
充血水腫、局部壞死
嗜中性球浸潤
為主要特徵的發炎反應
記憶方法
III型複合、23mygod、三中全會
主要成分
抗體
IgG、IgM
參與細胞
嗜中性球
引起組織損傷作用最強的
嗜鹼性球
肥大細胞
血小板
免疫複合物（IC）、循環免疫複合物（CIC）
中等大小可溶性抗原-抗體免疫複合物
疾病
局部免疫複合物病
Arthus反應/阿瑟氏反應
實驗性局部過敏反應
家兔經皮下多次注射馬血清
4-6次注射後
局部出現水腫、出血及壞死
類Arthus反應
胰島素
所以注射胰島素要患者位置注射
疫苗
抗血清注射
全身免疫複合物病
口訣
風浪腎清爽A
A：類Arthus反應
血清病
注射異種動物血清1-2週後發病
發燒、皮疹、淋巴結腫大、關節腫痛和一過性蛋白尿
立刻出現休克
I型超敏反應
鏈球菌感染後腎絲球腎炎
A族溶血性鏈球菌感染
2-3週
沉積在腎絲球基底膜上
引起免疫複合物腎炎
類風濕性關節炎
變性IgG
抗IgG的自身抗體=類風濕因子（RF）
抗IgG的自身抗體
主要是IgM抗體
發生在小關節
風濕性關節炎
發生在大關節
系統性紅斑狼瘡
DNA和抗DNA抗體複合物
沉積在腎臟、關節和身體其他部位的血管基底膜
引起腎絲球腎炎、關節炎等多重器官損害
偵測
檢測組織中的
免疫組織化學技術
免疫複合物的檢測（CIC）
（CIC）
分類
抗原特異性方法
非抗原特異性方法
臨床多採用
IV型超敏反應
遲髮型超敏反應（DTH）
效應T細胞（CD4 Th1）（CD8 CTL）
與特異性抗原結合後
引起的以單核-巨噬細胞浸潤和組織損傷為主要特徵的發炎反應
主要成分
抗原
胞內寄生菌
布氏桿菌、結核桿菌、傷寒沙門菌
不結婚真傷心
病毒、寄生蟲
化學物質
染料、油漆、農藥、化妝品
藥物
青黴素
I型超敏也可以出現
目標細胞
胞內寄生了結核分枝桿菌的細胞
移植的細胞或器官
腫瘤細胞
黏附了半抗原的蛋白
參與細胞
效應T細胞
CD4
Th1
CD8
CTL
單核-巨噬細胞
疾病
感染性遲髮型超敏反應
胞內寄生病原體感染
結核分枝桿菌
空洞型結核
病毒
原蟲
接觸性皮膚炎
接觸小分子半抗原物質
移植排斥反應
宿主抗移植物反應
HVGR
移植物抗宿主反應
GVHR
偵測
皮膚試驗原理
皮內注射、皮膚斑貼
24-48h
局部出現紅腫、硬結、水皰等
目的
檢測IV型超敏反應
細胞免疫功能狀態
結核菌素試驗（OT）
方法
感染後4-8週
可出現
將舊結核菌素（OT）或結核分枝桿菌的純蛋白衍生物（PPD）
48-72h觀察
紅腫或硬結
＞5mm
陽性
結果判斷
＜5mm
陰性
不能表示該患者為感染結核
因為結核桿菌是遲發的
5-9/10-19mm
陽性
曾感染結核菌或曾接種過卡介苗（BCG）
≥20mm或有水泡或壞死
強陽性
感染結核病的可能性大
目的
選擇卡介苗接種對象
排除結核菌感染
了解細胞免疫功能
皮膚斑貼試驗
浸泡過變應原溶液的紗布，貼服在前臂內側或後背
用玻璃紙或蠟紙遮蓋
24-72h
紅腫、水皰
皮膚試驗區別
浸潤型肺炎
肺斑塊陰影
發燒、咳嗽、痰中帶血
診斷
痰抗酸桿菌培養
判斷結核
總結
口訣
I型速發、II型毒、III型複合、IV遲發
抗體和細胞
1億肥酸鹼、23mygod，三中全會、4T細胞
疾病
I型
休克氣喘和過敏
II型
甲亢肌力熱破血
III型
風浪腎清爽
四型
移植結核接觸皮膚炎
感染性疾病
細菌性感染
鏈球菌感染
革蘭陽性鏈球菌
化膿性鏈球菌
A群-β溶血鏈球菌
檢驗方法
乳膠凝集試驗
免疫散射比濁法
常用的免疫學標誌
抗鏈球菌溶血素“O”
ASO
增高
急性咽喉炎等上呼吸道感染
風濕熱
III型超敏反應
風濕性心肌炎
風濕性關節炎
心包膜炎
急性腎絲球腎炎
傷寒沙門菌
臨床症狀
自癒性胃腸炎
致死性傷寒（腸熱）
檢驗方法
肥大反應
太肥了好傷心
酵素連結免疫吸附試驗
ELISA
結核分枝桿菌
TB
檢驗方法
結核菌素試驗
舊結核菌素（OT）
結核菌素純蛋白衍生物（PPD）
結核活動的標誌
抗PPD抗體
陽性
病毒性感染
流行性感冒病毒
結構
血凝素（HA）
神經氨酸酶（NA）
方法
血球凝集抑制試驗
原理
病毒懸浮液與待測血清（抗體）混合
有相應抗體
可以抑制病毒表面的血凝素與紅血球結合
再加入紅血球就無法結合了
無凝血集
陽性
柯薩奇病毒
能夠感染機體並可激發身體免疫系統
攻擊胰島β細胞
引起糖尿病
甲型肝炎
檢測方法
ELISA和化學發光技術
檢測HAV-IgM和IgG
IgM
判斷現症感染
早期感染
IgG
感染晚期
既往感染
B型肝炎
HBsAg（表面抗原）
早先出現的
HBsAb（抗-HBs抗體）
保護性抗體
HBeAg（e抗原）
提示HBV體內複製活躍
有很強的傳染性
HBeAb（抗-HBe抗體）
複製能力減弱
傳染性降低
HBcAg（核心抗原）
HBV存在與複製活躍
直接指標
不易在檢測到
HBcAb（抗HBc）
IgM
乙肝急性期、早期感染
IgG
過去感染
HBV DNA
最敏感
最直接
慢性活動性肝炎
臨床表現
有慢性肝炎病史
HBc IgM陽性
肝功能異常
損傷基因
肝外損傷
免疫複合物沉積引起
破壞機制
CD8 細胞透過辨識肝細胞膜上表現的HBcAg和HLA-I導致細胞溶解
要求取雙份血清
目的
觀察恢復期抗體效價是否比初期增高
先天性感染
胎兒在母體中收到的感染
統稱TORCH
優生優育4項
弓形蟲（TOX）
風疹病毒（RUV）
鉅細胞病毒（HCMV）
單純皰疹病毒（HSV）
臨床症狀
流產
畸形
智障、聽力障礙
寄生蟲感染
血吸蟲感染
環卵沉澱反應
抗原-抗體反應
蟲卵內成熟毛蚴分泌物（在蟲卵周圍）
與人類血清內抗體結合
形成泡狀、指狀、條狀有明顯折射性的特異性沉澱物
陽性
聚乙二醇
雜交瘤技術
融合劑
免疫濁度
增濁劑
抗原的純化
聚合物沉澱法