★显微镜计数法：血液用白细胞稀释液（如冰乙酸）稀释一定倍数并破坏成熟红细胞， 充入改良牛鲍（Neubauer）血细胞计数板，显微镜低倍镜下计数一 定范围（体积）内的白细胞数，通过换算可得到单位容积即每升血液 中的白细胞总数。

★血液分析仪法：电阻抗法。

显微镜计数法： 优点：传统方法，无需特殊仪器，设备简单，费用低廉，适用于基层医疗单位，在严格规范条件下，可用于校准血液分析仪及异常结果的复查。 缺点：操作费时，准确性和重复性在很大程度上取决于操作者的技术水平和所用仪器的准确性，同时存在固有误差，可通过同一标本多次计数取均值来减少误差。

血液分析仪法： 优点：常规筛检方法操作简单，检测速度快，同时得到多项检测结果，效率高，重复性好，易于标准化，适合大批量标本的集中检测。 缺点：仪器试剂成本高，明日必须做好质控，否则易系统误差。

1.避免计数误差 1)技术误差严格按照标准操作规程操作,避免或消除技术误差。 （1）标本要尽快测定，一般不应超过4 h。室温最好控制在18~22 C，充分混匀血液标本，标本不能出现溶血或小凝块。 (2）所用器材必须清洁干燥。 (3)白细胞稀释液应过滤，避免杂质、微粒的干扰，所用试剂均应符合标准要求，避免长菌、混浊。 （4）操作过程 ①采血：采血顺利、速度快，末梢采血要有足够(2~3 mm）的深度，切忌在针刺周围用力挤压，避免混入组织液 ②抗凝剂：用EDTA-K2作抗凝剂，浓度为3.7~5.4umol/mL血液(1.5~2.2mg/mL血液) ③加盖玻片：WHO推荐采用“推式”法，保证充入计数池内液体高度为0.10mm稀 ④释释与混匀：稀释倍数要准确，血液与白细胞稀释液要充分混匀，但不能用力过大，避免产生气泡,待红细胞溶解破坏彻底，细胞悬液成棕褐色透明时可充液 ⑤充液：充液前再一次充分混匀白细胞悬液,充液要一次充好，避免充液过多、过少或断续充液，避免产生气泡及充液后移动盖玻片 ⑥计数：充液时尽量使细胞在计数室内均匀分布，白细胞总数在参考范围内时,各大方格内的白细胞数不得相差8个以上，两次重复计数误差不得超过10%，否则应重新充池计数。对压线细胞计数应遵循数上不数下、数左不数右的原则 ⑦洁净计数板：计数完毕后按要求洁净计数板，以备下次计数使用 （5）纠正有核红细胞的影响 当血液中出现较多的有核红细胞时，须按下列公式校正，校正公式如下:100校正后白细胞数/L=X*（100/100 Y）式中X:未校正前白细胞数;Y:在进行白细胞分类计数时,计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。 2)仪器误差 白细胞显微镜计数所用刻度吸管、微量吸管及改良牛鲍（Neubauer)血细胞计数板等器材均要校准。 3)计数域误差(field error)即随机误差由于每次充池后血细胞在计数池内分布不可能完全相同所造成的误差,与细胞计数的数量成反比,细胞计数数量越多，计数范围越广，误差越小，反之,误差越大。若白细胞数太低(一般<3 x10°/L)，可增加计数范围(数8个大方格内的白细胞数)或缩小稀释倍数(吸取40 pl血液);若白细胞数太高(>15 × 109/L),可适当增加稀释倍数。 .⒉经验控制 用血涂片中所见白细胞的多少粗略估计白细胞计数结果有无大的误差。血涂片要求厚薄适宜,血涂片中所见白细胞的多少与白细胞总数的大致关系如下表所示，如不符，需要复查计数结果。 3.生理状态影响 一般体力和脑力劳动、寒冷、酷热、冷热水浴、运动、剧痛和情绪激动等常出现一过性白细胞增高；一天之内白细胞数量最高值与最低值可相差1倍。另外，吸烟者白细胞总数平均较非吸烟者高30%。因此，对需要进行动态观察白细胞数量变化的患者，最好在安静平稳状态下且固定采血时间。

1.血细胞分析仪法成人:(3.5~9.5)x109/L. 显微镜计数法 成人:(4~10)x10°/L(5~12)x109/L 儿童：（5-12）*109/L 6个月-2岁：（11-12）*109/L 新生儿：（15-20）*109/L

传统上将白细胞总数高于参考区间上限(10 x10°/L)称白细胞增多；低于参考区间下限(4 x10°/L)称白细胞减少。外周血白细胞数量变化受生理和病理因素影响，一般情况下，中性粒细胞增多，白细胞总数增多;中性粒细胞减少,白细胞总数也减少。二者在数量上的相关性也表现在临床意义上的一致性,其临床意义详见中性粒细胞变化的临床意义。但是二者数量的变化也有不一致的情况，需要视具体情况进行分析。

★显微镜计数法：采用嗜酸性粒细胞稀释液（如伊红-丙酮）将血液稀释一定倍数后，红细胞和大部分其他白细胞被破坏，嗜酸性粒细胞则着色。将稀释的血液充入改良牛鲍血细胞计数板，在低倍镜下计数2个计数室共10个大方格内的嗜酸性粒细胞，经换算求出每升血液中嗜酸性粒细胞数量。

★血液分析仪法：综合运用电学、光学、化学原理

显微镜法 优点：传统方法不需要特殊仪器设备简单，费用低廉，适用基层医疗单位。 缺点：操作费时，准确性和重复性不如血液分析仪法很大程度取决操作者的技术水平和所用器材的准确性。

血液分析仪法 优点：操作简单，检测速度快，效率高，重复信号可提供嗜酸性粒细胞百分率，绝对值，直方图或散点图。 缺点：仪器成本高，需做好指控，当嗜酸性粒细胞异常增多出现出现报警半直方图或散点图异常时，应采用显微镜计数法复查。

嗜酸性粒细胞直接计数法所用的稀释液种类繁多，其作用大同小异，主要有：保护嗜酸性粒细胞破坏红细胞和中性粒使嗜酸性粒细胞颗粒着色

1.造成白细胞计数误差的各种因素,在嗜酸性粒细胞直接计数中同样要严格控制。 2.血液稀释后应在30 min~1 h内计数完毕,否则嗜酸性粒细胞会逐渐溶解破坏,使计数结果偏低,且不易识别。 3.因嗜酸性粒细胞易聚集,但又易于破碎,因此不宜用力振荡，可适当延长混匀时间。 4.观察嗜酸性粒细胞变化，应力求统一时间,以减少日间生理变化的影响。 5注意与残留的中性粒细胞区别,以免认错后使结果偏高。中性粒细胞一般不着色或着色浅淡,但其颗粒细小。 6.若嗜酸性粒细胞被破坏，可在稀释液中适当增加乙醇、丙酮等保护剂的用量，若中性粒细胞破坏不全,可适当减少保护剂的用量，调整后重新采血计数

（0.05-0.50）*109/L

1.生理性变化 (1)日间变化：健康人早晨的嗜酸性粒细胞较低，夜间较高;上午波动大,波动可达40%，下午较恒定。 (2)运动和刺激:劳动、运动、饥饿、冷热及精神刺激等,均可引起交感神经兴奋,使血液中的嗜酸性粒细胞减少

2.嗜酸性粒细胞增多 嗜酸性粒细胞增多是指成人外周血液嗜酸性粒细胞绝对值大于0.5× 10°L。 ①轻度增多:(0.5～1.5)*109 L。 ②中度增多:(1.5～5.0)x10°/L。 ③重度增多:大于5.0*10 L。 引起嗜酸性粒细胞增多的原因及可能机制见下表

3．嗜酸性粒细胞减少 嗜酸性粒细胞减少是指成人外周血液嗜酸性粒细胞绝对值小于0.05×109/L。其临床意义主要有： （1）用于观察急性传染病的病情及预后判断。传染病急性期，机体处于应激状态，肾上腺皮质激素分泌增加，嗜酸性粒细胞减少，恢复期嗜酸性粒细胞逐渐增多。如果临床症状严重，而嗜酸性粒细胞不减少，说明肾上腺皮质功能衰竭；若嗜酸 性粒细胞持续下降，甚至消失，说明病情严重。 2）作为观察预后的指标。严重组织损伤，如手术后4h，嗜酸性粒细胞常显着减低，24～48h后逐渐增多；大面积烧伤病人数小时后嗜酸性粒细胞完全消失，且持续较长时间。若大手术或大面积烧伤后嗜酸性粒细胞不减少或减少不明显，表明预不良。 3）判断垂体或肾上腺皮质功能。垂体或肾上腺皮质功能亢进时，嗜酸性粒细胞减少。因此，可通过垂体或肾上腺皮质刺激试验，观察嗜酸性粒细胞数量变化，以判断垂体或肾上腺皮质的功能

圆形，直径10-15um 胞质：粉红色，含较多细小均匀的紫红色中性颗粒 胞核：染色不均，分为N杆状核（Nst）和N分叶核（Nsg）

形态：略大于中性粒细胞 胞浆：包间内充满粗大，整齐，均匀，排列紧密，有立体感的橘红色嗜酸性颗粒。 胞核：长城分叶状，二叶居多，成眼镜状，偶见3-4，染色质出染深紫色。

胞体呈圆形，略小于中性粒细胞 胞浆：含粗大，大小不一，分布不均匀的紫黑色是碱性颗粒，颗粒长覆盖于核上，致使核的轮廓和结构模糊不清。 胞核：核分叶不明显，形态不规则

形态：直径6-15um，分为大L和小L 胞浆：小淋巴极少将内无颗粒长城裸和大淋巴包浆丰富，呈透明蓝色，常有少量粗大，大小不均的紫红色是天青颗粒。 胞核：圆形或盛行深紫红色染色质粗糙排列均匀大淋巴细胞常偏于一侧。

形态：外周血中最大的细胞，直径15*25um，胞体呈圆形或不规则形 胞浆：丰富染淡蓝色或灰蓝色，呈毛玻璃一样半透明包胶，内含大量细胞弥散分布的灰尘样，淡紫红色是天青颗粒，可见空泡。 胞核：细胞核大，呈不规则圆形，肾形，马蹄形或不规则分页，有时折叠，扭曲，染色质细致疏松，如网状染为淡紫红色

异常中性粒细胞形态

异常淋巴细胞形态

白细胞分类计数：DLC是在显微镜下观察经染色后血涂片上各种白细胞的形态进行分类技术，以求得各种白细胞的相对值和绝对值。

①观察白细胞增多症、白细胞减少症、感染、中毒、恶性肿瘤、白血病或其他血液系统疾病的白细胞变化情况。 ②评估红细胞和血小板形态

★显微镜分类计数：血涂片经Wright或Wright－Giemsa染色后在油镜下观察，根据白细胞形态学特点与染色差异进行分类计数，通常分类计数100～200个白细胞，得到各种白细胞的相 对比值或所占的百分率。根据白细胞计数的结果，计算得出每升血液中各种白细胞的绝对值。

★血液分析仪法：综合运用电学、光学、化学原理

显微镜分类计数法： 优点：经典方法，设备简单，费用低廉，并能够较准确地根据细胞的染色及其大小核质，胞质的特点等形态特征综合分析。 缺点：操作费时，结果的准确性取决于操作者对细胞形态的识别能力，要求操作者有一定的技术水平，不适合大量健康人群筛检

血液分析仪法： 优点：筛减首选方法重复性好，易于标准化，有异常结果报警提示报告形式多样，可与全自动推片染片机连接。 缺点：用于筛减不能取代显微镜分类计数法，确认白细胞的病理改变，必须涂片做显微镜复查。

1．白细胞总数与中性粒细胞

⒉嗜酸性粒细胞

⒊嗜碱性粒细胞

⒋淋巴细胞

单核细胞

临床意义