1. 모든 시료 준비 과정은 멸균 작업 절차를 따라야 합니다. 2. 희석제는 시험 전 36℃±1℃에서 15분~30분 동안 완전히 예열되어야 합니다. 3. 냉동 시료는 2°C~5°C에서 18시간 이내, 또는 45°C 이하 온도에서 15분 이내로 해동할 수 있습니다. 4. 고체 및 반고체 검체 : 무균절차를 거쳐 검체 25g을 달아 희석액 225mL가 담긴 멸균병에 넣고(병 안에 멸균유리구슬 5~10개 미리 세팅되어 있음) 오실레이터로 2회 흔든다. , 매번 30초씩 1:10의 샘플 균질 용액을 만듭니다. 5. 액체검체 : 액체검체의 경우 잘 흔들어 준 후 멸균 빨대를 이용하여 검체 25mL를 취하여 희석액 225mL가 담긴 멸균병에 넣는다(병 안에 멸균유리구슬이 5~10개 미리 설치되어 있다) 1:10의 샘플 균질 용액을 준비하기 위해 오실레이터를 사용하여 매번 30초씩 두 번 흔들어줍니다.

1. 1mL 멸균 피펫 또는 마이크로피펫을 사용하여 1:10 샘플 균질 용액 1mL를 흡수하고 희석액 9mL가 들어 있는 멸균 시험관에 튜브 벽을 따라 천천히 주입합니다(피펫 끝 또는 마이크로피펫 팁에 주의하십시오). 희석제를 만지지 않음), 진동기를 사용하여 시험관을 10초씩 3회 흔들어 1:100 샘플 균질 용액을 준비합니다. 2. 1mL 멸균 피펫 또는 마이크로피펫 팁을 추가로 준비하고 위의 작업 순서에 따라 시료 균질화를 10배 증가시킵니다. 각 증분 희석에는 1mL 멸균 피펫 또는 피펫 팁을 사용합니다.

총유산균수

비피도박테리움 수

연쇄구균 서모필루스 수

유산균 수

Bifidobacterium spp.에 대한 개수만 포함됩니다.

다양한 품목 검출에 사용되는 유산균 종 및 배양 배지의 예

1. 총 콜로니 수를 계산하려면 집락 수가 30CFU~300CFU이고 퍼지는 집락이 없는 플레이트를 선택합니다. 30 CFU 미만인 플레이트의 경우 구체적인 콜로니 수를 기록하고, 300 CFU를 초과하는 플레이트의 경우 셀 수 없을 만큼 많은 콜로니 수를 기록합니다. 각 희석에 대한 콜로니 수는 두 플레이트의 평균이어야 합니다. 2. 플레이트 중 하나에 더 큰 박편 집락이 자라는 경우에는 사용하지 않아야 하며, 대신에 박편 집락이 플레이트의 절반 미만인 경우에는 해당 희석에서 집락 수로 사용해야 합니다. 나머지 절반은 콜로니 분포가 매우 균일하므로 플레이트의 절반을 세고 2를 곱하면 한 플레이트의 콜로니 수를 나타낼 수 있습니다. 3. 콜로니 사이에 명확한 경계가 없는 사슬 성장이 플레이트에 나타나면 각 단일 사슬을 콜로니로 계산합니다.

1. 하나의 희석 접시에 있는 콜로니 수가 적정 계수 범위 내에 있으면 두 접시의 평균 콜로니 수를 계산하고, 그 평균값에 해당 희석배수를 곱하여 전체 희석 접시 수의 결과를 구합니다. 그램당 또는 밀리리터당 콜로니. 2. 두 개의 연속 희석 플레이트의 콜로니 수가 적절한 계수 범위 내에 있으면 식(1)에 따라 계산합니다. N=∑C/(n1n2)*d 공식에서: N——샘플의 콜로니 수; ∑C ——플레이트(적절한 범위의 콜로니 번호가 포함된 플레이트)의 콜로니 수의 합입니다. n1——첫 번째 희석(낮은 희석 인자)의 플레이트 수; n2——두 번째 희석(높은 희석 비율)의 플레이트 수; d——희석 인자(첫 번째 희석). 3. 모든 희석액의 콜로니 수가 300CFU를 초과하는 경우 가장 많이 희석된 플레이트를 계산합니다. 다른 플레이트는 너무 많아서 계산할 수 없는 것으로 기록될 수 있습니다. 결과는 평균 콜로니 수에 다음을 곱하여 계산됩니다. 가장 높은 희석 인자. 4. 모든 희석에서 플레이트의 콜로니 수가 30 CFU 미만인 경우, 가장 낮은 희석에서 평균 콜로니 수에 희석 인자를 곱하여 계산해야 합니다. 5. 모든 희석액(액체검체원액 포함)의 플레이트에 콜로니 성장이 없는 경우에는 가장 낮은 희석배수에 1을 곱한 것 미만으로 계산한다. 6. 모든 희석 시 평판 콜로니 수가 30CFU~300CFU가 아니고, 그 중 일부가 30CFU 미만이거나 300CFU를 초과하는 경우에는 30CFU 또는 300CFU에 가장 가까운 평균 콜로니 수에 희석배수를 곱하여 계산합니다. .

1. 콜로니 수가 100CFU 미만인 경우에는 "반올림" 원칙에 따라 반올림하여 정수로 보고한다. 2. 콜로니 수가 100CFU 이상인 경우 "반올림" 원리를 사용하여 세 번째 숫자를 반올림하고 처음 두 자리를 취하고 다음 숫자는 0으로 대체하여 표현할 수도 있습니다. "반올림" 원칙에 따라 10의 지수 형태. 반올림 후 유효 숫자 두 개를 사용합니다. 3. 계량 샘플링은 CFU/g으로 보고되고, 부피 샘플링은 CFU/mL로 보고됩니다.

집락수 결과를 토대로 보고서를 발행하며, 보고단위는 CFU/g(mL)로 표시합니다.

MRS 배양 배지: 펩톤, 쇠고기 추출물 분말 및 효모 추출물 분말은 박테리아 성장에 필요한 질소원, 탄소원, 비타민, 미네랄 및 기타 영양소를 제공합니다. 포도당은 발효 가능한 탄소원으로 사용됩니다. 80, 구연산 삼암모늄 및 아세트산 나트륨은 젖산균의 성장을 촉진하고 세포 독성 물질을 중화시킬 수 있습니다. 한천은 응고제 역할을 합니다.

MC배지 : 대두펩톤, 쇠고기추출분말, 효모추출분말은 박테리아 성장에 필요한 질소원, 탄소원, 비타민, 미네랄 및 기타 영양분을 제공하고, 유당은 탄수화물 역할을 하여 유산균 및 칼슘의 성장을 촉진합니다. 탄산염 박테리아 대사에 의해 생성된 산을 중화하여 세포에 대한 산성 독성을 완화합니다. 중성 빨간색은 산-염기 지표 역할을 하며 배양 배지에는 불용성 물질인 10g/L의 탄산칼슘이 포함되어 있습니다. 완전히 섞이면 접시에 붓습니다. 동시에 플레이트에 흰색 침전물이 생기는 것은 정상입니다.

무피로신 리튬 염 및 시스테인 염산염의 변형 MRS 배지: 펩톤, 쇠고기 추출물 분말 및 효모 추출물 분말은 발효 가능한 탄소원인 포도당원, 박테리아 성장에 필요한 질소원, 탄소원, 비타민, 미네랄 및 기타 영양소를 제공합니다. 망간 이온, 마그네슘 이온, Tween 80, 구연산삼암모늄, 아세트산 나트륨은 유산균의 성장을 촉진하고 세포 독성 물질을 중화할 수 있습니다. 한천은 응고제 역할을 합니다. 무피로신 리튬염은 비피도박테리움 시스테인 염산염을 제외한 다른 유산균을 억제합니다.