MindMap Gallery 细胞培养与实践
细胞培养与实践的思维导图,介绍了细胞培养的基础、细胞培养在药理学和药物开发中的应用、细胞培养在免疫学领域的应用、干细胞培养技术及其在再生医学中的应用、细胞培养技术在药理学中的应用。
Edited at 2023-10-26 20:57:48Einhundert Jahre Einsamkeit ist das Meisterwerk von Gabriel Garcia Marquez. Die Lektüre dieses Buches beginnt mit der Klärung der Beziehungen zwischen den Figuren. Im Mittelpunkt steht die Familie Buendía, deren Wohlstand und Niedergang, interne Beziehungen und politische Kämpfe, Selbstvermischung und Wiedergeburt im Laufe von hundert Jahren erzählt werden.
Einhundert Jahre Einsamkeit ist das Meisterwerk von Gabriel Garcia Marquez. Die Lektüre dieses Buches beginnt mit der Klärung der Beziehungen zwischen den Figuren. Im Mittelpunkt steht die Familie Buendía, deren Wohlstand und Niedergang, interne Beziehungen und politische Kämpfe, Selbstvermischung und Wiedergeburt im Laufe von hundert Jahren erzählt werden.
Projektmanagement ist der Prozess der Anwendung von Fachwissen, Fähigkeiten, Werkzeugen und Methoden auf die Projektaktivitäten, so dass das Projekt die festgelegten Anforderungen und Erwartungen im Rahmen der begrenzten Ressourcen erreichen oder übertreffen kann. Dieses Diagramm bietet einen umfassenden Überblick über die 8 Komponenten des Projektmanagementprozesses und kann als generische Vorlage verwendet werden.
Einhundert Jahre Einsamkeit ist das Meisterwerk von Gabriel Garcia Marquez. Die Lektüre dieses Buches beginnt mit der Klärung der Beziehungen zwischen den Figuren. Im Mittelpunkt steht die Familie Buendía, deren Wohlstand und Niedergang, interne Beziehungen und politische Kämpfe, Selbstvermischung und Wiedergeburt im Laufe von hundert Jahren erzählt werden.
Einhundert Jahre Einsamkeit ist das Meisterwerk von Gabriel Garcia Marquez. Die Lektüre dieses Buches beginnt mit der Klärung der Beziehungen zwischen den Figuren. Im Mittelpunkt steht die Familie Buendía, deren Wohlstand und Niedergang, interne Beziehungen und politische Kämpfe, Selbstvermischung und Wiedergeburt im Laufe von hundert Jahren erzählt werden.
Projektmanagement ist der Prozess der Anwendung von Fachwissen, Fähigkeiten, Werkzeugen und Methoden auf die Projektaktivitäten, so dass das Projekt die festgelegten Anforderungen und Erwartungen im Rahmen der begrenzten Ressourcen erreichen oder übertreffen kann. Dieses Diagramm bietet einen umfassenden Überblick über die 8 Komponenten des Projektmanagementprozesses und kann als generische Vorlage verwendet werden.
细胞培养与实践
细胞培养的基础
1.细胞培养的基本条件
细胞培养实验室
设施
设备
2.细胞培养的基本技术
(1)无菌技术
①操作范围的消毒
擦拭
紫外照射
②洗手和着装
③培养用品的清洗和消毒灭菌
清洗
包装
消毒灭菌
④无菌培养操作
(2)培养材料的选择和处理
①胚胎和成体组织来源
②正常和肿瘤组织来源
③取材方法
(3)细胞培养类型及技术
①原代培养
组织块培养法
单细胞的制备及培养
②传代培养
组织块的传代
贴壁细胞的传代培养
悬浮细胞的传代培养
(4)细胞形态学检查
①倒置显微镜观察细胞形态和结构
a.普通染色法观察—吉姆萨(Giemsa)染色法、苏木精-伊红染色法(HE染色)
b.特殊染色法观察—特殊染色法观察、细胞脂类染色、 DNA/RNA染色
②相差显微镜观察活细胞的生活特性
细胞内各种结构间呈现清晰可见的明暗对比
③利用荧光显微镜观察细胞的形态和结构
a.DNA/RNA吖啶橙荧光染色法
b.免疫荧光染色法
④利用荧光显微镜观察细胞的形态和结构
a.透射电镜(TEM)
b.扫描电镜(SEM)—形成三维结构图像
(5)培养细胞污染的检测和排除
①微生物的污染与检测
a.真菌污染及检测—烟曲霉菌、黑曲霉菌、白假丝酵母菌等
b.细菌污染及检测—大肠杆菌、假单胞菌、葡萄球菌等
c.支原体污染及检测— 细胞污染中最常见
②细胞污染的预防和排除
a.细胞污染的预防措施—建立细胞库、针对污染来源、针对操作
b.微生物污染的排除—抗生素排除法、加温除菌、动物体内接种
c.避免细胞交叉污染
(6)细胞的冻存、复苏和运输
细胞冻存和复苏的基本原则:慢冻快融
3.培养细胞研究及检测技术
(1)细胞周期分析法
①细胞周期—S期细胞最易受损
②培养细胞的生长过程
③细胞的生命期
a.体内组织细胞
b.离体培养细胞生命期—短暂传代、有限传代、获得不死性
④细胞周期分析
a.流式细胞术:G0期、G1期、S期、G2/M期
b.Annexin V/PI双染法:检测细胞凋亡、细胞膜完整性
(2)细胞融合
①自然融合
②人工诱导融合
③同核细胞融合
④异核细胞融合
(3)细胞克隆技术
克隆培养的关键是细胞的分离
提高克隆形成率的措施
增强细胞同化能力:如胎牛血清、细胞因子
增强细胞的帖壁能力:如软琼脂、制备底层饲养层细胞
(4)细胞培养在病毒增殖和疫苗生产中的应用
病毒蚀斑;细胞病变效应
(5)培养细胞的转化
无限细胞系/连续细胞系
(6)细胞凋亡(程序性细胞死亡)
①形态学检测
②生物化学检测
a.琼脂糖凝胶电泳检测
b.末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记检测(TUNEL)
c.Annexin V / PI检测细胞凋亡
d.检测亚二倍体DNA峰判定凋亡
(7)培养细胞基因倒入技术
①基因转导技术
②基因转导技术
a.染色体转导
b.基因转染
③转基因技术
(8)细胞酶活性测定
细胞化学技术
a.酸性磷酸酶
b.葡萄糖-6-磷酸酶
c.葡萄糖-6-磷酸酶
细胞培养在药理学和药物开发中的应用
1.药物对培养细胞增殖的影响
(1)MTT法
(2)有丝分裂指数法
2.细胞对药物摄取的实验
3.细胞对药物转运的实验
细胞培养在免疫学领域的应用
1. 免疫细胞的制备、分离及纯化
免疫细胞分离原理
①基于细胞物理性状
②基于细胞表面标记
(1)外周血单个核细胞悬液的制备
(2)淋巴细胞的分离和纯化
①玻璃器皿吸附法
②磁铁吸附法
③羟基铁-乳胶分层液法
④吸附柱过滤法
(3)T细胞和B细胞的分离
①免疫磁珠法分离T细胞和B细胞
②用尼龙毛柱分离T细胞和B细胞
③流式细胞仪分离T细胞和B细胞
(4)T细胞亚群的分离
①抗体/补体介导的特异性细胞毒作用分离T细胞亚群(T subset)
②盘选(panning)分离法分离T细胞亚群
(5)单核巨噬细胞的分离
(6)单核巨噬细胞的分离
2.免疫活性细胞数量的检测
(1)微量细胞毒试验检测各类免疫细胞的数量
(2)免疫荧光染色技术检测各类免疫细胞数量
(3)流式细胞术检测各类免疫细胞数量
(4)免疫酶染色技术检测各类免疫细胞的数量
3.淋巴细胞增殖活性检测
(1)淋巴细胞增殖试验原理
(2)淋巴细胞增殖的形态学检查
(3)MTT检测法淋巴细胞增殖的形态学检查
4.免疫细胞的细胞毒活性检测
(1)形态学检查法---淋巴细胞对肿瘤细胞的细胞毒试验
干细胞培养技术及其在再生医学中的应用
1.干细胞基础知识
(1)干细胞的特性
(2) 干细胞分类
(3)干细胞的研究历史
(4)干细胞的来源
(5)干细胞的分化潜能
(6)胚胎及成体干细胞的差异
2.胚胎来源的多能性干细胞
(1)ES、EG、EC cells
(2)ES cells 的分离和培养
(3)ES cells 的自我更新和分化能力
3.诱导性多能干细胞
(1)逆转细胞命运的方法:去分化、重编程
①核移植
②核融合
(2)“多能性”转录因子
(3)“多能性”转录因子
(4)iPS细胞研究的意义及问题
4.干细胞在再生医学中的应用
(1)再生医学的概念
(2)造血干细胞移植
①分类
②主要适应症
③移植过程
④治疗步骤和策略
⑤存在的问题和研究热点
⑥临床应用的推广
(3)自体角膜缘干细胞移植
(4)神经干细胞的应用
(5)皮肤干细胞与美容
①皮肤的基本结构
②自体细胞除皱的两大优势
a.有效性
b.安全性
(6)其他应用
①心肌修复
②ES细胞疗法治疗糖尿病
③间充质干细胞
(7)相关法律法规
细胞培养技术在药理学中的应用
1.实验细胞
(1)细胞优缺
(2)如何选择
原代细胞不细胞系/株的比较
(3)研究热点
细胞生长于细胞分化
细胞增殖与细胞周期的调控
细胞的衰老与死亡
细胞表面受体与信号转导
囊泡转运
线粒体
细胞骨架
离子通道
基因组
2.在肿瘤研究中的应用
(1)影响肿瘤细胞生长实验(药物敏感试验)
(2)肿瘤细胞迁移试验
(3)肿瘤细胞侵袭试验
(4)肿瘤分化诱导模型的建立
①白血病细胞分化诱导实验
②实体瘤分化诱导模型
(5)肿瘤细胞端粒酶活性的检测
(6)肿瘤细胞基因及其表达产物检测
①) 癌基因及抑癌基因检测
②癌基因及抑癌基因检测方法
a.放射免疫分析方法
b.化学发光免疫分析
c.电化学发学免疫分析??
d.免疫细胞化学技术
e.流式细胞术
f.PCR技术
g.基因诊断技术
(7)裸鼠人体肿瘤秱植瘤模型制备及试验
3.在其它药理学及药学研发中的应用
(1)细胞对药物转运的实验(肠吸收)
(2)构建人血脑屏障药物筛选模型
(3)微核试验——毒理学应用
细胞计数法
台盼蓝排斥法
细胞活性和增殖的检测
培养细胞的常规观察
形态、生长、培养液颜色(pH)、污染与否
培养细胞的活力检测
台盼蓝、MTT、CCK8、克隆形成实验
细胞的传代与维持
换液、传代,冻存、复苏。
传代方法
A消化法——贴壁细胞
B直接吹打法——部分贴壁不牢的细胞
C离心或自然沉降法——悬浮细胞