de la , le chercheur HABERLAND en 1902 énoncé le principe de totipotence cellulaire (toutes cellules végétales est capable de régénérer un autre individu identique a celle dont elle est issue

les cultures de meristemes permettent la formation de nouvelle plante saine (absence de virus ) a partir de la mise en culture des MAC qui seront dotés de 3 couches L1- permettra la formation du système foliaire,floral et caulinaire L2-permettra la formation du parenchyme, de la marge foliaire , des gamètes L3- permettra en association avec le corpus la formation du parenchyme spongieux, des vaisseaux, (petal et tige) cette zone est importante car elle contient des cellules dedifferenciés

les cultures de cals qui sont des amas de cellules dedifferenciés elle permettra la formation de nouvelle plante génétiquement identique a la plante mere a partir d'une cellule ou d'un organe de cette dernière

les cultures d'embryon immatures ( zygotic ) elle permettra d'éviter la phase de Maturation de la graine Embryon prélevé quelques jours après la fécondation

ETAPES formation de cal ( calllogene) par culture d'explant sur un milieu adapté puis transfert de ces cal dans un milieu liquide (culture sous agitation) repiquage frequent et régulier des suspensions cellulaire (tous les 7-14j) et peut varier en fonction du degré de dilution de la culture cellulaire a fin d'éviter des accumulation de CO2

isolation par méthodes enzymatique des protoplastes digestion enzymatique grâce aux cellulase et aux pectinase qui vont hydrolyses la paroie (début de la macération d'une feuille )

isolation par méthodes mécanique des protoplastes rupture mécanique des parois puis libération dues protoplastes et subprotoplastes

ensuite purification des protoplastes soit par rinçage, filtration ou contrôle

*** **Question 1 : Techniques pour générer une lignée homozygote** * **Autofécondation** : C'est la méthode naturelle pour obtenir une lignée homozygote. * **Culture in vitro végétale** : Les techniques incluent : * **Culture d'anthères ou de microspores** : Pour obtenir des plantes haploïdes. * **Culture de cellules ou de tissus suivie d'une régénération de plantes** : Pour obtenir des plantes haploïdes ou diploïdes. * **Traitement des plantes haploïdes à la colchicine** : Pour doubler le nombre de chromosomes et obtenir des plantes diploïdes homozygotes. **Question 2 : Schéma de l'autofécondation et discussion** * **Schéma** : | | LT | lt | | :---- | :---- | :---- | | **LT** | LT/LT | LT/lt | | **lt** | LT/lt | lt/lt * **Discussion** : * L'autofécondation d'un individu hétérozygote (LT/lt) produit une descendance avec les génotypes suivants : * 25 % LT/LT (homozygote dominant) * 50 % LT/lt (hétérozygote) * 25 % lt/lt (homozygote récessif) * Le phénotype récessif (petite taille) n'apparaît que chez les individus homozygotes lt/lt. * L'autofécondation successive des plantes LT/LT ou lt/lt conduit à des lignées homozygotes. **Question 3 : Schéma de la culture in vitro** * **Schéma** : 1. **Culture d'anthères ou de microspores** : * Les cellules haploïdes obtenues portent soit l'allèle LT, soit l'allèle lt. 2. **Traitement à la colchicine** : * Les cellules haploïdes sont traitées pour doubler leur nombre de chromosomes. * On obtient ainsi des cellules diploïdes homozygotes : LT/LT ou lt/lt. 3. **Régénération de plantes** : * Les cellules diploïdes se développent en plantes homozygotes : LT/LT (grande taille) ou lt/lt (petite taille).